α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书-可见分光光度法UPLC-MS-6003

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书可见分光光度法UPLC-MS-600350T/24S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：112.5mL2-8℃8周；2mg10mL1mg/mL2-8℃保存四周。α-β-α-(EC)α-1,4-α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。UnhydrolyzedStarch+Iodine BlueComplex（570nm）2-3可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）10.1g1mL5min16000g10min2（）二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。2、将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的标准溶液。序号（mg/mL）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）稀释后浓度（mg/mL）112008000.220.25005000.130.15005000.0540.055005000.02550.0255005000.012560.01255005000.0062570.006255005000.00312580.0031255005000.0015625实验中每个标准管需250µL标准溶液。3、按操作表依次加入各试剂：试剂（μL）测定管对照管空白管标准管标准空白管α-淀粉酶原液250250蒸馏水--250-250标准溶液250-70℃水浴15min左右，冷却试剂一250-250--蒸馏水-250-250250在40℃恒温水浴中准确保温10min试剂二125125125125125蒸馏水375375375375375570nmAAAAΔA=A-（A测定-A），ΔA=A标准-A1-2次。三、α-淀粉酶活性计算1、标准曲线的绘制：根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。2、α-淀粉酶活性的计算：单位定义：每g组织每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活力单位。α-(U/g样样样总单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。α-淀粉酶活性(U/mgprot)=x×V样÷（V样×Cpr）÷T=0.1×x÷Cpr单位定义：每mL液体每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。α-淀