药分实验讲义-理科基地探讨

实验七四苯硼钠双相滴定法测定有机碱的含量1目的要求熟悉和掌握双相滴定法的基本操作要点及终点指示的基本原理。2测定原理季铵盐化合物可与溴酚蓝或麝香草酚蓝等酸性染料形成离子对，同样四苯硼钠也能与季铵盐生成离子对，但两者结合的稳定性不同，后者大于前者，故可利用该酸性燃料作为以四苯硼钠直接滴定季铵盐类时的指示剂。当滴定近终点时，溴酚蓝逐渐从离子对中游离析出。因其不溶于氯仿，在剧烈振摇下，转溶于水层呈浅紫色，滴定至氯仿蓝色消失，即为终点。应用实例一：苯扎溴铵溶液的测定精密量取本品5ml，置具塞锥形瓶中，加水50ml与氢氧化钠试液1ml，摇匀，加溴酚蓝指示剂0.4ml与氯仿10ml，用四苯硼钠滴定液(0.02mol/L)滴定，将近终点时必须强力振摇，至氯仿层的蓝色消失，即得。每1ml的四苯硼钠滴定液(0.02mol/L)相当于7.969mg的C22H40BrN。应用实例二：度米芬滴丸的测定取本品20丸，置50ml量瓶中，加水适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，置250ml具塞锥形瓶中，加水50ml，加1%碳酸氢钠溶液2ml，摇匀，加氯仿10ml与溴酚蓝指示液8滴，用四苯硼钠滴定液(0.02mol/L)滴定，将近终点时必须强力振摇，至氯仿层的蓝色消失。每1mll的四苯硼钠滴定液(0.02ml/L)相当于8.650mg的C22H40BrNO·H2O。注意事项双相滴定操作的关键是滴定速度要慢，每加一滴都要充分摇匀，以保证在二相间达到平衡。终点的确定至少要强烈振摇三分钟后观察氯仿层颜色消失即为终点。6思考题试以反映式说明双相滴定法测定苯扎溴铵的基本原理。双相滴定法操作的关键是什么？如果振摇不充分会出现什么现象，为什么？

7.1苯扎溴铵溶液：《中国药典（2000年版）》二部，第361页7.2度米芬滴丸：《中国药典（2000年版）》二部，第527页实验八非水滴定法测定原料药含量的方法学考察(开放实验)目的要求掌握非水碱量法的特点，溶剂的选择，一般原理及操作要点。测定原理碱性很弱的杂环类、胺类化合物在无水冰醋酸的溶剂中，可被冰醋酸调平到溶剂阴离子Acˉ的碱强度水平，选用适当的指试剂，即可用高氯酸滴定液直接进行滴定。其反应如下：滴定溶液：HClO4+HAc H2Ac++ClO4—供试品溶液：R—NH2+HAcRNH3++Ac—滴定反应：Ac-+H2Ac+ 2HAc总式：R—NH2+HClO4RNH3++ClO4—应用实例一：硫酸奎宁取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液1～2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg的(C20H24N2O2)2·H2SO4。应用实例二：咖啡因取本品约0.15g，精密称定，加醋酐—冰醋酸(5:1)的混合液25ml，微热使溶解，放冷，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显黄色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于19.42mg的C8H10N4O2。应用实例三：盐酸苯海拉明取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml与醋酐4ml溶解后，再加醋酸汞试液4ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于29.18mg的C17H21NO·HCl。注意事项

注意节省溶剂，用后回收。为了节省溶剂，先做空白，然后将空白液倒入样品中，继续滴定至终点。所用仪器必须干燥无水。滴定速度不要太快，因冰醋酸比较粘稠，滴定速度太快黏附在滴定管内壁上部的溶液还未完全流下，到终点时读数易发生误差。冰醋酸中绝大部分分子是呈氢键缔和的团状二聚合物，故沸点较高（118℃）。冰醋酸沸点虽高，但具挥发性，滴定管上部应取一个干燥小烧杯覆盖，以防止挥发。冰醋酸具有腐蚀性，应小心，注意安全。标定滴定液的温度与测定样品时的温度相差 10℃时，应校正滴定液的浓度：M1M1=Mo10.0011t1t0式中：0.0011为冰醋酸膨胀系数，t0为标定时的温度，t1为测定时的温度，M0为标定时的浓度，M1为测定时的浓度。7思考题配制高氯酸滴定液（0.1mol/L）1000ml，需加高氯酸（含量为70%，比重为1.75）8.5ml。要除去8.5ml高氯酸中的水分应加比重为1.08，含量为97%的醋酐多少ml？咖啡因的测定也用冰醋酸溶解后就滴定行吗？为什么加醋酐？在硫酸奎宁的测定中，其化学计量关系是怎样确定的？8附录电位滴定法将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上，浸入电极，搅拌，并自滴定管中分次滴加滴定液；开始时可每次加入较多的量，搅拌，记录电位；至将近终点前，则应每次加入少量，搅拌，记录电位；至突跃点已过，仍应继续滴加几次滴定液，并记录电位。滴定终点的确定用坐标纸以电位（E）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制E-V曲线，以此曲线的陡然上升或下降部分的中心为滴定终点。