三体综合征产前诊断满分课件

21，三体综合征产前诊断

泸州医学院第三组满分PPT21，三体综合征产前诊断泸州医学院第三组满分PPT1案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP,hCG和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不2

孕妇就诊

常规筛查综合分析风险值孕期检查进一步确诊羊膜穿刺孕妇就诊综合分析风险值孕期检查进一步确诊羊膜穿刺3产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法4产前诊断产前诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊断，通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目的，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口素质。产前诊断又称宫内诊断。它是为了了解胎儿在子宫内的健康情况，有无先天性畸形或遗传病，用某些特殊检查方法在子宫内对胎儿进行诊断，以便及早采取措施避免残疾儿的出生，提高出生人口的素质，是有生学的重要组成部分。产前诊断产前诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影5产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法6案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP,hCG和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不7产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法8产前诊断方法1.X线检查2.超声波检查3.胎儿镜4.羊膜穿刺术5.绒毛吸取术6.脐带穿刺术7.孕妇外周血分离胎儿细胞8.植入前诊断产前诊断方法1.X线检查9产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法10一、实验目的掌握遗传病的产前诊断过程，通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决医学实际问题的能力。一、实验目的11二、实验原理1.羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。二、实验原理122.G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。2.G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体13三、实验材料、试剂及器材（1）器材：离心管，离心机，天平，37℃温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。（2）药品：pH6.8PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。三、实验材料、试剂及器材（1）器材：离心管，离心机，天平，314四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材15取材

1、腹部备皮，排光膀胱，平卧位常规消毒后铺无菌洞巾。2、麻醉，一般不必需要，精神紧张者或可用普鲁卡因或利多卡因麻醉。

取材16取材

3、选择穿刺部位，经B超胎盘定位后避开胎盘。

中期妊娠时，一般选择在耻骨联合上3横指相当于子宫下段处，于腹中线或其左右侧旁，扪及囊样感的部位做穿刺；也可于宫底与耻骨联合连线中点或左右任何一侧穿刺。

晚期妊娠时，先扪清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎儿颈背部空隙处或胎儿肢体侧空隙处穿刺。

取材3、选择穿刺部位，经B超胎盘定位后17取材

4、确定穿刺部位后，以20～21号腰椎穿刺针垂直刺入腹壁，通过腹壁及宫壁两次阻力，当有落空感时即进入羊膜腔，抽出芯针，见羊水溢出，接上注射器，顺利抽得清亮羊水，再次证实在羊膜腔内后，可注射药物。如欲做羊水检查，则抽取羊水20ml立即送检。

5、穿刺完毕后拔出穿刺针，局部压迫5分钟，穿刺部位敷以无菌纱布，胶布固定。

取材4、确定穿刺部位后，以2018四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材19细胞体外培养无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管内，1500r/min常温离心10min，移去上清，留约0.5ml上清液，枪尖混匀，分装吸取至3个60mm培养皿（falcon），每皿添加4ml羊水完全培养基，37℃5%CO2培养箱中培养6-7d。细胞体外培养无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管内，1520四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材21制片培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭形型细胞克隆生长，每个克隆细胞状态较好且形成细胞岛，更换新鲜培养液，每天观察，2-3d后，每个细胞岛已长成一个个较大克隆且细胞融合度达70%-80%，并出现数目不等的较多圆形，类圆形透亮细胞时，可进行细胞收获，收获前一天或当天更换培养液，加入秋水仙素，终浓度为0.1微克每毫升，作用4-4.5h,镜下观察有大量“鱼眼样”透明细胞出现时，即可收获。吸取培养上清至一新离心管，加入0.25%胰酶，37℃消化2min，1000r/min离心10min，弃上清，加入0.075mol/LKCl低渗液，37℃12-13min，用3:1甲醇/冰醋酸预固定和固定后，滴片，常规G显带。制片培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭形22四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材23显带

1、将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。

2、放入预温至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。显带1、将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤24显带

3、在Giemsa染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。4、镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析显带3、在Giemsa染液中染色10min25四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材26结果判断纯合型嵌合型易位型结果判断纯合型嵌合型易位型27结果判断(1)标准型

