重组蛋白质表达、复性与纯化课件

重组蛋白质的

表达、复性与纯化重组蛋白质的

表达、复性与纯化1为什么要重组基因表达？1.

蛋白质功能研究2.

生物制药和疫苗生产3.

疾病的基因治疗4.

食品、化工用酶制剂5.

抗虫、抗逆植物改良6.细胞代谢产物的富集为什么要重组基因表达？1.

蛋白质功能研究2基因表达体系及优劣势大肠杆菌表达体系蛋白质的复性工作中经常碰到的问题基因表达体系及优劣势3基因表达体系

1.

原核体系2.

真核体系

基因表达体系4大肠杆菌(Escherichiacoli)遗传背景清楚，基因工程操作方便，商品化表达载体种类齐全，表达效率高；基本不分泌，易形成包含体(无正确折叠的立体结构)，无加糖等修饰大肠杆菌(Escherichiacoli)遗传背景清楚，5枯草杆菌(Bacillussubtilis)分泌蛋白质能力强，一般有天然立体结构；无加糖修饰功能，培养液中蛋白酶活性高，重组蛋白易受蛋白酶的水解；质粒不稳定，尚无商品化的表达载体枯草杆菌(Bacillussubtilis)分泌蛋白质能6其他乳酸菌(Lacticacidbacteria)沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)其他乳酸菌(Lacticacidbacteria)7真核细胞表达体系酵母细胞昆虫细胞植物细胞/组织哺乳动物细胞/组织真核细胞表达体系酵母细胞8酵母细胞可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，有加糖修饰功能；可进行染色体整合型基因表达;糖链与哺乳动物加工的不一致，培养上清多糖浓度高;商品化表达体系：

酿酒酵母（Saccharomycecerevisiae）;毕氏酵母(Pichiapastoris);裂殖酵母（Schizosaccharomycepombe）酵母细胞可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，有加糖修饰功能；可9昆虫细胞可以病毒感染的型式在成虫中生产，也可在体外培养细胞中生产蛋白;适合分泌型和膜蛋白的表达，有加糖修饰；糖链有所区别，表达量有限；作为药物宿主细胞未被FDA认可昆虫细胞可以病毒感染的型式在成虫中生产，也可在体外培养细胞中10CHO细胞可进行分泌表达，有天然立体结构，加糖方式与人体蛋白质完全一致；表达量不够高，培养成本较高CHO细胞可进行分泌表达，有天然立体结构，加糖方式与人体蛋白11植物组织植物可大面积种植，可以廉价大规模生产；转基因植物制作费时，表达的组织特异性较难控制；表达量较难提高，分离纯化不方便植物组织植物可大面积种植，可以廉价大规模生产；12动物乳腺组织分泌生产有天然立体结构和活性的蛋白质至乳汁，产量高，分离纯化方便，特别适合药用蛋白的生产；转基因动物制作花费巨大，实验周期长动物乳腺组织分泌生产有天然立体结构和活性的蛋白质至乳汁，产量13鸟类输卵管组织分泌生产有天然立体结构的蛋白质到蛋清，产量高，容易贮存和运输，分离纯化方便；实验成本低，饲养费用低；加糖方式可能与人有所不同鸟类输卵管组织分泌生产有天然立体结构的蛋白质到蛋清，产量高，14体系选择研究基因功能:

大肠杆菌,裂殖酵母,昆虫细胞,CHO细胞多肽药物生产:

大肠杆菌,毕氏酵母,CHO细胞,乳腺组织疫苗:

大肠杆菌,酵母,

大多数沿用细胞培养产物进行灭毒单抗生产:杂交瘤细胞工业酶生产:

各种微生物

体系选择研究基因功能:15在大肠杆菌中直接生产有活性的胰岛素

在大肠杆菌中生产人凝血IX因子

在大肠杆菌生产Calcitonin类C端酰胺化短肽

在大肠杆菌中进行蛋白质的糖基化修饰

在酵母中进行与哺乳动物细胞一致的糖基化

在鸡输卵管中进行与哺乳动物细胞一致的糖基化

提高乳腺分泌表达的FactorIX类因子的活性

在植物中得到与哺乳动物细胞一致的糖基化有可能以后能做到的事在大肠杆菌中直接生产有活性的胰岛素

在大肠杆菌中生产人16在大肠杆菌中表达

重组蛋白质在大肠杆菌中表达

重组蛋白质17如果目的蛋白质有二硫键并需要正确的立体结构,尽可能进行可溶性表达;如果目的蛋白质没有二硫键或只用来制备抗血清,采用包含体表达比较好;如果目的多肽的分子量小于10kDa,一定要进行融合表达如果目的蛋白质有二硫键并需要正确的立体结构,尽可能进行可18按蛋白质类型分单纯表达:pJLA系列,用NcoI/NdeI导入AUG的载体融合表达:融合各种tag,GST,CBD,MAL,GFP,etc分泌表达:pel/ompT分泌肽按启动子分lac及衍生的tac,trc,pac,rac等启动子IPTG诱导lamdaphagePL和PR启动子热诱导T7启动子IPTG诱导T5启动子IPTG诱导ara启动子阿拉伯糖诱导大肠杆菌表达载体分类按蛋白质类型分大肠杆菌表达载体分类19pJLA50X系列;pcDNAII;etcpET系列

(T7promoter,Novagen公司)pQE系列

(T5promoter,Qiagen公司)pMAL系列(周质表达,BioLabs公司)pGEX系列(GST融合表达,Pharmacia公司)pBAD系列(Arabinose诱导型)常用表达载体pTYB系列(CBD融合,可以自我切割,BioLabs)pJLA50X系列;pcDNAII;etc常用表达载20ProteinAGST（glutathioneS-transferase）CBD(chitin-bindingdomain,BioLabs;cellulose-bindingdomain,Novagen)calmodulin-bindingdomain,Stratagene)MBP(maltose-bindingprotein)GFP(greenfluorescenceprotein)Thioredoxin**帮助二硫键形成Dsb(periplasmaenzymeDsbA,DsbC)**二硫键的形成与SUMO(smallubiquitin-relatedmodifier)KSI(ketosteroidisomerase)基本上全部沉淀各种融合蛋白表达载体帮助可溶化帮助分泌到周质可用亲和层析纯化ProteinA21采用MBD融合采用GST融合采用CBD融合采用thioredoxin融合采用Origami等宿主菌降低菌体培养的速度

温度(15-30℃),

降低转速

让表达产物可溶化采用MBD融合让表达产物可溶化22采用CBD融合(pET36/37)采用Dsb融合(pET39/40)采用带pelB/ompT引导肽的载体

(pET12/20/22)采用带MBD融合(pMAL载体,Biolabs)采用带SUMO融合(pETSUMO,Invitrogen)让蛋白质分泌到间质去纯化方便:先用EDTA/蔗糖溶液处理,然后5mMMgSO4洗出采用CBD融合(pET36/37)让蛋白质分泌到间质去纯23His-tag(6-8Histidine)T7-tag(MASMTGGQQMG)HSV-tag(QPELAPEDPED)S-tag(KETAAKFERQHMDS)VSV-G-tag(TTDIEMNRLGK)HA-tag(YPYDVPDYA)Flag-tag

(DYKDDDDK)Myc-tag(EQKLISEEDL)各种用于抗体识别的标记为什么要加tag?His-tag(6-8Histidine)各种用于抗体识24Biotinylation-tag

100多AA的结构域,

在大肠杆菌中被识别为生物素化的位点.Promega的PinPointTMXa-1;Invitrogen的pET104-DEST.未命名

DVEAWLGAR,被用来和streptoavidin结合

(个人通讯)

未命名

一些病毒外壳蛋白的片段,破坏细胞膜的结构导致容易进入细胞有前景的特殊用途的tagBiotinylation-tag有前景的特殊用途的tag25DTT:intein的↓Cys

溴化氰:Met↓Thrombin:LVPR↓GSFactorXa:IEGR↓Enterokinase:DDDDK↓PreScissionTMprotease:

LEVLFQ↓GPGenenaseI

TMPGAAHY↓TEVprotease:

ENLYFQ↓G融合蛋白的专一性切割DTT:int26BL21(DE3)/pLysS:自身表达T7RNApolymerase

适用pET系列等带T7启动子的载体M15/SG13009:自身表达T5RNApolymerase

适用pQE系列等带T5启动子的载体BL21TrxB(DE3):thioredoxinreductase突变

Origami:thioredoxinreductase/glutathionereductase双突变适合带thioredoxinreductase的融合表达载体,帮助形成更多的二硫键BR21CodonPlusRIL:富含AT的真核生物基因的表达BR21CodonPlusRP:富含GC的真核生物基因的表达特殊的表达用菌株BL21(DE3)/pLysS:自身表达T7RNAp27NovagenStratageneInvitrogenBioLabsQiagenPharmaciaPromegaClontechRocheGibco/BRL重要的原核表达质粒提供商Novagen重要的原核表达质粒提供商28TheproteinfoldingProblemHowtogettothebottomofthefunnel?And,whatisatthebottom?TheproteinfoldingProblemHow29透析法:简单;但费时,费缓冲液,蛋白质量少，浓度不能过高(容易产生沉淀)快速稀释法:

最常用的小规模复性方法;但比较费时,费缓冲液,蛋白质的浓度不能高(容易产生沉淀)超滤透析法:比较省缓冲液,处理量大;但费时,要控制好蛋白质浓度凝胶过滤法:

快速,可重复性高,不会产生沉淀,操作复杂一点

亲和层析复性法,水相二相法,etc包含体蛋白质的复性方法透析法:简单;但费时,费缓冲液,蛋白质量少，浓度不能30分子伴侣

(MolecularChaperone)

Amolecularchaperoneisabletotransientlybindandthusstabilizeanunstableconformationofanotherprotein,therebyfacilitatingcorrectfoldingbypreventingmisfoldingandaggregation.分子伴侣

(MolecularChaperone)

A31TypeI:chaperoneswhicharefunctionallyresponsibleforthecorrectfolding,assemblyandtransportofnewlysynthesizedpeptide–HSPfamily,GroELS,ect.TypeII:chaperoneswithenzymaticpropertiesaccountableforaccelerationofratelimitingstepsofproteinfolding–PDI（proteindisulfideisomerase）,PPI（peptidyl-prolyl

cis-trans

isomerase),

etc两种主要的分子伴侣TypeI:chaperoneswhichare32人PDI的结构特征人PDI的结构特征33PDI作用机理PDI作用机理34

PDIhasbeenshowntocatalyzereactivationofnon-nativeproteinswithoutdisulfidebonds.Thisfunctionisindependentfromtheredox/isomerasefunction,asithasbeenshowntoexistinvitrowithseveralmodelsubstratesthatdonotcontaindisulfidesintheirnativestructure.Foldingassistant/chaperonePDIhasbeenshowntocata35TimedadditionofPDItorefoldingFab/red.MarcusMayeretal.,BiPandPDICooperateintheOxidativeFoldingofAntibodiesinVitro,JBCVol.275,No.38,2000TimedadditionofPDItorefol36MarcusMayeretal.,BiPandPDICooperateintheOxidativeFoldingofAntibodiesinVitro,JBCVol.275,No.38,2000MarcusMayeretal.,BiPandP37PPI的作用Prolineisomerizationiswidelyacceptedtobeoneoftherate-determiningstepsinproteinfolding.ThefunctionofPPIistoacceleratethecis-transisomerizationprocess.MolecularChaperonPPI的作用Prolineisomerizationis38CyclophilinFamily,典型的PPICyclophilinFamily,典型的PPI39RefoldingofHCAIIHCAIIHCAIIwithPPlHCAIIwithPPlandCsAP202NmutantwithPPIP202NmutantReactivationwasinitiatedbyrapiddilutionof0.3MGuHClandaproteinconcentrationof0.025mg/ml(0.83,uM).PPI:9.6μM;CsA:25μMRefoldingofHCAIIHCAIIHCAI40表达量不够高；包含体在8M尿素中不能溶解；重组蛋白在大肠杆菌中表达的分子量偏小；带His-tag重组蛋白不吸附到Ni-chelating树脂上；Ni-chelating分离纯化的效果不好；GST融合蛋白不吸附到glutathione-Sepharose上；包含体来源的采用透析法或稀释法复性时全部沉淀；Ni-chelating错用DTT后发生黑色沉淀该怎么办？贵重的亲和层析树脂经常发生结块该怎么办？某些表达载体的表达效率在放大培养时无法提高工作中经常碰到的问题表达量不够高；工作中经常碰到的问题41尝试不同表达载体，特别是N端有融合蛋白的载体尝试不同表达载体，特别是N端有融合蛋白的载体42是不是忘了加还原剂（DTT或巯基乙醇）？是不是在－20℃冻存过？用4M盐酸胍试试是不是忘了加还原剂（DTT或巯基乙醇）？43是不是酸性蛋白质？是不是蛋白质的合成提前中止了？（富含Arg,Ile,Leu,Pro这几种氨基酸）可以尝试用BL21CodonPlusRIL或RP作宿主菌(Stratagen)；使用C端带His-tag的融合表达载体（如pET21,Novagen）以便纯化全长的融合蛋白是不是酸性蛋白质？44His-tag被操作过程混入的重金属离子所饱和，可以通过添加0.5mMEDTA来去除重金属离子的干扰；His-tag被包裹在不易和树脂发生结合的位置（比较罕见）;其他不明原因导致弱结合His-tag被操作过程混入的重金属离子所饱和，可以通过添加45样品没有很好细心去除不溶性物质重复使用前树脂没有洗干净蛋白质之间存在相互作用可以提高盐浓度,改变pH,添加2-6M尿素等方法来洗去杂蛋白质样品没有很好细心去除不溶性物质46是不是在进行复性时用了Redoxbuffer是不是在进行复性时用了Redoxbuffer47尝试用Ureagradient/Gelfiltration来解决尝试用Ureagradient/Ge48尽快用0.1NHCl冲洗尽快用0.1NHCl冲洗49用0.1NNaOH/0.1%SDS洗用0.1NNaOH/0.1%SDS洗50主要是溶氧量的问题,可以通过在摇瓶中加入不同量的培养基的方式来确定最佳体积。主要是溶氧量的问题,可以通过在摇瓶中加入不同51细节决定成功。重组蛋白质的表达、纯化和后加工的各个细节对技术细节有高度的要求，直接决定了产业化的可行性。细节决定成功。重组蛋白质的表达、纯化和后加工的各个52重组蛋白质的