或以ΔE/ΔV（即相邻两次的电位差与加入滴定液的体积差之比）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制（ΔE/ΔV）-V曲线，与ΔE/ΔV的极大值对应的体积即为滴定终点。也可采用二阶导数确定终点。根据求得的 ΔE/ΔV值，计算相邻值间的差值，即Δ2E/ΔV2，绘制（Δ2E/ΔV2）-V曲线，曲线过零时的体积即为滴定终点。如系供指示剂变色域的选择核对，滴定前加入指示剂，观察终点前至终点后的颜色变化，以选定该品种终点时的指示剂颜色。9参考文献硫酸奎宁：《中国药典（2000年版）》二部，第882页咖啡因：《中国药典（2000年版）》二部，第387页盐酸苯海拉明：《中国药典（2000年版）》二部，第626页电位滴定法：《中国药典（2000年版）》二部附录VIIA，附录第47页实验九氧化还原滴定法测定药物的含量目的要求掌握溴酸钾法测定异烟肼含量的原理和操作方法，了解以甲基橙为指示剂的终点判断方法。2原理异烟肼可在强酸性下用溴酸钾溶液直接滴定，其反应式为：CONNHNH滴定到达终点后，稍过量的BrO3ˉ与反应生成的Brˉ作用，产生Br2，则微量的Br2使指示剂的结构发生变化而褪色，以示终点。应用实例一：异烟肼的含量测定取本品约0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取25ml，加水50ml、盐酸20ml与甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。每1ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。应用实例二：异烟肼片的含量测定取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于异烟肼 0.2g），置100ml量瓶中，加水适量，振摇使异烟肼溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液25ml，照异烟肼项下的方法，自“加水50ml、盐酸20ml”起，依法测定。每1ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。注意事项缓缓滴定并充分振摇，防止局部浓度过高，以免终点提前。到达终点后补加一滴指示剂，如褪色即到终点；不褪色，则未到终点。参考文献异烟肼：《中国药典（2000年版）》二部，第257页异烟肼片：《中国药典（2000年版）》二部，第258页实验十双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用目的要求掌握双波长分光光度法的基本原理。基本原理当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要测定b组分的含量，利用双波长分光光度法能消除a组分的干扰。方法是选取两个波长λ1和λ2(如图A)，使组分a在这两个波长处的吸收相等，而对欲测组分b在这两个波长处的吸收度有显著的差别。在这两个波长处测得的混合物c的吸收度之差ΔA只与b组分的浓度成正比，而与组分a的浓度无关。因此，可以消除组分a的干扰，直接测得组分b的浓度，用数学式表达如下：ΔAc=ΔAa+b=Aλ1a+b―Aλ2a+b=Aλ1a+Aλ1b―Aλ2a―Aλ2b∵Aλ1a=Aλ2a∴ΔAc=Aλ1b―Aλ2b=(Eλ1b―Eλ2b)Cb=KCb同理可测得组分a的浓度。图A双波长分光光度法示意图图图A双波长分光光度法示意图0.1mol/L盐酸溶液中的紫外吸收光谱应用实例：安钠咖注射液的含量测定3.1仪器与药品仪器：WFZ—800D2分光光度法试剂与药品：苯钾酸钠、盐酸均为分析纯，咖啡因为纯品，安钠咖注液为市售品。3.2测定方法安钠咖注射液由咖啡因和苯甲酸钠组成（分别为 120mg/ml和130mg/ml）。二者的紫外吸收光谱相互重叠（见图 B）。利用双波长分光光度法可消除干扰，分别进行定量。3.2.1参比波长的选择标准贮备液的制备分别精密称取咖啡因及苯甲酸钠对照品适量，分别用0.1mol/L盐酸液溶解并稀释成浓度为0.1mg/ml的溶液，摇匀，备用。测定咖啡因时参比波长的选择精密吸取苯甲酸钠标准贮备液5ml，置50ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液稀释至刻度，摇匀。照紫外分光光度法，在波长250～255nm的波长范围内，于各波长处测定吸收度，找出与波长272nm（咖啡因的最大吸收波长）处吸收度相等的波长λb，此λb即为测定咖啡因的参比波长。测定苯甲酸钠时参比波长的选择精密吸取咖啡因标准贮备液 5ml，置50ml量瓶中，用0.1mol/L盐酸液稀释至刻度，摇匀。照紫外分光光度法，在波长255～260nm的波长范围内，于各波长处测定吸收度，找出与波长230nm（苯甲酸钠的最大吸收波长）处吸收度相等的波长λc。此λc即为测定苯甲酸钠的参比波长。