占患者总数的92.5%，患儿体细胞染色体有47条，有一条额外的21号染色体，核型为47，XX（或XY）+21。其发生机制为亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂时染色体不分离所致。结果判断(1)标准型28核型分析

纯合型核型分析29结果判断纯合型嵌合型易位型结果判断纯合型嵌合型易位型30结果判断(2)嵌合型仅占21-三体综合征的2.5%-5%，是指受精卵在有丝分裂期间染色体不分离而导致的，因此只是部分而不是所有的细胞存在缺陷。患儿体内含有正常和21-三体细胞二种细胞株，形成嵌合体，核型为46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其临床表现随正常细胞所占百分比而定。嵌合型的患儿的智商较其它两型高，临床并发症的发生率也相对较少。结果判断(2)嵌合型31结果判断纯合型嵌合型易位型结果判断纯合型嵌合型易位型32核型分析

易位型核型分析33结果判断(3)易位型约占全部病例的2.5%～5%，多为罗伯逊易位，即着丝粒融合，其额外的21号染色体长臂易位到另一近端着丝粒染色体上。最常见为D/G易位，D组中以14号染色体为主，核型为46，XX（或XY）-14，+t（14q;21q），少数为15号染色体。另一种为G/G易位，是由于G组中两个21号染色体发生着丝粒融合，形成等臂染色体，核型为46，XX（或XY）-21，+t（21q；21q）。

结果判断(3)易位型34易位型先天愚型易位型先天愚型35五、注意事项（1）胰蛋白酶浓度和处理时间随气温高低有所不同。一般规律是标本存放时间越长，在胰蛋白酶当中处理时间越长。太新鲜的标本，染色体会出现毛茸现象。片龄很长的标本往往会导致斑点状的染色体。（2）胰蛋白酶温度：温度越高，反应的速度就越快，一般是室温，但温度必须稳定至少20min。（3）胰蛋白酶处理的时间：如果细胞呈紫蓝色，说明胰蛋白酶的作用时间不够，如果细胞呈桃红色，说明作用时间刚好。五、注意事项（1）胰蛋白酶浓度和处理时间随气温高低有所不同。36

综上总结给与遗传建议：若出现上述情况则为21三体综合症。就目前的医疗水平而言，21-三体综合征既没有方法治愈也没有方法预防，建议该孕妇不宜生育该患儿。如果核型为46，XX(XY)则没有21三体综合症，可以生下小孩。综上总结给与遗传建议：37

thankyou

3821，三体综合征产前诊断

泸州医学院第三组满分PPT21，三体综合征产前诊断泸州医学院第三组满分PPT39案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP,hCG和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不40

孕妇就诊

常规筛查综合分析风险值孕期检查进一步确诊羊膜穿刺孕妇就诊综合分析风险值孕期检查进一步确诊羊膜穿刺41产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法42产前诊断产前诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊断，通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目的，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口素质。产前诊断又称宫内诊断。它是为了了解胎儿在子宫内的健康情况，有无先天性畸形或遗传病，用某些特殊检查方法在子宫内对胎儿进行诊断，以便及早采取措施避免残疾儿的出生，提高出生人口的素质，是有生学的重要组成部分。产前诊断产前诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影43产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法44案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不正常，前来进行遗传咨询。经询问得知，张某的一表姐曾生育一智力低下儿子，经某医院诊断为先天愚型，但具体核型不详。张某孕前检查各项优生指标均正常，孕前无感冒服药史，无有毒有害物质接触史。张某的丈夫，32岁，司机，有烟酒嗜好，在妻子怀孕前半年已戒酒，减少吸烟量。两人核型检查均正常，家族中其他特殊疾病患者。根据张某的情况，作中孕期唐氏筛查，结果张某血清的AFP,hCG和uE3检查结果阳性，再进行B超检查胎儿情况，证实胎儿胎龄正确，发育正常。根据上述资料，张某所孕胎儿具有21三体综合症的高风险，建议进行产前诊断。案例张某，女，31岁，商场收银员，怀孕15周，担心所孕胎儿不45产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法46产前诊断方法1.X线检查2.超声波检查3.胎儿镜4.羊膜穿刺术5.绒毛吸取术6.脐带穿刺术7.孕妇外周血分离胎儿细胞8.植入前诊断产前诊断方法1.X线检查47产前诊断定义对象方法产前诊断定义对象方法48一、实验目的掌握遗传病的产前诊断过程，通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决医学实际问题的能力。一、实验目的49二、实验原理1.羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。二、实验原理502.G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。2.G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体51三、实验材料、试剂及器材（1）器材：离心管，离心机，天平，37℃温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。（2）药品：pH6.8PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。三、实验材料、试剂及器材（1）器材：离心管，离心机，天平，352四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材53取材