表达、复性与纯化重组蛋白质的

表达、复性与纯化53为什么要重组基因表达？1.

蛋白质功能研究2.

生物制药和疫苗生产3.

疾病的基因治疗4.

食品、化工用酶制剂5.

抗虫、抗逆植物改良6.细胞代谢产物的富集为什么要重组基因表达？1.

蛋白质功能研究54基因表达体系及优劣势大肠杆菌表达体系蛋白质的复性工作中经常碰到的问题基因表达体系及优劣势55基因表达体系

1.

原核体系2.

真核体系

基因表达体系56大肠杆菌(Escherichiacoli)遗传背景清楚，基因工程操作方便，商品化表达载体种类齐全，表达效率高；基本不分泌，易形成包含体(无正确折叠的立体结构)，无加糖等修饰大肠杆菌(Escherichiacoli)遗传背景清楚，57枯草杆菌(Bacillussubtilis)分泌蛋白质能力强，一般有天然立体结构；无加糖修饰功能，培养液中蛋白酶活性高，重组蛋白易受蛋白酶的水解；质粒不稳定，尚无商品化的表达载体枯草杆菌(Bacillussubtilis)分泌蛋白质能58其他乳酸菌(Lacticacidbacteria)沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)其他乳酸菌(Lacticacidbacteria)59真核细胞表达体系酵母细胞昆虫细胞植物细胞/组织哺乳动物细胞/组织真核细胞表达体系酵母细胞60酵母细胞可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，有加糖修饰功能；可进行染色体整合型基因表达;糖链与哺乳动物加工的不一致，培养上清多糖浓度高;商品化表达体系：

酿酒酵母（Saccharomycecerevisiae）;毕氏酵母(Pichiapastoris);裂殖酵母（Schizosaccharomycepombe）酵母细胞可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，有加糖修饰功能；可61昆虫细胞可以病毒感染的型式在成虫中生产，也可在体外培养细胞中生产蛋白;适合分泌型和膜蛋白的表达，有加糖修饰；糖链有所区别，表达量有限；作为药物宿主细胞未被FDA认可昆虫细胞可以病毒感染的型式在成虫中生产，也可在体外培养细胞中62CHO细胞可进行分泌表达，有天然立体结构，加糖方式与人体蛋白质完全一致；表达量不够高，培养成本较高CHO细胞可进行分泌表达，有天然立体结构，加糖方式与人体蛋白63植物组织植物可大面积种植，可以廉价大规模生产；转基因植物制作费时，表达的组织特异性较难控制；表达量较难提高，分离纯化不方便植物组织植物可大面积种植，可以廉价大规模生产；64动物乳腺组织分泌生产有天然立体结构和活性的蛋白质至乳汁，产量高，分离纯化方便，特别适合药用蛋白的生产；转基因动物制作花费巨大，实验周期长动物乳腺组织分泌生产有天然立体结构和活性的蛋白质至乳汁，产量65鸟类输卵管组织分泌生产有天然立体结构的蛋白质到蛋清，产量高，容易贮存和运输，分离纯化方便；实验成本低，饲养费用低；加糖方式可能与人有所不同鸟类输卵管组织分泌生产有天然立体结构的蛋白质到蛋清，产量高，66体系选择研究基因功能:

大肠杆菌,裂殖酵母,昆虫细胞,CHO细胞多肽药物生产:

大肠杆菌,毕氏酵母,CHO细胞,乳腺组织疫苗:

大肠杆菌,酵母,

大多数沿用细胞培养产物进行灭毒单抗生产:杂交瘤细胞工业酶生产:

各种微生物

体系选择研究基因功能:67在大肠杆菌中直接生产有活性的胰岛素

在大肠杆菌中生产人凝血IX因子

在大肠杆菌生产Calcitonin类C端酰胺化短肽

在大肠杆菌中进行蛋白质的糖基化修饰

在酵母中进行与哺乳动物细胞一致的糖基化

在鸡输卵管中进行与哺乳动物细胞一致的糖基化

提高乳腺分泌表达的FactorIX类因子的活性

在植物中得到与哺乳动物细胞一致的糖基化有可能以后能做到的事在大肠杆菌中直接生产有活性的胰岛素

在大肠杆菌中生产人68在大肠杆菌中表达

重组蛋白质在大肠杆菌中表达

重组蛋白质69如果目的蛋白质有二硫键并需要正确的立体结构,尽可能进行可溶性表达;如果目的蛋白质没有二硫键或只用来制备抗血清,采用包含体表达比较好;如果目的多肽的分子量小于10kDa,一定要进行融合表达如果目的蛋白质有二硫键并需要正确的立体结构,尽可能进行可70按蛋白质类型分单纯表达:pJLA系列,用NcoI/NdeI导入AUG的载体融合表达:融合各种tag,GST,CBD,MAL,GFP,etc分泌表达:pel/ompT分泌肽按启动子分lac及衍生的tac,trc,pac,rac等启动子IPTG诱导lamdaphagePL和PR启动子热诱导T7启动子IPTG诱导T5启动子IPTG诱导ara启动子阿拉伯糖诱导大肠杆菌表达载体分类按蛋白质类型分大肠杆菌表达载体分类71pJLA50X系列;pcDNAII;etcpET系列

(T7promoter,Novagen公司)pQE系列

(T5promoter,Qiagen公司)pMAL系列(周质表达,BioLabs公司)pGEX系列(GST融合表达,Pharmacia公司)pBAD系列(Arabinose诱导型)常用表达载体pTYB系列(CBD融合,可以自我切割,BioLabs)pJLA50X系列;pcDNAII;etc常用表达载72ProteinAGST（glutathioneS-transferase）CBD(chitin-bindingdomain,BioLabs;cellulose-bindingdomain,Novagen)calmodulin-bindingdomain,Stratagene)MBP(maltose-bindingprotein)GFP(greenfluorescenceprotein)Thioredoxin**帮助二硫键形成Dsb(periplasmaenzymeDsbA,DsbC)**二硫键的形成与SUMO(smallubiquitin-relatedmodifier)KSI(ketosteroidisomerase)基本上全部沉淀各种融合蛋白表达载体帮助可溶化帮助分泌到周质可用亲和层析纯化ProteinA73采用MBD融合采用GST融合采用CBD融合采用thioredoxin融合采用Origami等宿主菌降低菌体培养的速度

温度(15-30℃),

降低转速

让表达产物可溶化采用MBD融合让表达产物可溶化74采用CBD融合(pET36/37)采用Dsb融合(pET39/40)采用带pelB/ompT引导肽的载体

(pET12/20/22)采用带MBD融合(pMAL载体,Biolabs)采用带SUMO融合(pETSUMO,Invitrogen)让蛋白质分泌到间质去纯化方便:先用EDTA/蔗糖溶液处理,然后5mMMgSO4洗出采用CBD融合(pET36/37)让蛋白质分泌到间质去纯75His-tag(6-8Histidine)T7-tag(MASMTGGQQMG)HSV-tag(QPELAPEDPED)S-tag(KETAAKFERQHMDS)VSV-G-tag(TTDIEMNRLGK)HA-tag(YPYDVPDYA)Flag-tag