对照品溶液的制备分别精密量取咖啡因及苯甲酸钠标准贮备液5ml，共置于50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸液稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密量取注射液1.0ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0ml，置另一50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。再精密量取10.0ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸液稀释至刻度，摇匀，即得。测定以0.1mol/L盐酸溶液为空白，分别在272nm、λb、230nm和λc的波长处测定供试品溶液及对照溶液的吸收度，根据ΔAc=A272-Aλb ΔAb=A230-Aλc分别求出ΔAc标、ΔAb标、ΔAC样及ΔAb样，按标准对照法分别求出咖啡因及苯甲酸钠的含量。4思考题双波长分光光度法如何消除干扰物的影响？双波长分光光法中选择波长时应注意哪些问题？实验十一紫外分光光度法测定药物含量的方法学研究（开放实验）目的要求掌握确证分析方法的效能指标内容和要求。熟悉建立分析方法的基本思路。应用实例：对乙酰氨基酚片的含量测定方法学研究线性与浓度范围取对乙酰氨基酚对照品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2，4，6，8，10，12ml，置100ml量瓶中，加入0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度。将浓度C对吸收度A回归，得线性回归方程：A=a+bC（r= ，n=6）。线性浓度范围：0.32~1.92mg/ml。回收率试验取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），共6份，置250ml量瓶中，按1：1比例，分别向其中加入对乙酰氨基酚对照品，其余照“供试品测定法”项下的方法操作，按标准曲线法或百分吸收系数法计算回收率。精密度试验照“供试品测定”项下的方法操作，计算片剂含量相当于标示量的百分数（通常用“标示量%”表示），6份测定结果的相对标准偏差（RSD%）即为精密度试验结果。供试品测定法取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml及水50ml，振摇15分钟，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液 5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光1%度法，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数（E11c%m）为7151cm计算。溶液稳定性考察取供试品溶液，在室温放置，分别于 1，2，4，6小时测定吸收度，考察其变化。参考文献对乙酰氨基酚片：《中国药典（2000年版）》二部，第257页《药物分析》（第四版），人民卫生出版社，第72页实验十二高效液相色谱法的色谱条件优化与系统适用性试验（开放实验）目的要求掌握高效液相色谱法色谱条件及系统适用性试验的内容。了解优化色谱条件的基本思路。应用实例一：高效液相色谱法测定法莫替丁片色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以庚烷磺酸钠溶液（取庚烷磺酸钠2.0g，加水900ml溶解后，用冰醋酸调节pH值至3.9，加水至1000ml）-乙腈-甲醇（比例由学生筛选）为流动相；检测波长由学生筛选。理论板数、分离力度由学生计算。测定法取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于法莫替丁50mg），置50ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使法莫替丁溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml，至50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取经五氧化二磷 80℃减压干燥4小时的法莫替丁对照品50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算标示量的百分含量。应用实例二：高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（pH5.0）（取磷酸二氢钾13.6g，加水溶解后稀释到2000ml，用8mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0±0.1）-乙腈（比例由学生筛选）为流动相；流速由学生筛选；检测波长由学生筛选。理论板数、分离度由学生计算。测定法取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量，加磷酸盐缓冲液（pH5.0）溶解并稀释成每1ml约含0.6mg的溶液，滤过，取续滤液，照阿莫西林项下的方法测定。