1、腹部备皮，排光膀胱，平卧位常规消毒后铺无菌洞巾。2、麻醉，一般不必需要，精神紧张者或可用普鲁卡因或利多卡因麻醉。

取材54取材

3、选择穿刺部位，经B超胎盘定位后避开胎盘。

中期妊娠时，一般选择在耻骨联合上3横指相当于子宫下段处，于腹中线或其左右侧旁，扪及囊样感的部位做穿刺；也可于宫底与耻骨联合连线中点或左右任何一侧穿刺。

晚期妊娠时，先扪清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎儿颈背部空隙处或胎儿肢体侧空隙处穿刺。

取材3、选择穿刺部位，经B超胎盘定位后55取材

4、确定穿刺部位后，以20～21号腰椎穿刺针垂直刺入腹壁，通过腹壁及宫壁两次阻力，当有落空感时即进入羊膜腔，抽出芯针，见羊水溢出，接上注射器，顺利抽得清亮羊水，再次证实在羊膜腔内后，可注射药物。如欲做羊水检查，则抽取羊水20ml立即送检。

5、穿刺完毕后拔出穿刺针，局部压迫5分钟，穿刺部位敷以无菌纱布，胶布固定。

取材4、确定穿刺部位后，以2056四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材57细胞体外培养无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管内，1500r/min常温离心10min，移去上清，留约0.5ml上清液，枪尖混匀，分装吸取至3个60mm培养皿（falcon），每皿添加4ml羊水完全培养基，37℃5%CO2培养箱中培养6-7d。细胞体外培养无菌超净台上将羊水注入50ml无菌离心管内，1558四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材59制片培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭形型细胞克隆生长，每个克隆细胞状态较好且形成细胞岛，更换新鲜培养液，每天观察，2-3d后，每个细胞岛已长成一个个较大克隆且细胞融合度达70%-80%，并出现数目不等的较多圆形，类圆形透亮细胞时，可进行细胞收获，收获前一天或当天更换培养液，加入秋水仙素，终浓度为0.1微克每毫升，作用4-4.5h,镜下观察有大量“鱼眼样”透明细胞出现时，即可收获。吸取培养上清至一新离心管，加入0.25%胰酶，37℃消化2min，1000r/min离心10min，弃上清，加入0.075mol/LKCl低渗液，37℃12-13min，用3:1甲醇/冰醋酸预固定和固定后，滴片，常规G显带。制片培养6-7d后，倒置显微镜下观察细胞生长情况，有若干梭形60四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材61显带

1、将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。

2、放入预温至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。显带1、将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤62显带

3、在Giemsa染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。4、镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析显带3、在Giemsa染液中染色10min63四、实验步骤取材↓体外细胞培养↓制片↓显带↓核型分析四、实验步骤取材64结果判断纯合型嵌合型易位型结果判断纯合型嵌合型易位型65结果判断(1)标准型

占患者总数的92.5%，患儿体细胞染色体有47条，有一条额外的21号染色体，核型为47，XX（或XY）+21。其发生机制为亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂时染色体不分离所致。结果判断(1)标准型66核型分析

纯合型核型分析67结果判断纯合型嵌合型易位型结果判断纯合型嵌合型易位型68结果判断(2)嵌合型仅占21-三体综合征的2.5%-5%，是指受精卵在有丝分裂期间染色体不分离而导致的，因此只是部分而不是所有的细胞存在缺陷。患儿体内含有正常和21-三体细胞二种细胞株，形成嵌合体，核型为46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其临床表现随正常细胞所占百分比而定。嵌合型的患儿的智商较其它两型高，临床并发症的发生率也相对较少。结果判断(2)嵌合型69结果判断纯合型嵌合型易位型结果判断纯合型嵌合型易位型70核型分析