DB34T4315-2022甜叶菊组培快繁技术规程-（高清正版）

ICS65.020.2034CCSB3434安 徽 省 地 方 标 准DB34/T4315—2022甜叶菊组培快繁技术规程TechnicalregulationsfortissuecultureandrapidpropagationofSteviarebaudiana20222022102620221126安徽省市场监督管理局发布DB34/T4315DB34/T4315—2022前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由阜阳师范大学提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。站、淮北市相山区农业农村水利局、安徽农之源生态农业有限公司。瑞龙、陈颖、于涛、徐灵杰、张顺。IIDB34/T4315DB34/T4315—2022DB34/T4315—2022温室温室建造按JB/T10594的规定执行。可选择玻璃温室或薄膜温室，温度可控范围15℃～32℃，DB34/T4315—2022温室温室建造按JB/T10594的规定执行。可选择玻璃温室或薄膜温室，温度可控范围15℃～32℃，可以喷水补湿，并且具有良好的防虫隔离条件。5培养基配制甜叶菊组培快繁技术规程范围本文件规定了甜叶菊[Steviarebaudiana（Bertoni）Hemsl.]组培快繁的组培设施、培养基配制、灭菌、无菌苗初代培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗、组培苗清洗和移栽、档案管理。本文件适用于甜叶菊组培苗工厂化生产。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。JB/T10594日光温室和塑料大棚结构与性能要求LY/T2289林木种苗生产经营档案NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。本文件没有需要界定的术语和定义。4组培设施洗涤室应宽敞明亮、通风良好、水电配套、排水畅通。墙面和地面应便于清洁，地面要做防滑处理。配置洗瓶机、烘箱、小推车等。准备室应空间宽敞、清洁明亮、通风良好、墙壁光滑、地面平坦。设有工作台和水池。子天平、电热磁搅拌器、酸度计、培养基自动定量灌装机等。接种室应干爽安静、清洁明亮，墙壁光滑平整，地面平坦无缝。等。培养室应温度可控，光照强度和光照时间可控，湿度可控，相对密闭。配置紫外灯、空气净化装置、空调、程控定时器、温度计、湿度计、光照培养箱等。1培养基类型基本培养基MS培养基为基本培养基，成分见附录A。初代培养基MS＋6-BA（6-苄氨基嘌呤）1.0mg/L～1.5mg/LNAA（萘乙酸）0.1mg/L～0.2mg/L30g/L5.5g/L。继代增殖培养基MS＋6-BA1.0mg/LNAA0.1mg/L～0.2mg/L30g/L5.5g/L。生根培养基1/2MSIBA0.1mg/L～0.5mg/L20g/L5.0g/L。培养基配制培养基配制NY/T2306的规定执行。1.0mol/LNaOHHClpH5.8。0.8cm～1.0cm。6灭菌培养基灭菌培养基应于12h内置于高压灭菌锅内，在1.1kg/cm2、121℃条件下，灭菌15min～20min，待压力降至0时，尽快取出存放在接种室中指定位置备用。接种工具灭菌1.1kg/cm2121℃15min～20min，待压力降至0时，取出放置在超净工作台上。超净工作台灭菌将灭菌的培养基和接种工具放置在超净工作台上，接通电源，打开超净工作台上的紫外灯灭菌25min～30min，先启动风机，再关闭紫外灯。接种前，工作台面用70％乙醇擦拭一遍。7无菌苗初代培养2外植体选取选用生长健壮、无病虫害的甜叶菊植株，取顶端长5～6节的茎段为外植体备用。外植体清洗2‰～5‰10min～15min。外植体消毒70％25s～30s70％乙醇倒去，用无菌水冲洗2次后，再浸入有效氯浓度2.0％次氯酸钠溶液消毒15min～20min，倒出4～5次，置于无菌滤纸上备用。外植体接种接种工具消毒接种时，剪刀、手术刀和镊子等接种工具保持无菌状态。外植体切取1.5cm～2.0cm接种将切取的茎段接种在诱导培养基上。每瓶培养基接种2～3个茎段，做好编号等信息标记。将切取的茎段接种在诱导培养基上。每瓶培养基接种2～3个茎段，做好编号等信息标记。培养条件23℃～272000lx～3000lx，12h/d。培养时间25d～30d。8继代增殖培养转接将生长健壮的无菌甜叶菊幼苗切成单株，转接至继代增殖培养基上。培养条件同7.5。培养时间25d～30d。培养代数继代增殖次数控制在15代以内。3DB34/T4315—2022生根培养转接2.0cm～3.0cm的继代培养苗，转接到生根培养基中。培养条件同7.5。培养时间18d～20d。炼苗炼苗时期4～52.0cm～5.0cm不定根时，便可炼苗。炼苗条件培养瓶放置在遮光率为70％～75％、相对湿度为70％～90％、温度为20℃～30℃的温室中，打开或半打开培养瓶盖炼苗。炼苗时长炼苗时长2d～3d。11组培苗清洗和移栽用自来水将炼苗后的组培苗基部的培养基冲洗干净后，移栽至已灭菌的基质中。12档案管理按LY/T2289的规定执行。4DB34/T4315DB34/T4315—2022附录A（资料性）MSMS培养基成分表见表A.1。表A.1MS培养基成分表成分含量（mg/L）大量元素硝酸钾KNO31900硝酸铵NH4NO31650硫酸镁MgSO4·7H2O370磷酸二氢钾KH2PO4170氯化钙CaCl2·2H2O440微量元素硫酸锰MnSO4·4H2O22.3硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6硼酸H3BO36.2碘化钾KI0.83钼酸钠Na2