课题1菊花的组织培养课件

椒草的叶片长成新植株大自然中存在着许多有趣的植物无性生殖现象。导入新课椒草的叶片长成新植株大自然中存在着许多有趣的植1马铃薯块茎发芽生根这些现象引起了科学家的兴趣，促使他们去思考、解释。马铃薯块茎发芽生根这些现象引起了科学家的兴趣，21902年，一位德国的植物学家大胆地预言：“植物的体细胞在一定条件下，可以如同受精卵一样，具有潜在的发育成植株的能力。”1902年，一位德国的植物学家大胆地预言：“31958年，美国科学家斯图尔德将胡萝卜韧皮部的一些细胞进行培养，由于细胞分化而最终发育成完整的新植株。1958年，美国科学家斯图尔德将胡萝卜韧皮4这个实验结果在生物学界引起了很大的轰动，它表明已经高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能力。已经分化的细胞所具有的这种潜在发育能力称作细胞全能性。这个实验结果在生物学界引起了很大的轰动，它表明5这个科学发现使得科学家开始思考：既然胡萝卜的单个细胞能发育为完整植株，小块的植物组织就更不应该有什么问题。这个科学发现使得科学家开始思考：既然胡萝卜的单6经过很多年的研究，如今植物组织培养已经不再神秘，而发展成为一项常规技术。经过很多年的研究，如今植物组织培养已经不再神秘7课题1菊花的组织培养专题3植物的组织培养技术课题1专题3植物的组织培养技术8课题内容：（一）基础知识（二）实验操作（三）结果与分析课题内容：9知识与能力说明植物组织培养的原理，熟悉植物组织培养的基本过程，了解影响植物组织培养的各种因素，掌握植物组织培养的基本技术。教学目标知识与能力说明植物组织培养的原理，熟悉植物组织10过程与方法进行菊花或其他植物的组织培养。情感态度与价值观了解植物组织培养技术在生产中的应用价值。过程与方法进行菊花或其他植物的组织培养。情感态度与价值观11植物组织培养过程中使用的无菌技术。重点与难点植物组织培养过程中使用的无菌技术。重点与难点12一、基础知识1、植物组织培养的基本过程（1）细胞分化概念：在植物个体发育的过程中，细胞在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程叫做细胞分化。

一、基础知识1、植物组织培养的基本过程（1）细胞分化13特点：已经分化的细胞在结构和功能上比较专一；离体条件下很难发育成完整的植株。

愈伤组织：离体的植物组织培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。特点：愈伤组织：14植物组织愈伤组织植物组织愈伤组织15愈伤组织愈伤组织16菊花叶片的愈伤组织菊花叶片的愈伤组织17人参的愈伤组织胡萝卜的愈伤组织愈伤组织：细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。人参的愈伤组织胡萝卜的愈伤组织愈伤组织：细胞排列疏松而无规则18（2）植物细胞的脱分化定义：有高度分化的植物组织活细胞产生愈伤组织的过程，称作植物细胞的脱分化或者去分化。（2）植物细胞的脱分化定义：19（3）植物细胞的再分化定义：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程称作再分化。（3）植物细胞的再分化定义：20离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根、芽植物体植物组织培养过程示意图离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根、芽植物体植212、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择不同的植物组织培养的难易程度差别很大烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果2、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择不同的植物组织22菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。未开花的菊花植株菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生23（2）相对特殊的营养、环境等条件，适宜的培养基MS培养基主要成分包括：大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S等微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素（2）相对特殊的营养、环境等条件，适宜的培养基MS培养基主要24你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？讨论你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生25答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需26（3）植物激素①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素等。生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素类：赤霉酸（GA3）等。（3）植物激素①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素等27②生长素和细胞分裂素作用：

启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。②生长素和细胞分裂素作用：在生长素存在的情况28使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率高按不同顺序使用这两种激素，会得到不同的实验结果使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂29当生长素和细胞分裂素同时使用时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的形成生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织形成当生长素和细胞分裂素同时使用时，两者用量的比例影30（4）其他因素菊花组织培养：pH控制在5.8左右，温度控制在18－22℃每日用日光灯照射12h外植体的选取、消毒、培养、移栽和栽培等pH、温度、光照等（4）其他因素菊花组织培养：外植体的选取、消毒、培养、移栽31二、实验操作1、制备MS固体培养基配制各种母液

