热原反应(小绪)课件

热原反应专题小绪2014.03议题2热原反应专题家兔热原实验专题11什么是发热反应？发热的程度划分？正常情况下，体温受体温调节中枢调控，并通过神经、体液等因素使产热和散热过程动态平衡，保持体温在相对恒定的范围内；当机体在致热源（pyrogen）作用下或各种原因引起体温调节中枢的功能障碍时，体温升高超过正常范围，称为发热。程度（口温计）37.3-38℃为低热

38.1-39℃为中度发热

39.1-40℃为高热

40.1℃以上为超高热。短程发热:<2周长程发热:>2周1发热机制致热源性发热非致热源性发热外源性内源性微生物病原体、微生物产物、炎症渗出物、无菌性坏死组织、抗原抗体复合物等。不能直接作用于体温调节中枢。先作用于血液中的中性粒细胞、酸性粒细胞、单核-吞噬细胞系统，后者产生并释放内源性致热源。白细胞致热源，如IL-1，IL-6,TNF-α,INF等。通过血-脑脊液屏障直接作用于体温调节中枢的体温调节点,使调节点的温阈上升，发生重新调节，通过神经-内分泌因素使代谢增加或通过运动神经使骨骼肌阵缩产热。通过交感神经使皮肤血管及竖毛肌收缩排汗停止，散热减少。体温调节中枢直接受损产热过多散热减少1发热为何会寒战？？发热激活物致热微生物及其产物内毒素、外毒素致炎物组织蛋白分解产物抗原—抗体复合物类固醇下丘脑②体温调定点上移散热↓产热↑皮肤血管收缩骨骼肌紧张、寒战体温上升发热发病学基本环节模式图①EP单核细胞LP1发热为何会寒战？？

寒战血管改缩

发热血管扩张

寒战血管收缩

发热血管扩张体温℃调定点恢复

体温上升期

体温高峰期

体温下降期发热时相中调定点与中心温度的关系4140393837调定点上移1什么是热原反应？症状：含有热原的输液注入人体，大约半小时以后，就使人体发冷、寒战、体温升高、身痛、出汗、恶心呕吐等不良反应，有时体温可升至40℃，严重者出现昏迷、虚脱，甚至有生命危险。热原反应的温度变化曲线：因热原种类不同而有差异。一般先经过一个短的潜伏期后，温度略微上升，然后又略微下降，接着又很快上升，并出现一个高峰.作用于视丘下部体温调节中枢，可能引起5-羟色胺的升高而导致发热。热原分类：内毒素热原革兰氏阴性细菌细胞壁的组分非内毒素热原除内毒素外的热原1热原：Pyrogen内毒素：革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。发热：人体对细菌内毒素极为敏感。极微量（1-5纳克/公斤体重）内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。革兰氏阴性菌、某些球菌、病毒、螺旋体、立克次体、支原体释放内毒素激活单核巨噬细胞、白细胞肿瘤坏死因子、IL-1、IL-6、IL-6等前列腺素血小板激活因子NO等炎症介质全身炎性反应综合征、脓毒症、脓毒性休克、多器官功能衰竭、死亡介导连锁反应产生产生特异性结合1热原检查法体内热原检查法——兔温法（PT)：是一种体内的、全热原的检查方法。体外热原检查法（ITP)：细菌内毒素检查法。利用一种低温海洋动物－鲎的血细胞（变形细胞）溶解物（又称鲎试剂）与革兰阴性菌产生的细菌内毒素发生凝胶反应。

医药工业普遍接受控制内毒素等于控制热原供试品试验动物给药方法测定设备判断标准供试品溶液（输液、小针、粉针、注射用原料）家兔耳静脉注射肛温计、测温仪给药后体温变化2家兔检查法基本要素2家兔检查法基本操作步骤1、取合格兔，停食、停水，称重并固定约1小时2、每隔30分钟测温一次，连续2次温差≤0.2℃，并算得2次均值为基础体温体温。3、及时配制供试液并预热至37～38℃4、选兔并分组（初试3只/组、组内温差＜1.0℃；复试5只/组）5、注射供试液（分组后15分钟内）6、计时开始并记录6次体温，间隔0.5小时，以6次中最高温度减去该兔基础体温为升温值流程

