细胞悬浮培养课件

细胞的悬浮培养09级2班悬浮培养基cellsuspensionculture

细胞悬浮培养的定义

单细胞制备的方法

悬浮培养的条件

细胞悬浮培养的类型

悬浮培养细胞的同步化

国内悬浮培养技术产业化存在的挑战和展望

细胞初始培养定义1：细胞悬浮培养是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞培养与细胞工程（二级学科）定义2：在流动的液体培养基中培养非贴壁的悬浮细胞或小细胞团的细胞或组织的培养方法。细胞附着在微运载体上的培养也是一种悬浮培养。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）cellsuspensionculture单细胞制备的方法机械法

酶解法

愈伤组织诱导法

cellsuspensionculture注意：只有薄壁组织排列松散，细胞间接触点很少时用机械法分离叶肉细胞才能取得成功。悬浮培养的条件

一个成功的悬浮细胞培养体系必须满足三个基本条件：一是悬浮培养物分散性良好，细胞团较小；二是均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同；三是生长迅速。cellsuspensionculture细胞悬浮培养的类型:分批培养（batchculture）

连续培养(continuousculture)cellsuspensionculture滞后期对数生长期减慢期静止期细胞数培养初期悬浮细胞处于滞后期，细胞很少分裂；进入对数生长期后，细胞分裂活跃数目迅速增加；经过3~4个细胞世代之后，培养基中某些营养物质已经耗尽，或是有毒代谢产物的积累，增长逐渐缓慢，进入静止期后，增长完全停止。分批培养是指细胞在一定容积的培养中进行培养，目的是建立单细胞培养物。cellsuspensionculture

连续培养是通过控制加入定量的营养物质使细胞生长率和细胞密度保持不变的一种培养方式，主要用于研究和生产次生代谢物质。cellsuspensionculture连续培养主要用于大规模细胞培养，通过添加新鲜培养液和排放已利用的培养液来平衡营养水平，使培养细胞长期处于静止期状态。开放式和封闭式区别开放式中：在注入新鲜培养基的同时，培养细胞随同培养液一起流出。封闭式中：排出液中的细胞用机械方法收集后，又放入原培养基，所以其培养细胞数目不断增加。cellsuspensionculturecellsuspensionculture悬浮培养细胞的同步化

细胞同步化是指同一悬浮培养体系的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。物理方法

化学方法cellsuspensionculture化学方法饥饿法

饥饿也是调整细胞同步化的方法之一。在一个培养体系中，如果细胞生长的基本成分丧失，而导致细胞因饥饿而分裂受阻，从而停留在某一分裂时期。当在培养基中加入所缺乏的成分或者将饥饿细胞转入完整培养基中继代培养时，细胞分裂又可以重新恢复。饥饿导致的细胞分裂受阻，常常使细胞不能合成DNA，即不能进入S期；或细胞分裂不能进行，即不能进入M期。抑制法

通过一些DNA合成抑制剂处理细胞，使细胞滞留在DNA合成前期，当解除抑制后，即可获得处于同一细胞周期-----G1期的同步化细胞。国内悬浮培养技术产业化存在的挑战和展望1、国内悬浮培养技术产业化的挑战

2、展望cellsuspensionculturecellsuspensionculture展望

应该认识到，快速实现悬浮培养技术在疫苗生产中的应用只是搭建了一个升级的工艺平台，而不是最终目的，行业和企业发展真正的动力是新药、新疫苗、新工艺以及配套技术的创新。例如：

无血清培养病毒生产技术的开发，包括无血清培养基的开发；利用合适的培养基和转染或驯化技术实现贴壁细胞的悬浮培养构建；新宿主细胞表达品种开发，如同一种产品采用新的宿主细胞表达或是开发