无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存；激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液；用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。二、实验操作1、制备MS固体培养基配制各种母液32

配制培养基

配制MS培养基；调节pH；分装。由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。

灭菌高压蒸气灭菌配制培养基由于菊花的茎段的组织培养比较容易332、外植体消毒选取生长旺盛的菊花茎段嫩枝刷洗流水冲洗20min吸干表面水分70％的酒精消毒6－7s无菌水清洗吸干表面水分0.1％的氯化汞溶液1－2min无菌水清洗3次2、外植体消毒选取生长旺盛的菊花茎段嫩枝刷洗流水冲洗吸干表面343、接种①工作台使用前用70%酒精消毒；每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。②插入菊花茎段时应注意方向，不要倒插。③每瓶接种6－8块外植体，接种后，将封口膜重新扎好。3、接种①工作台使用前用70%酒精消毒；每次使用器械后，都需35你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。思考你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料364、培养无菌箱定期消毒，培养温度控制在18-22℃，每日光照12h。5、移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。6、栽培适时浇水、施肥，直至开花。4、培养无菌箱定期消毒，培养温度控制在37视频一：菊花的组织培养1视频一：菊花的组织培养138视频二：菊花的组织培养2视频二：菊花的组织培养239三、结果分析与评价1、对接种操作中污染情况的分析接种3-4天后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求。三、结果分析与评价1、对接种操作中污染情况的分析402、是否完成了对植物组织的脱分化和再分化观察实验结果，看是否培养出愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。2、是否完成了对植物组织的脱分化和再分化观察实验结果413、是否进行了统计、对照与记录4、生根苗的移栽是否合格统计自己移栽的成活率，看移栽是否合格。3、是否进行了统计、对照与记录4、生根苗的移栽是否合格统计自42四、课题延伸一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养。如：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季等。四、课题延伸一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容43月季月季44秋海棠秋海棠45芦荟芦荟46基础知识实验操作植物组织培养的基本过程细胞分化影响因素外植体消毒培养脱分化植物材料再分化概念培养基制备MS培养基移栽菊花的组织培养其他因素配制母液接种植物激素结果分析与评价课题延伸特点愈伤组织配置培养基灭菌栽培课堂小结基础知识实验操作植物组织培养的基本过程细胞分化影响因素外植体471.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。习题答案1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小482.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养49课题1菊花的组织培养50椒草的叶片长成新植株大自然中存在着许多有趣的植物无性生殖现象。导入新课椒草的叶片长成新植株大自然中存在着许多有趣的植51马铃薯块茎发芽生根这些现象引起了科学家的兴趣，促使他们去思考、解释。马铃薯块茎发芽生根这些现象引起了科学家的兴趣，521902年，一位德国的植物学家大胆地预言：“植物的体细胞在一定条件下，可以如同受精卵一样，具有潜在的发育成植株的能力。”1902年，一位德国的植物学家大胆地预言：“531958年，美国科学家斯图尔德将胡萝卜韧皮部的一些细胞进行培养，由于细胞分化而最终发育成完整的新植株。1958年，美国科学家斯图尔德将胡萝卜韧皮54这个实验结果在生物学界引起了很大的轰动，它表明已经高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能力。已经分化的细胞所具有的这种潜在发育能力称作细胞全能性。这个实验结果在生物学界引起了很大的轰动，它表明55这个科学发现使得科学家开始思考：既然胡萝卜的单个细胞能发育为完整植株，小块的植物组织就更不应该有什么问题。这个科学发现使得科学家开始思考：既然胡萝卜的单56经过很多年的研究，如今植物组织培养已经不再神秘，而发展成为一项常规技术。经过很多年的研究，如今植物组织培养已经不再神秘57课题1菊花的组织培养专题3植物的组织培养技术课题1专题3植物的组织培养技术58课题内容：（一）基础知识（二）实验操作（三）结果与分析课题内容：59知识与能力说明植物组织培养的原理，熟悉植物组织培养的基本过程，了解影响植物组织培养的各种因素，掌握植物组织培养的基本技术。教学目标知识与能力说明植物组织培养的原理，熟悉植物组织60过程与方法进行菊花或其他植物的组织培养。情感态度与价值观了解植物组织培养技术在生产中的应用价值。过程与方法进行菊花或其他植物的组织培养。情感态度与价值观61植物组织培养过程中使用的无菌技术。重点与难点植物组织培养过程中使用的无菌技术。重点与难点62一、基础知识1、植物组织培养的基本过程（1）细胞分化概念：在植物个体发育的过程中，细胞在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程叫做细胞分化。

