流式细胞学课件

流式细胞学血液科流式细胞仪检测原理1.激光光源及光束形成系统：激光光源：常用的是氩离子(488nm)和氦氖离子（633nm）气体激光管；一般选配2-4根激光，488nm、633nm和355nm、407nmUV激光。最多检测13个荧光参数。2.光学系统：由若干组透镜、小孔、滤光片组成。滤光片分长通（LP）、带通（BP）、短通（SP）、二向滤光片，不同组合的滤片可以将不同波长的荧光信号送到不同的光电倍增管；3.信号检测系统：在激光检测区产生散射光和荧光信号；由光电倍增管(PMT)：将荧光信号转换为电信号，并将信号放大，通过计算机处理得到结果。流式细胞仪检测原理荧光染料标记：常用FITC(异硫氰酸荧光素）和PI(碘化丙啶）。荧光信号：每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关。原理：物质吸收一定波长的光后会发出更长波长的光。荧光信号可反映膜抗原、受体、DNA等相对数量。光源的激发波长尽可能接近染料的激发光谱峰值（吸收光波长），但发射波长（荧光波长）必须不同。因每个荧光检测器只检测特定波长的荧光信号。荧光染料种类FITC(异硫氰酸荧光素）：492nm

；530nm

绿色PE（藻红蛋白）：480nm；575nm；橙黄色PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：490nm；675nm深红色PI(碘化丙啶）：493nm；620nm橙红色 APC(别藻兰蛋白）：650nm；660nm红色滤光片分类光散射原理示意图光散射检测原理FluorescenceFALSSensorFluorescencedetector二维点图分析FCM应用1、细胞增殖周期测定和DNA倍体分析2、凋亡检测3、免疫功能的检测4、血液学应用5、HLA-B27的检测：用于诊断强直性脊柱炎。6、其他：溶液中细胞因子的测量。7、细胞分选流式细胞术的血液学应用白血病免疫分型淋巴细胞亚群造血干细胞计数：造血干细胞移植网织红细胞PNH诊断（CD55、CD59）血小板活化试验AL免疫表型检测意义鉴别淋髓系列；区分亚型；双表型、杂合型；Mo、M7；提示细胞遗传学异常；部分与预后相关；MDR监测。设门通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。设门策略不是统一的，要根据样本特征的变化而变化。FSC/SSC：不能将淋巴、幼稚、有核红细胞及单核细胞区分开。但FSC/SSC设门可去除碎片干扰。CD45/SSC：CD45是白细胞抗原，RBC、PLT为阴性。CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱。在淋巴，单核及粒细胞表达强度不同。优点：能将淋巴单核及幼稚细胞区分开，特异分析白血病细胞免疫表型。

正常骨髓细胞CD45/SSC和FSC/SSC图正常骨髓细胞CD45/SSC和FSC/SSC图R2：淋巴细胞；R3：幼稚淋巴细胞+幼稚髓细胞；R4：粒细胞（中晚幼粒+成熟中性粒+嗜酸性粒）R5：单核细胞；R6：有核红细胞。CD45荧光强度：淋巴细胞、单核细胞>嗜酸性粒细胞>中性粒细胞>红细胞、浆细胞；较成熟细胞>幼稚细胞；SSC：嗜酸性粒细胞>中性粒细胞>单核细胞、幼稚髓细胞>淋巴细胞、有核红细胞。正常血细胞分化发育过程中免疫标志变化特点以及白血病细胞免疫标志特点常用各系血细胞CD抗原1、T系：CD1-CD8（CD6不用）2、B系：CD10,CD19-CD24,FMC73、髓系：CD11b,CD13-CD16,CD33,CD644、干祖：CD34,CD117,CD38,HLA-DR正常B细胞标志正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分类T-ALL的分类正常单核细胞标志全单核细胞标志：CD33,CD13,HLA-DR幼稚单核细胞标志：CD34,CD117成熟单核细胞标志：CD14,CD64成熟粒、单核细胞主要区别成熟粒细胞：CD33+HLA-DR-CD14-CD64+dim成熟单核细胞：CD33++HLA-DR+CD14+CD64++诊断白血病主要标志：B-ALL:

CD34,HLA-DR,CD19,CD10+/-,cCD79aT-ALL:

CD34,CD38,CD7,CD2+/-,CD5+/-,cCD3AML:

CD34,CD117,CD33,CD13,cMPO M3:

CD34（-）,HLA-DR（-），淋系（-），单核（-） M2:

CD19+:t(8,21) M4/M5:CD14+ M6:GlyA+,CD71+ M7:IIb/IIIa(CD41,CD61)+双表型急性白血病诊断的积分系统

(EGIL,1998)..流式常见图形

(