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灵芝三萜类物质抗高血压实验研究

作者:刘冬孙海燕

李世敏【关键词】

灵芝;,,三萜类物质;,,降压;,,子实体;,,菌丝体摘要:目的研究灵芝三萜类物质对原发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats,SHR)的降压作用。方法以SHR和正常wistarkyoto(WKY)大鼠为实验对象,1次ig给药,观察灵芝三萜类物质对SHR和WKY血压的影响。结果给药剂量分别为450mg/kg(体重)和900mg/kg(体重)时,灵芝三萜类物质对SHR大鼠具有显著降压效果(P<0.05或P<0.01),3h后降压幅度分别达(20.5±11.9)mmHg和(25.1±13.8)mmHg;给药3h后SHR血压降至最低点,此后15h内血压趋于稳定,15h后SHR血压开始回升,至21h血压基本恢复到给药前水平,且灵芝三萜类物质对正常WKY大鼠无明显降压作用。相同质量(45g)灵芝子实体和菌丝体灵芝三萜提取物喂食SHR大鼠,子实体提取物具有明显降压效果(P<0.05),而菌丝体提取物降压效果不明显。结论灵芝三萜类物质对SHR大鼠具有明显的降压作用。关键词:灵芝;

三萜类物质;

降压;

子实体;

菌丝体StudyonAntihypertensiveEffectofTriterpenesFromGanodermaluciduminvivoAbstract:ObjectiveTostudytheantihypertensiveeffectoftriterpenesonspontaneouslyhypertensiverats(SHR)invivo.MethodsThesystolicbloodpressure(SBP)oftheSHRandtheWKYweremeasuredaftertakingdifferentdosesbyig.ResultsTheresultsshowedthattriterpenesmarkedlyreducedthesystolicbloodpressure(SBP)ofSHRatasingledosageof900mg/kgbodyweightor450

mg/kgbodyweight,theSBPdecreasedto(20.5±11.9)mmHg

and(25.1±13.8)mmHgat3hafteradministrationrespectively,theeffectwasmaximalat3hafteradministrationandcouldlast15h,SBPbegantoriseat15handreturnedtoinitiallevelat21hafteradministration.

However,thetriterpenesdidnotchangetheSBPofnormotensiveWistar-Kyoto(WKY)ratssignificantly.

TriterpenesextractfromfermentedmyceliacouldnotreducetheSBPofSHRsignificantly,comparedwiththeantihypertensiveeffectoftheextractfromthefruitingbodyofthesamequality.ConclusionGanodermatriterpeneshavetheantihypertensiveeffectonSHRinvivo.

Keywords:Ganodermalucidum;

Triterpene;

Antihypertension;

Fermentedmycelia;

Fruitingbody

灵芝在我国已有两千多年的药用历史。它具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、治疗和预防心血管疾病等多种功效。灵芝中最主要的活性成分是灵芝多糖和灵芝三萜。灵芝多糖的增强机体免疫力等功效已通过大量的研究报道而得到公认。灵芝三萜(triterpenes)是近年来从灵芝中分离得到的另一类具有广泛药理活性的物质,是当今灵芝研究的又一热点。研究表明灵芝三萜具有保肝护肝、抗肿瘤、抗HIV1及HIV1蛋白酶活性、抑制胆固醇合成、镇痛、降血脂等多种药理作用[1]。此外,Morigiwa等[2]还报道从红芝的70%乙醇提取物中分离出的8种灵芝三萜具有体外抑制猪肾血管紧张素转化酶(agiotensinconvertingenzyme,ACE)活性的作用。ACE的高活性是高血压病发病的重要因素,因此推断灵芝三萜可能具有体内降低血压功效,但至今未见灵芝三萜降血压效果动物实验研究报道。本文针对这一问题,研究了灵芝三萜类物质的体内降压作用,并比较了灵芝菌丝体和子实体的降压效果。1

器材1.1

药品1.1.1

灵芝子实体由赤芝GanodermalucidumAs.565栽培,为成熟期子实体,菌种由中科院广州微生物研究所提供。1.1.2

灵芝菌丝体由赤芝菌种As.565按文献介绍的方法(无锡轻工大学,王林,2004硕士论文《灵芝酸发酵及抗慢性支气管炎活性研究》)经深层液体培养制得,培养时间100h。1.1.3

