山梨醇脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书-微量法UPLC-MS-4248

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微量法UPLC-MS-4248100T/96S试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×5瓶2-8℃保存试剂二液体4mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体4mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×5支-20℃保存试剂五液体25mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂一：取3.4mL试剂五加入1瓶试剂一粉剂中溶解，再加入一支试剂四，现用现配，24h变质；2、标准品：临用前加入1.4mL蒸馏水，即10μmol/mLNADH标准品。-20℃保存4周，避免反复冻融。SDH（EC4）SDHNAD+NADHNADHNBTSDHSorbitol+NAD+

SDH

NADH+H++FructoseH++PMS+NBT Formazan（570nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。//96一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1104个（L为501001（501L（冰浴功率0031030次800×g℃102（L为15~100.1g1L，8000×g4℃10min3、血清（浆）样本：直接检测。二、测定步骤1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至570nm，可见分光光度计蒸馏水调零。2、标准管的测定：将10μmol/mLNADH标准品用水稀释至1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3μmol/mL的标准溶液(1)序号稀释前浓度（µmol/mL）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）110301701.5210100900131180200.941160400.851140600.761120800.6711001000.581801200.491601400.3实验中每个标准管需20µL标准溶液。（2）标准品测定表试剂名称(μL)标准管空白管标准溶液20-蒸馏水-20试剂二3030试剂三3030试剂一12012020200μL/96570nm下的吸光度，记为A标准管、A空白管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管。标准曲线只需做1-2次。3、样本的测定：试剂名称(μL)测定管样本20试剂二30试剂三30试剂一120/9610A1，3nm310秒时的吸光度，计算ΔA=A2-A1（）三、SDH活性计算1、标准曲线的绘制：ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。2、SDH活性计算：（）SDH单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/mL）=1000×x×V样÷V样÷T=333×xSDH1）按样本蛋白浓度计算单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/mg样样2）单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/g样样样总3）按细菌或细胞数量计算单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmolNADH定义为一个酶活力单位。SDH（U/104cell）=1000×x×V样÷(