(DYKDDDDK)Myc-tag(EQKLISEEDL)各种用于抗体识别的标记为什么要加tag?His-tag(6-8Histidine)各种用于抗体识76Biotinylation-tag

100多AA的结构域,

在大肠杆菌中被识别为生物素化的位点.Promega的PinPointTMXa-1;Invitrogen的pET104-DEST.未命名

DVEAWLGAR,被用来和streptoavidin结合

(个人通讯)

未命名

一些病毒外壳蛋白的片段,破坏细胞膜的结构导致容易进入细胞有前景的特殊用途的tagBiotinylation-tag有前景的特殊用途的tag77DTT:intein的↓Cys

溴化氰:Met↓Thrombin:LVPR↓GSFactorXa:IEGR↓Enterokinase:DDDDK↓PreScissionTMprotease:

LEVLFQ↓GPGenenaseI

TMPGAAHY↓TEVprotease:

ENLYFQ↓G融合蛋白的专一性切割DTT:int78BL21(DE3)/pLysS:自身表达T7RNApolymerase

适用pET系列等带T7启动子的载体M15/SG13009:自身表达T5RNApolymerase

适用pQE系列等带T5启动子的载体BL21TrxB(DE3):thioredoxinreductase突变

Origami:thioredoxinreductase/glutathionereductase双突变适合带thioredoxinreductase的融合表达载体,帮助形成更多的二硫键BR21CodonPlusRIL:富含AT的真核生物基因的表达BR21CodonPlusRP:富含GC的真核生物基因的表达特殊的表达用菌株BL21(DE3)/pLysS:自身表达T7RNAp79NovagenStratageneInvitrogenBioLabsQiagenPharmaciaPromegaClontechRocheGibco/BRL重要的原核表达质粒提供商Novagen重要的原核表达质粒提供商80TheproteinfoldingProblemHowtogettothebottomofthefunnel?And,whatisatthebottom?TheproteinfoldingProblemHow81透析法:简单;但费时,费缓冲液,蛋白质量少，浓度不能过高(容易产生沉淀)快速稀释法:

最常用的小规模复性方法;但比较费时,费缓冲液,蛋白质的浓度不能高(容易产生沉淀)超滤透析法:比较省缓冲液,处理量大;但费时,要控制好蛋白质浓度凝胶过滤法:

快速,可重复性高,不会产生沉淀,操作复杂一点

亲和层析复性法,水相二相法,etc包含体蛋白质的复性方法透析法:简单;但费时,费缓冲液,蛋白质量少，浓度不能82分子伴侣

(MolecularChaperone)

Amolecularchaperoneisabletotransientlybindandthusstabilizeanunstableconformationofanotherprotein,therebyfacilitatingcorrectfoldingbypreventingmisfoldingandaggregation.分子伴侣

(MolecularChaperone)

A83TypeI:chaperoneswhicharefunctionallyresponsibleforthecorrectfolding,assemblyandtransportofnewlysynthesizedpeptide–HSPfamily,GroELS,ect.TypeII:chaperoneswithenzymaticpropertiesaccountableforaccelerationofratelimitingstepsofproteinfolding–PDI（proteindisulfideisomerase）,PPI（peptidyl-prolyl

cis-trans

isomerase),

etc两种主要的分子伴侣TypeI:chaperoneswhichare84人PDI的结构特征人PDI的结构特征85PDI作用机理PDI作用机理86

PDIhasbeenshowntocatalyzereactivationofnon-nativeproteinswithoutdisulfidebonds.Thisfunctionisindependentfromtheredox/isomerasefunction,asithasbeenshowntoexistinvitrowithseveralmodelsubstratesthatdonotcontaindisulfidesintheirnativestructure.Foldingassistant/chaperonePDIhasbeenshowntocata87TimedadditionofPDItorefoldingFab/red.MarcusMayeretal.,BiPandPDICooperateintheOxidativeFoldingofAntibodiesinVitro,JBCVol.275,No.38,2000TimedadditionofPDItorefol88MarcusMayeretal.,BiPandPDICooperateintheOxidativeFoldingofAntibodiesinVitro,JBCVol.275,No.38,2000MarcusMayeretal.,BiPandP89PPI的作用Prolineisomerization