灵芝三萜类物质粗样品称取粉碎、烘干灵芝子实体,按1∶50(m/m)加入无水乙醇,超声1h,45℃水浴回流浸提24h,0.45μm滤膜过滤,滤液45℃减压浓缩得黑色浸膏,浸膏复溶于CHCl3中,用饱和NaHCO3溶液(体积比为1∶1)萃取3次,取NaHCO3溶液层,用6mol/L盐酸酸化至pH3~5后用等量CHCl3再萃取3次,合并CHCl3层,减压浓缩得淡黄色粉状固体,即为灵芝三萜(酸性组分)组样品。用分光光度法[3]测定粗样中灵芝三萜物质含量。备用。1.1.4

卡托普利(Captopril)汕头金石制药总厂生产,批号050106。1.2

动物原发性高血压大鼠SHR和正常血压大鼠WKY,12周龄,体重250~300g,全部为雄性,由上海斯莱克实验动物有限责任公司〔(许可证号:SGXK(沪)20020010〕提供。标准颗粒饲料喂养。1.3

仪器多道生理信号采集处理系统RM-6240BD,四川成都仪器厂;恒温电子烘箱,上海医疗器械厂。2

方法2.1

动物筛选SHR大鼠50只,测量尾动脉血压,收缩压高于180mmHg用于实验,低于180mmHg的予以剔除;最终40只符合实验要求。WKY大鼠30只,测量尾动脉血压,收缩压低于140mmHg的用于实验,高于140mmHg的予以剔除;最终24只符合实验要求。所有大鼠分笼饲养,每笼2只,均自由饮水进食,活动不限。温度:(25±1)℃,湿度:(55±5)%,光照和黑暗各12h。所有大鼠均于实验前训练1周后开始正式实验。2.2

大鼠血压测量方法采用尾动脉容积法[4]。测量收缩压(systolicbloodpressure,SBP),以mmHg表示(1mmHg≈0.133kPa)。2.3

统计分析数据均以±s表示,采用组间t检验,P<0.05为具有显著的统计学差异。2.4

灵芝三萜降压效果实验2.4.1

不同剂量灵芝三萜对SHR血压影响取SHR大鼠24只,均衡随机分为5组:①空白对照组;②灵芝三萜大剂量组(900mg/kg);③灵芝三萜中剂量组(450mg/kg);④灵芝三萜小剂量组(225mg/kg);⑤卡托普利组(10mg/kg)。各组分别测定给药前收缩压。灵芝三萜组和卡托普利组灌胃给药1次,空白对照组给予等量生理盐水,分别测定各组给药后3h的血压。计算给药前后血压变化的差值进行统计。结果见表1。2.4.2

单次给药后SHR大鼠24h血压变化测定取SHR大鼠16只,均衡随机分为2组:①空白对照组;②灵芝三萜组(450mg/kg)。分别灌胃给予生理盐水和灵芝三萜粗样1次,测定给药后24h内血压变化情况。2.4.3

灵芝三萜对WKY大鼠血压的影响WKY大鼠24只,均衡随机分为3组:①空白对照组;②灵芝三萜组(450mg/kg),③卡托普利组(10mg/kg)。灵芝三萜组和卡托普利组灌胃给药1次,空白对照组给予等量生理盐水,分别测定各组给药后24h内血压变化情况。结果见图2。2.4.4

灵芝子实体和菌丝体三萜类物质降压效果比较分别取45g灵芝子实体和菌丝体按1.1方法制备灵芝三萜粗样(灵芝三萜类物质含量分别为(0.47g和0.13g),提取物分别全部溶于5ml水中。SHR大鼠24只,均衡随机分为3组:①空白对照组;②灵芝子实体三萜组;③灵芝菌丝体三萜组。各组分别测定给药前收缩压。灵芝三萜各组灌胃给药1次,空白对照组给予等量生理盐水,测定给药3h后血压变化。计算给药前后血压变化的差值进行统计。3

