微生物实验显微镜直接计数法课件

二、实验原理1.血球计数板法

利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上盖玻片后，容积为0.1mm3。（2）计数室刻度的规格16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。二、实验原理1计数室

计数室2微生物实验显微镜直接计数法课件3（3）计数和计算方法我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B=50,000A×B个5个方格的总菌数稀释倍数（3）计数和计算方法5个方格的总菌数稀释倍数42.测定生长量的其他方法平板菌落计数法、干重法和比浊法等。（1）平板菌落计数法（2）干重法（适合浓度较高的样品）取一定量菌液中→离心或过滤，分离菌体→烘干至恒重(温度可采用105℃、100℃或80℃)→称重。一般干重为湿重的10%-20%。2.测定生长量的其他方法5微生物实验显微镜直接计数法课件6（3）比浊法在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。该法适合测定浓度较高的样品。（3）比浊法7三、实验材料1.菌种：酵母菌（Saccharomycescerevisiae）悬液(已稀释100倍)2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。四、实验步骤1.检查计数板

检查计数板是否有破损。2.镜检计数室

在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。三、实验材料83.加样品

在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。3.加样品94.显微镜计数静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。5.清洗血球计数板计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。

4.显微镜计数10五、注意事项1.加样前先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；2.菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。3.计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；4.如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作为两个菌体计算；5.清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。6.一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。五、注意事项11特别注意血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！特别注意血球计数板均有编号，一人一个，务必12精品课件！精品课件！13精品课件！精品课件！14显微直接计数结果六、作业1001005个中格总数显微直接计数结果六、作业1001005个中格总数15二、实验原理1.血球计数板法

利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上盖玻片后，容积为0.1mm3。（2）计数室刻度的规格16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。二、实验原理16计数室

计数室17微生物实验显微镜直接计数法课件18（3）计数和计算方法我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B=50,000A×B个5个方格的总菌数稀释倍数（3）计数和计算方法5个方格的总菌数稀释倍数192.测定生长量的其他方法平板菌落计数法、干重法和比浊法等。（1）平板菌落计数法（2）干重法（适合浓度较高的样品）取一定量菌液中→离心或过滤，分离菌体→烘干至恒重(温度可采用105℃、100℃或80℃)→称重。一般干重为湿重的10%-20%。2.测定生长量的其他方法20微生物实验显微镜直接计数法课件21（3）比浊法在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。该法适合测定浓度较高的样品。（3）比浊法22三、实验材料1.菌种：酵母菌（Saccharomycescerevisiae）悬液(已稀释100倍)2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。四、实验步骤1.检查计数板

检查计数板是否有破损。2.镜检计数室

在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。三、实验材料233.加样品

在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。3.加样品244.显微镜计数静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。5.清洗血球计数板计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。

4.显微镜计数25五、注意事项1.加样前先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；2.菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。3.计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；4.如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作为两个菌体计算；5.清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。6.一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。五、注意事项26特别注意血球计数板均有编号，一人一