脂肪酸合成酶（FAS）活性检测试剂盒说明书- 微量法UPLC-MS-4433

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页脂肪酸合成酶（FAS）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4433规格：100T/96S

微量法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2支-20℃保存试剂二粉剂×2支-20℃保存试剂三液体20mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存溶液的配制：11mL试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃2禁止反复冻融。21mL试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃2禁止反复冻融。30.5mL试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃2禁止反复冻融。产品说明：（Fattyacidsynthetase，FAS）ANADPH340nm340nmFAS活性。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：紫外分光光度计//UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞样本的制备：按照细胞数量（104个）:提取液体积（mL）500~1000:1的比例（5001mL提取液）（300W395ming20min，取上清液，置于冰上待测。2（g）:提取液一体积(mL)1:5~10（0.1g1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心20min，取上清液，置于冰上待测。3、血清（浆）等液体样本：直接测定二、测定步骤1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。2、试剂三临用前置于37℃（哺乳动物）或者25℃（其他物种）保温15min。3、加样表（在96孔UV板或者微量石英比色皿中加入下列试剂）试剂名称测定管空白管上清液20-蒸馏水-20试剂一1616试剂二1616试剂三140140试剂四8815s1（1空白）1min15s2（2空白），ΔA（A1测定-A2测定）-（A1空白-A2空白）。空白管只需测定1-2次，如果样本数量过多也可以将试剂一到试剂四按上述比例混匀配制成工作液进行测定。三、FAS活性计算使用微量石英比色皿测定的计算公式按照蛋白浓度计算37℃（哺乳动物）25℃（其他物种）1nmolNADPH1酶活单位。FAS(U/mgprot)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T=1607.7×ΔA÷Cpr按照样本质量计算37℃（哺乳动物）25℃（其他物种）1nmolNADPH1活单位。FAS(U/g质量)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=1607.7×ΔA÷W按细胞数量计算37℃（哺乳动物）25℃（其他物种）1041nmolNADPH1个酶活单位。FAS(U/104cell)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T=1607.7×ΔA÷细胞数量按液体体积计算单位定义：在37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）条件下，每毫升样本每分钟氧化1nmolNADPH为1个酶活单位。FAS(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×109]÷V样÷T=1607.7×ΔAμL=2×10-20μL=0.02样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；细胞数量：以万计。使用96孔UV板测定的计算公式将上述计算公式中比色皿光径d-1cm变为d-0.6cm进行计算即可。注意事项：1、提取液中含有BSA（约2mg/mL），测定上清液蛋白浓