一、基础知识1、植物组织培养的基本过程（1）细胞分化63特点：已经分化的细胞在结构和功能上比较专一；离体条件下很难发育成完整的植株。

愈伤组织：离体的植物组织培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。特点：愈伤组织：64植物组织愈伤组织植物组织愈伤组织65愈伤组织愈伤组织66菊花叶片的愈伤组织菊花叶片的愈伤组织67人参的愈伤组织胡萝卜的愈伤组织愈伤组织：细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。人参的愈伤组织胡萝卜的愈伤组织愈伤组织：细胞排列疏松而无规则68（2）植物细胞的脱分化定义：有高度分化的植物组织活细胞产生愈伤组织的过程，称作植物细胞的脱分化或者去分化。（2）植物细胞的脱分化定义：69（3）植物细胞的再分化定义：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程称作再分化。（3）植物细胞的再分化定义：70离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根、芽植物体植物组织培养过程示意图离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根、芽植物体植712、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择不同的植物组织培养的难易程度差别很大烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果2、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择不同的植物组织72菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。未开花的菊花植株菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生73（2）相对特殊的营养、环境等条件，适宜的培养基MS培养基主要成分包括：大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S等微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素（2）相对特殊的营养、环境等条件，适宜的培养基MS培养基主要74你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？讨论你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生75答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需76（3）植物激素①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素等。生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素类：赤霉酸（GA3）等。（3）植物激素①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素等77②生长素和细胞分裂素作用：

启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。②生长素和细胞分裂素作用：在生长素存在的情况78使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率高按不同顺序使用这两种激素，会得到不同的实验结果使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂79当生长素和细胞分裂素同时使用时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的形成生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织形成当生长素和细胞分裂素同时使用时，两者用量的比例影80（4）其他因素菊花组织培养：pH控制在5.8左右，温度控制在18－22℃每日用日光灯照射12h外植体的选取、消毒、培养、移栽和栽培等pH、温度、光照等（4）其他因素菊花组织培养：外植体的选取、消毒、培养、移栽81二、实验操作1、制备MS固体培养基配制各种母液

无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存；激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液；用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。二、实验操作1、制备MS固体培养基配制各种母液82

配制培养基

配制MS培养基；调节pH；分装。由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。

灭菌高压蒸气灭菌配制培养基由于菊花的茎段的组织培养比较容易832、外植体消毒选取生长旺盛的菊花茎段嫩枝刷洗流水冲洗20min吸干表面水分70％的酒精消毒6－7s无菌水清洗吸干表面水分0.1％的氯化汞溶液1－2min无菌水清洗3次2、外植体消毒选取生长旺盛的菊花茎段嫩枝刷洗流水冲洗吸干表面843、接种①工作台使用前用70%酒精消毒；每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。②插入菊花茎段时应注意方向，不要倒插。③每瓶接种6－8块外植体，接种后，将封口膜重新扎好。3、接种①工作台使用前用70%酒精消毒；每次使用器械后，都需85你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。思考你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料864、培养无菌箱定期消毒，培养温度控制在18-22℃，每日光照12h。5、移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。6、栽培适时浇水、施肥，直至开花。4、培养无菌箱定期消毒，培养温度控制在