微生物的实验室培养课件

微生物的实验室培养微生物的实验室培养1特点：小简低微生物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．1、分类特点：小简低微生物原核生物界原生生物界真菌2芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆3菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉4碳源氮源生长因子无机盐水微生物需要的五大类营养要素物质碳源微生物需要的五大类营养要素物质5概念来源作用碳源凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳源

CO2NaHCO3等有机碳源

糖类(葡萄糖)脂肪酸花生粉饼石油等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源1、微生物的碳源蓝藻和酵母菌分别能利用哪类碳源物质？思考概念来源作用碳源凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳6概念来源作用氮源无机氮源N2、NH4+、NO3-、NH3等有机氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物2、微生物的氮源概念来源作用氮源无机氮源有机氮源凡是能够为微生物提供N元素的7概念成分作用为什么需要补充？常见的生长因子微生物生长不可缺少的微量有机物有机物酶和核酸的组成成分缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等3.生长因子概念微生物生长不可缺少的微量有机物3.生长因子8微生物种类生长因子需要量/mL肠膜乳状杆菌胱氨酸5μg白喉棒杆菌β-丙氨酸1.5μg破伤风梭状芽孢杆菌尿嘧啶0-4μg阿拉伯聚糖乳杆菌泛酸0.02μg粪链球菌叶酸200μg干酪乳杆菌生物素1μg几种微生物所需的生长因子微生物种类生长因子需要量/mL肠膜乳状杆菌胱氨酸5μg9固体培养基半固体培养基液体培养基（二）培养基的种类图1、根据物理性质分合成培养基——成分明确，常用于分类、鉴定天然培养基——成分不明确，常用于工业生产2、根据化学成分分——用于微生物的分离计数——观察微生物的运动，鉴定菌种——常用于工业生产固体培养基（二）培养基的种类图1、根据物理性质分合成培养基—10固体培养基半固体培养基液体培养基需加入凝固剂，如琼脂固体培养基半固体培养基液体培养基需加入凝固剂，如琼脂11◆鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物，如加伊红和美蓝，和大肠杆菌的代谢产物结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽，可以用来鉴别大肠杆菌3、根据用途分◆选择培养基——在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长，如加高浓度的食盐，抑制多种细菌生长，分离到金黄色葡萄球菌◆鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别12选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基分离自生固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物选择培养基加入青霉素的培养基13①、目的要明确根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制②、营养要协调注意各种营养物质的浓度和比例，最重要为碳源和氮源的比，如：谷氨酸生产中C:N=4:1，菌体数↑谷氨酸↓。C:N=3:1，菌体数↓谷氨酸↑。③、pH要适宜

细菌pH6.5~7.5放线菌pH7.5~8.5真菌pH5.0~6.0（三）培养基的配制原则①、目的要明确（三）培养基的配制原则14（四）培养基的配置称量溶化调PH培养基的分装加棉塞包扎,贴标签加热不断搅拌名称日期制作者ＮaＯＨ、ＨＣl（四）培养基的配置称量溶化调PH培养基的分装加棉塞包扎,贴标152、灭菌2、灭菌163、搁置斜面50℃时，斜面长度不超过总长的一半增加培养基与菌种的接触面积3、搁置斜面50℃时，斜面长度不超过总长的一半增加培养基与菌17要点归纳要点归纳18（一）培养基

知识要点：1．培养基的用途和种类，指出培养基可分为液体和固体两大类；2．不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；3．尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。（二）无菌技术知识要点：1．无菌技术的概念；2．消毒与灭菌的概念及两者的区别；3．常用的消毒与灭菌的方法，接种环灼烧灭菌的方法。（一）培养基（二）无菌技术191、器具环境、操作者的灭菌、消毒2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种、纯化6、恒温箱中培养7、菌种的保存3.微生物实验室培养的基本操作程序临时保藏长期保藏恒温箱1、器具环境、操作者的灭菌、消毒3.微生物实验室培养的基本操201．培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

（二）倒平板操作的讨论1．培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。213．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。4．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。3．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？22（三）平板划线操作的讨论1．为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌，避免细菌污染环境和感染操作者。（三）平板划线操作的讨论232．在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3．在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少。每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而成的菌落。2．在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？24（四）涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围，等等。（四）涂布平板操作的讨论25培养基菌种管口并齐斜面水平拧松棉塞微生物接种培养基菌种管口并齐微生物接种26烧灼接种环烧灼接种环27取下棉塞（不能放下）烧灼管口取下棉塞（不能放下）28冷却接种环，挑取菌种冷却接种环，挑取菌种29蛇形画线蛇形画线30烧灼管口，加上棉塞，烧灼接种环烧灼管口，加上棉塞，烧灼接种环31无菌技术消毒与灭菌的区别？消毒及灭菌的定义：