器具除热原实验用具的除热原处理：试验用注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，洗涤，干燥，250℃,1h以上。2家兔检查法基本操作步骤1、选符合规定的家兔，称重后置于家兔固定盒内至少1h，头部固定应宽松适宜，应适用于体重不同的动物。2、每隔30min测量家兔体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，不作修约，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。平均值计算后修约保留三位有效数字，如38.90,39.0平均38.95，修约至39.0。如按（《英国药典》检查，可保留四位有效数字如38.95）。3、当日使用的家兔，正常体温应在38.0~39.6℃范围内，且同组各兔间相差不得超过1℃。5.4每个供试样品用家兔3只，在测定正常体温后15min内给药。4、供试品的配制：供试品制备完毕后应在30min内注射于家兔体内（个别品种因给药体积过大，可能超过30min）。5、注射前先用75%乙醇棉球轻擦耳静脉的注射部位，从耳缘静脉耳尖端进针，如进针不利，应顺序向前进行。6、注射完毕，拔出针头时，按住针孔下端数秒钟，止血。7、给药后每隔30分钟测量体温1次，共6次。8、温差计算：升温：注射药液后，6次测得体温中最高的一次减去正常体温，以为该兔体温的升温值，计算3只家兔体温升高总和。降温：如6次体温均低于正常体温，则升温值以“0”计。6次体温中最低的一次，减去正常体温，即为降温值。9、打印或出具结果报告具体步骤2家兔检查法关注点实验材料及设备实验准备实验动物实验环境供试液配制新兔预选家兔重复使用检查法结果判断（合格、复试、重做、不合格）2家兔检查法关注点-实验材料及设备计量设备（天平、公斤称等）电热干燥箱（可达250℃以上）恒温水浴（37～38℃）家兔固定盒热原测温仪或肛温计（测温探头或肛温计）其它用品（7#针头、12#针头、注射器、直镊、配制容器、灭菌注射用水、氯化钠注射液、酒精棉球等）2常用实验动物2常用实验动物2家兔特刊兔属于哺乳纲,啮齿目,兔科,草食性动物，性情温顺，群居性差;喜干怕热，适宜的环境温度因年龄而异，初生仔兔窝内温度30-32℃，成年兔20±2℃;有食粪特性：软粪在晚上排出，含有较丰富的粗蛋白和维生素，家兔直接由肛门吞食软粪;兔是反射性排卵的动物，生育年龄5～6年。平均寿命8年;属恒温动物，正常体温在38.5～39.5℃之间，对致热物质反应敏感，适于用作热源实验;耳大，血管清晰，便于注射和取血；眼球大，虹膜内有色素细胞，眼睛的颜色是由该色素细胞决定；2家兔检查法关注点-实验环境实验室温度：17-25℃实验室与饲养室温差：≤3℃实验温度变化：≤3℃实验室：保持安静，避免强光、噪音等刺激，注意实验兔之间相互影响。2家兔检查法关注点-新兔预选1、新兔→饲养7日以上2、预测体温（条件同热原检查）：测温8次、间隔30min。3、中选条件：体温在38.0～39.6℃，

8次测温变化≤0.4℃（可供3周使用）2家兔检查法关注点-家兔重复使用重复使用：1、结果符合规定的实验兔，休息48hr2、复试用兔升温＜0.6℃且供试品合格，休息48hr3、使用次数未达10次的实验兔4、复试用兔升温≥0.6℃且供试品合格，按新兔测温合格淘汰：结果不符合规定的实验兔2家兔检查法关注点-注射体积和速度通常给药剂量≤10ml/kg体重，并应在10分钟内完成注射。一般情况下，注射的速度和体积并不影响发热反应，大部分受试溶液可以在1-2min内注射完成，但部分受试产品具有明显和迅速的药理作用，可影响或干扰发热反应，需要缓慢进行注射。2家兔检查法关注点-结果判断合格√1、初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔升温的总和低于1.3℃（生物制品为1.4℃）可判断为符合规定。2、复试5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔总数不超过1只，并且初复试合并，8只家兔的体温升