实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件

<)东林煮大学基础性实验实验六大肠杆菌质粒DNA的提取及检测<)东林煮大学1实验目的掌握碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理和方法。掌握离心机、移液器、震荡培养箱的正确使用方法。·了解不同构型的质粒DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的差异。实验目的2实验原理质粒是存在于细菌染色体外的能够自主复制的环状DNA分子。大小在1~200kb之间,质粒DNA通常以游离状态持续稳定地处于染色体外(在一定的条件下又会可逆地整合到寄主染色体上),随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。由于质粒DNA自身具有复制原点、可携带外源基因转移性强、拷贝数高、带有选择性标记等特点,使得质粒成为基因工程中最常用的DNA载体。实验原理3实验原理●质粒DNA分子具有3种不同的构型:sC构型:共价闭合环形DNA(CCCDNA),质粒的两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构;Oc构型:开环DNA(OCDNA),质粒的两条多核苷酸链中一条保持着完整的环形结构,另一条链存在处至多处断裂;L构型:线性DNA(linearDNA),质粒DNA发生双链断裂而形成线性分子。实验原理4实验原理●同一质粒DNA的不同构型尽管相对分子质量相同但在琼脂糖凝胶电泳中的电泳迁移率却是不同的般情况下,泳动速率由快至慢依次为:超螺旋质粒(Sc)、线性质粒(L)、开环质粒(Oc)●质粒DNA的提取方法较多,要根据宿主菌和质粒的特性选择适合的提取方法。目前常用的质粒提取方法有:碱裂解法、煮沸法。●几种方法的提取流程是一样的:培养细菌扩增质粒收集菌体裂解细胞→分离和纯化质粒DNA。实验原理5实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件6实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件7实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件8实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件9实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件10实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件11实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件12实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件13实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件14实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件15实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件16实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件17<)东林煮大学基础性实验实验六大肠杆菌质粒DNA的提取及检测<)东林煮大学18实验目的掌握碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理和方法。掌握离心机、移液器、震荡培养箱的正确使用方法。·了解不同构型的质粒DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的差异。实验目的19实验原理质粒是存在于细菌染色体外的能够自主复制的环状DNA分子。大小在1~200kb之间,质粒DNA通常以游离状态持续稳定地处于染色体外(在一定的条件下又会可逆地整合到寄主染色体上),随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。由于质粒DNA自身具有复制原点、可携带外源基因转移性强、拷贝数高、带有选择性标记等特点,使得质粒成为基因工程中最常用的DNA载体。实验原理20实验原理●质粒DNA分子具有3种不同的构型:sC构型:共价闭合环形DNA(CCCDNA),质粒的两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构;Oc构型:开环DNA(OCDNA),质粒的两条多核苷酸链中一条保持着完整的环形结构,另一条链存在处至多处断裂;L构型:线性DNA(linearDNA),质粒DNA发生双链断裂而形成线性分子。实验原理21实验原理●同一质粒DNA的不同构型尽管相对分子质量相同但在琼脂糖凝胶电泳中的电泳迁移率却是不同的般情况下,泳动速率由快至慢依次为:超螺旋质粒(Sc)、线性质粒(L)、开环质粒(Oc)●质粒DNA的提取方法较多,要根据宿主菌和质粒的特性选择适合的提取方法。目前常用的质粒提取方法有:碱裂解法、煮沸法。●几种方法的提取流程是一样的:培养细菌扩增质粒收集菌体裂解细胞→分离和纯化质粒DNA。实验原理22实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件23实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件24实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件25实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件26实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件27实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件28实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件29实验六大肠杆菌质粒DNA提取与电泳检测课件3