1.消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。

2.灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。

无菌技术消毒与灭菌的区别？消毒及灭菌的定义：

1.消毒定义：32无菌技术消毒的方法：1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒……无菌技术消毒的方法：33无菌技术灭菌的方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.无菌技术灭菌的方法：34

1．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

2．请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。

(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手

答：(1)、(2)需要灭菌；(3)需要消毒。1．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污351、不超过试管的1/52、不要将培养基沾在试管口及上段1、不超过试管的1/5361、目的：防止杂菌污染，保证通气良好2、注意：2/3在管口内1、目的：防止杂菌污染，保证通气良好37微生物的实验室培养微生物的实验室培养38特点：小简低微生物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．1、分类特点：小简低微生物原核生物界原生生物界真菌39芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆40菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉41碳源氮源生长因子无机盐水微生物需要的五大类营养要素物质碳源微生物需要的五大类营养要素物质42概念来源作用碳源凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳源

CO2NaHCO3等有机碳源

糖类(葡萄糖)脂肪酸花生粉饼石油等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源1、微生物的碳源蓝藻和酵母菌分别能利用哪类碳源物质？思考概念来源作用碳源凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳43概念来源作用氮源无机氮源N2、NH4+、NO3-、NH3等有机氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物2、微生物的氮源概念来源作用氮源无机氮源有机氮源凡是能够为微生物提供N元素的44概念成分作用为什么需要补充？常见的生长因子微生物生长不可缺少的微量有机物有机物酶和核酸的组成成分缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等3.生长因子概念微生物生长不可缺少的微量有机物3.生长因子45微生物种类生长因子需要量/mL肠膜乳状杆菌胱氨酸5μg白喉棒杆菌β-丙氨酸1.5μg破伤风梭状芽孢杆菌尿嘧啶0-4μg阿拉伯聚糖乳杆菌泛酸0.02μg粪链球菌叶酸200μg干酪乳杆菌生物素1μg几种微生物所需的生长因子微生物种类生长因子需要量/mL肠膜乳状杆菌胱氨酸5μg46固体培养基半固体培养基液体培养基（二）培养基的种类图1、根据物理性质分合成培养基——成分明确，常用于分类、鉴定天然培养基——成分不明确，常用于工业生产2、根据化学成分分——用于微生物的分离计数——观察微生物的运动，鉴定菌种——常用于工业生产固体培养基（二）培养基的种类图1、根据物理性质分合成培养基—47固体培养基半固体培养基液体培养基需加入凝固剂，如琼脂固体培养基半固体培养基液体培养基需加入凝固剂，如琼脂48◆鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物，如加伊红和美蓝，和大肠杆菌的代谢产物结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽，可以用来鉴别大肠杆菌3、根据用途分◆选择培养基——在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长，如加高浓度的食盐，抑制多种细菌生长，分离到金黄色葡萄球菌◆鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别49选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基分离自生固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物选择培养基加入青霉素的培养基50①、目的要明确根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制②、营养要协调注意各种营养物质的浓度和比例，最重要为碳源和氮源的比，如：谷氨酸生产中C:N=4:1，菌体数↑谷氨酸↓。C:N=3:1，菌体数↓谷氨酸↑。③、pH要适宜

细菌pH6.5~7.5放线菌pH7.5~8.5真菌pH5.0~6.0（三）培养基的配制原则①、目的要明确（三）培养基的配制原则51（四）培养基的配置称量溶化调PH培养基的分装加棉塞包扎,贴标签加热不断搅拌名称日期制作者ＮaＯＨ、ＨＣl（四）培养基的配置称量溶化调PH培养基的分装加棉塞包扎,贴标522、灭菌2、灭菌533、搁置斜面50℃时，斜面长度不超过总长的一半增加培养基与菌种的接触面积3、搁置斜面50℃时，斜面长度不超过总长的一半增加培养基与菌54要点归纳要点归纳55（一）培养基

知识要点：1．培养基的用途和种类，指出培养基可分为液体和固体两大类；2．不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；3．尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。（二）无菌技术知识要点：1．无菌技术的概念；2．消毒与灭菌的概念及两者的区别；3．常用的消毒与灭菌的方法，接种环灼烧灭菌的方法。（一）培养基（二）无菌技术561、器具环境、操作者的灭菌、消毒2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种、纯化6、恒温箱中培养7、菌种的保存3.微生物实验室培养的基本操作程序临时保藏长期保藏恒温箱1、器具环境、操作者的灭菌、消毒3.微生物实验室培养的基本操571．培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

（二）倒平板操作的讨论1．培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。583．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。4．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。3．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？59（三）平板划线操作的讨论1．为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌，避免细菌污染环境和感染操作者。（三）平板划线操作的讨论602．在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3．在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少。每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而成的菌落。2．在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？61（四）涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