结果3.1

不同剂量灵芝三萜对SHR血压的影响见表1。表1

不同剂量灵芝三萜类物质对SHR血压的影响(略)与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;n=8结果表明,与空白对照组相比,灵芝三萜小剂量组给药前后血压变化无显著性差异(P>0.05);灵芝三萜中剂量组可以明显降低SHR大鼠血压(P<0.05),灵芝三萜大剂量组药后3h血压降低幅度达(25.1±13.8)mmHg,呈非常显著变化(P<0.01),且用药剂量和效果之间存在着较好的量-效关系。表明,灵芝三萜类物质不但具有如文献报道的体外抑制ACE生物学活性,而且具有高效的体内降血压活性。3.2

灵芝三萜单次给药后SHR大鼠24h血压变化见图1。图1

单次给药后24h内SHR收缩压的变化(略)结果表明,空白对照组SHR24h血压都处于较平稳状态。SHR大鼠给药后血压开始下降,3h降至最低点(179.2±9.3)mmHg,与空白对照组比较血压降低显著(P<0.05),3h后血压不再继续下降,从3~15h血压趋于稳定,从第15h血压开始上升,直至21h时,血压基本恢复给药前水平。3.3

灵芝三萜对WKY大鼠血压的影响见图2。图2

单次给药后24h内WKY收缩压的变化(略)图2显示,空白组WKY大鼠自身血压在24h之内变化范围在117~121mmHg之间,但呈不显著性波动(P>0.05)。灵芝三萜给药组,给药后3h血压降至最低点血压(117.0±4.3)mmHg,但与空白组比较血压降低无显著性差异(P>0.05)。卡托普利组,给药后4h血压降至最低点血压(113.8±7.6)mmHg,与空白组比较也无显著性差异(P>0.05)。说明,灵芝三萜类物质对正常大鼠的血压无显著的降压作用。3.4

灵芝子实体和菌丝体三萜类物质降血压效果比较相同质量的灵芝子实体和菌丝体经提取后,对SHR的降血压效果见表2。表2

灵芝子实体和菌丝体降血压效果比较(略)与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;n=8结果表明,相同质量(45g)灵芝子实体和菌丝体灵芝三萜提取物喂食SHR大鼠,子实体提取物具有明显降压效果(P<0.05),而菌丝体提取物降压效果不明显,其原因可能是灵芝菌丝体经过100h的培养,灵芝三萜类物质含量仍然很低,而子实体中具有降压作用的灵芝三萜含量较高,这与邢增涛等[5]对不同品种灵芝中三萜类化合物的比较研究报道一致。4

讨论高血压病的发病机理多样,其中肾素血管紧张素系统(reininangiotensinsystem,RAS)中血管紧张素转化酶(ACE)活性异常增高导致强收缩血管物质AngII增多引起血压升高是重要机理之一。临床广泛应用的ACEI药物通过抑制ACE的活性而降低血压。Morigiwa等[2]首次报道了8个灵芝三萜类化合物在体外对ACE酶的作用,发现ganodericacidF对ACE抑制作用最显著,其IC50为4.7×106mol・L1,说明灵芝三萜类物质也是一类ACE抑制剂,通过抑制ACE活性而降低血压。本研究表明,灵芝三萜类物质经口服给药对SHR大鼠具有显著降压效果,且灵芝三萜类物质对正常WKY大鼠无明显降压作用,从而进一步表明,灵芝三萜类物质不但具有如文献报道的体外抑制ACE生物学活性,而且具有高效的体内降血压活性。本研究也表明,相同质量(25g)灵芝子实体和菌丝体,其灵芝三萜提取物经喂食SHR大鼠,子实体提取物具有明显降压效果,而菌丝体提取物降压效果不明显,说明菌丝体中三萜类物质含量较少。灵芝三萜类化合物可通过从灵芝子实体或发酵菌丝体中获得,其中通过深层液体发酵法获取菌丝体再制备灵芝三萜类物质可以缩短生产周期而成为近几年的研究热点,但SheauFarnYeh和RongsueyChyr等[6,7]的研究表明,液体发酵培养至7d时灵芝菌丝体的三萜类化合物的含量很低,培养至30d左右时才达到高峰,因此,如果希望通过液体发酵来获得以灵芝三萜类化合物为主的产品,必须通过菌种的筛选、发酵条件的优化及适当延长培养时间来实现。参考文献:[1]

俊,林志彬.灵芝三萜类化合物药理作用研究进展[J].药学学报,2002,37(7):574.[2]

MorigiwaA,KitabatakeK,FujimotoY,etal.Angiotensinconvert

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