附：阿莫西林的含量测定方法测定法取本品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH5.0）溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中阿莫西林（C16H19N3O5S）的含量。参考文献法莫替丁片：《中国药典（2000年版）》二部，第425页4.2阿莫西林胶囊：《中国药典（2000年版）》二部，第339页实验十三气相色谱法在中药材挥发性成分测定中的应用目的要求掌握气相色谱法测定挥发性成分的原理。了解气相色谱法在药物分析中应用的一般方法。应用实例一：冰片的含量测定色谱条件与系统适应性试验以聚乙二醇（PEG）-20M为固定相，涂布浓度为10%；柱温为140℃。理论板数按龙脑峰计算应不低于 1900。校正因子测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加醋酸乙酯制成每1ml含5mg的溶液，作为内标溶液。另取龙脑对照品 50mg，精密称定，置10ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取 1μl，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法取本品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，用内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。本品含龙脑（C10H18O）不得少于55.0%。应用实例二：肉桂油的含量测定色谱条件与系统适应性试验以聚乙二醇（PEG）-20M为固定相，涂布浓度为10%；柱温为190℃。理论板数按桂皮醛峰计算应不低于 3000。对照品溶液的制备取桂皮醛对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含4mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 3μl，注入气相色谱仪，测定，即得。本品含桂皮醛（C9H8O）不得少于75.0%。参考资料冰片：《中国药典（2000年版）》一部，第113页肉桂油：《中国药典（2000年版）》一部，第105页实验十四高效液相色谱法在中药制剂有效成分测定中的应用目的要求掌握高效液相色谱法测定中药制剂有效成分的原理。了解高效液相色谱法在药物分析中应用的一般方法。应用实例一：双黄连口服液中黄芩苷的含量测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 -水-冰醋酸(50∶50∶1)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含黄芩苷0.1mg)。供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5μl,注入液相色谱仪，测定，即得。本品每支含黄芩按黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于80mg。应用实例二：护肝片中五味子乙素的含量测定色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 -水(72∶28)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按五味子乙素峰计算应不低于6000。对照品溶液的制备取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加正己烷适量，浸泡过量，于 80～85℃回流提取6小时，提取液低温蒸干，残渣加甲醇微热使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含五味子以五味子乙素(C23H28O6)计，不得少于0.15mg。参考文献双黄连口服液：《中国药典（2000年版）》一部，第418页护肝片：《中国药典（2000年版）》一部，第474页实验十五体内药物分析之一——分析方法的建立与确证（开放实验）目的要求掌握体内药物分析方法建立需要考察的效能指标。熟悉生物样本的预处理方法。应用实例：人血浆中美洛昔康的分析方法建立与确证2.1仪器与试药高效液相色谱仪系统（包括紫外检测器，色谱数据处理软件）；美洛昔康与吡罗昔康对照品；美洛昔康片；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂为分析纯；人空白血浆。2.2溶液的制备内标溶液的制备：取吡罗昔康对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml含8μg的溶液；标准溶液的制备：取美洛昔康对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.5mg的贮备液，分别用甲醇依次稀释制成 0.2、0.5、1.5、5.0、10.0和15.0μg/ml的标准系列溶液，于4℃冰箱中保存。2.3色谱条件色谱柱：ODS柱；流动相：乙腈-甲醇-0.05mol/L磷酸二氢铵溶液-三乙胺（体积比22﹕6﹕64﹕0.04）；检测波长：361nm；柱温：室温。