DB22T3312-2021柞蚕蛹虫草菌种生产技术规程-（高清正版）

ICS65.020.01CCSB39ICS65.020.01CCSB39吉 林 省 地 方 标 准DB22/T3312—2021柞蚕蛹虫草菌种生产技术规程CodeofpracticeforspawnproductionofCordycepsmilitarisinAntheraeapernyi20212021112620211215吉林省市场监督管理厅发布前 言本文件按照GB/T1本文件起草单位：吉林省蚕业科学研究院。本文件主要起草人：周影、李森、朱兴友、祝长杰、王芹、刘娟。柞蚕蛹虫草菌种生产技术规程范围本文件适用于柞蚕蛹虫草母种和液体菌种（栽培种）的生产。（）GB/T12728—2006食用菌术语NY/T528—2010食用菌菌种生产技术规程3.1柞蚕蛹虫草northcordyceps3.1柞蚕蛹虫草northcordyceps蛹虫草菌（Cordycepsmilitaris（L.exFr.）Link）3.2母种stockculture3.3出草growingfruitingbody菌丝在柞蚕蛹体内生长至表面形成原基，由原基发育成子实体的过程。3.4僵化fossilization柞蚕蛹接种蛹虫草菌种后，蛹体变僵硬的状态。3.5液体菌种liquidspanw母种接种于液体培养基扩繁而来的纯菌丝体栽培种。3.6菌丝转色myceliumchangecolour在有光条件下，菌丝由白色转为橙黄或橙色。3.7气生菌丝aerialhypha生长在培养基表面空间的菌丝。[来源：GB/T12728—2006，2.2.7]柞蚕蛹虫草菌种的生产程序包括5个阶段。程序流程图如图1所示。1生产条件（见5.1）1生产条件（见5.1）2菌种来源（见5.2）3母种生产（见5.3）3母种生产（见5.3）5包装贮存运输（见6）5包装贮存运输（见6）4液体菌种生产（见5.4）图1柞蚕蛹虫草菌种生产程序5生产技术5生产技术场地环境应符合NY/T528—2010中4.2的规定。设施设备应符合NY/T528—2010中4.4的规定。3次重复，每次kg7040d～45dcm～8cm5.3母种生产配方及配制方法见附录A.1。分装18mm×180mm或20mm×200mm灭菌121℃维持3080℃～90冷却1cmcm～5cm接种培养7培养7d～104℃冰箱中。检验接种后第3d、第6d和菌丝体长满培养基后逐个进行检验，挑出未活、污染和生长不良的培养物，质量应符合表1的要求。表1试管扩繁要求5.3.2三角瓶扩繁项目要求检验方法容器完整、洁净、无破损、无裂纹肉眼观察棉塞干燥、洁净，松紧适中，透气培养基灌入量试管总容积的四分之一测量斜面长度顶端距棉塞4cm～5cm菌丝生长量长满斜面肉眼观察菌种正面外观洁白、粗壮、浓密、绒毛状气生菌丝，见光后菌丝24h内变为橙黄或橙色，均匀、无角变，无原基，表面无分泌物，无杂菌斜面背面外观培养基无干缩，气生菌丝与基质结合部位呈黄色，均匀，无暗斑菌丝形态生长5d～7d显微镜下观察配方及配制方法见附录A.1。分装150mL40mL5cm～5.5cm灭菌℃维持3080℃～90冷却趁热摆放于洁净台面上进行冷却、凝固。接种3mm～5mm×3mm～5mm40瓶～508d～114℃冰箱中。5.3.2.7检验接种后第3d、第7d和菌丝体长满培养基后逐个进行检验，挑出未活、污染和生长不良的培养物，质量应符合表2的要求。表2三角瓶扩繁要求配方及配制方法见附录A.2。项目要求检验方法容器完整、洁净、无破损、无裂纹肉眼观察棉塞干燥、洁净，松紧适中，透气培养基灌入量40mL测量培养基上表面距棉塞的距离5cm～5.5cm菌丝生长量长满容器肉眼观察菌种外观24h黄或橙色，均匀、无角变，无原基，无子实体，表面无分泌物，无杂菌菌丝形态生长5d～7d显微镜下观察分装将液体培养基分装至500mL无色耐高温玻璃三角瓶中，每瓶分装量为200mL，并加入20粒～2514cm～15cm灭菌分装后置于高压蒸汽灭菌锅，121℃维持30min，当温度降至80℃～90℃时，灭菌锅放气阀无蒸汽排出时，方可开启锅盖。冷却将液体培养基摆放于洁净台面上，待冷却至30℃以下进行接种。接种4块～63mm～5mm×3mm～5mm10～15培养置于（22±2）℃条件下避光静止培养24h后，在150r/min、(22±2）℃条件下，避光震荡培养96h，液体菌种应随制随用。每天对液体菌种逐个检验，挑出未萌发、浑浊和生长不良的培养物，液体菌种质量应符合表3的要求。表3液体菌种要求每天对液体菌种逐个检验，挑出未萌发、浑浊和生长不良的培养物，液体菌种质量应符合表3的要求。表3液体菌种要求6包装、贮存、运输包装。6.2贮存项目要求检验方法容器完整、洁净、无破损、无裂纹肉眼观察无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适中，透气培养基灌入量200mL测量培养基上表面距瓶口的距离14cm～15cm菌丝生长时间96h记录菌液外观菌丝絮状或球状（0.5mm～2mm）的澄清悬浊液肉眼观察杂菌无杂菌显微镜下观察母种在4℃～10℃贮存不超过60d，液体菌种不宜贮存。6.3运输运输不得挤压，碰撞，在4℃～25℃条件下运输。附录A（规范性）培养基配方及配制方法马铃薯200g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、磷酸二氢钠2.5g，磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.7g、琼脂20g、水1000mL，pH自然。以配制1000mL200g1cm×1cm×1cm1000mL，15min，用41000mL马铃薯200g、葡萄糖10