2.4血浆样品预处理取血浆0.5ml，于10ml具塞试管中，依次加入内标溶液50μL、3.0mol/L的磷酸溶液100μl、正己烷-二氯甲烷-异丙醇（体积比300﹕150﹕15）提取溶剂2ml，旋涡混合1min，振荡10min，离心（3000r/min）10min。分离上层有机相，40℃氮气流下吹干。残留物加流动相200μl溶解，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。2.5分析方法的确证2.5.1专属性分别取10名健康志愿者的空白血浆0.5ml，按“血浆样品预处理”项下方法操作（不加内标），获取空白血浆色谱图。分别将一定浓度的美洛昔康和吡罗昔康对照品溶液加到空白血浆中，同法操作，获取空白血浆加美洛昔康与内标物色谱图。取健康志愿者给药后采集的血浆样品 0.5ml，依同法操作，获取受试者口服给药后1小时的血浆样品色谱图；结果应表明，血浆中内源性物质不干扰美洛昔康和内标物的测定，且二者的峰形与分离度较好。2.5.2标准曲线与线性范围取健康志愿者空白血浆0.5ml，分别加入美洛昔康标准系列溶液50μL，使相应血浆浓度分别为0.020、0.050、0.10、0.50、1.0、2.0μg/ml，按“血浆样品预处理”项下的方法操作；以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰高比值为纵坐标，用加权最小二乘法[1]进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线。本方法在0.020~2.0gμ/ml范围内线性良好。最低定量浓度为0.020μg/ml。2.5.3精密度与准确度取空白血浆0.5ml，按“标准曲线”项下的方法配制低、中、高 3个浓度（分别为0.020、0.50、2.0μg/ml）的质量控制（QC）样品，进行6样本分析，连续测定3d，并与标准曲线同时进行，计算QC样品的浓度。计算精密度与准确度。数据结果应符合目前生物分析方法有关国际规范的要求 [2]。2.5.4提取回收率分别取如前所述低、中、高3种浓度的标准系列溶液，按“血浆样品预处理”项下操作，以提取后的色谱峰高度与提取前的色谱峰高度之比，考察样品的提取回收绿率。每一浓度进行6样本分析。计算3种浓度下样品的提取回收率。2.5.5样品溶液稳定性考察美洛昔康水溶液（4℃）、甲醇溶液（4℃）放置24小时的稳定性。参考文献钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题 .药物分析杂志，1996，16：309-312ShahVP,MidhaKK,DigheS,etal.Analyticalmethodsvalidation:bioavailability,bioequivalenceandpharmacokineticstudies.JPharmSci,1992,81:309-312徐海燕等，用高效液相色谱方法测定人血浆中美洛昔康浓度 .沈阳药科大学学报，2000，17（5）355-357实验十六体内药物分析之二——药时曲线及药物动力学参数的测定（开放实验）目的要求掌握体内药物分析数据的处理方法。熟悉药物动力学模型及参数的种类和意义。应用实例：人唾液中扑热息痛的药时曲线及药物动力学参数的测定2.1实验材料仪器：分光光度计，离心机药品与试剂：扑热息痛片（0.5g/片），扑热息痛对照品，邻甲酚、三氯醋酸、浓氨溶液均为分析纯。2.2服药方法隔夜、禁食7小时，口服两片扑热息痛，以150ml水送服。分别于0、15、30、45、60、90、120、150、180和240分钟收集唾液2ml，置离心管中，离心（3000r/min）3分钟，取上清液1.0ml，供测试。为取样顺利，在取样前可用150ml水漱口除去口腔内异物并将水吞服。若收集唾液有困难时，可在舌上含枸橼酸 10mg，1～2分钟后再行取样。2.3标准曲线的制备扑热息痛（APAP）标准溶液：取扑热息痛对照品约100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇20ml溶解，加水稀释至刻度，摇匀。吸取1.0、2.0、3.0、4.0和5.0ml，置于100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（含APAP分别为10、20、30、40、50μg/ml）。标准曲线的制备：取上述标准溶液各1.0ml，置10ml带塞试管中，加20%三氯醋酸1.0ml摇匀，置沸水浴上加热20分钟，冷至室温，加1%邻甲酚溶液1.0ml，摇匀，再加4mol/L氨溶液2.0ml，混匀，置沸水浴上加热2分钟，冷至室温，以水1.0ml，按同法操作制备空白对照溶液，于615nm处测定吸收值，绘制标准曲线，求得回归方程。2.4样品测定取上清唾液1.0ml，置离心管中，加20%三氯醋酸1.0ml，混匀，置沸水浴上加热20分钟，冷至室温，加1%邻甲酚溶液1.0ml，摇匀，再加4mol/l氨试液2.0ml，混匀，离心，取上清液进行比色测定，空白同上。注意事项为测定的准确性，志愿者应肝、肾功能正常，且一周内不服用其它药物。收集的唾液应在当日内连续测试完毕。在沸水浴上加热水解和显色时，均应将塞塞紧，以防崩开溅出试样。每次加热