动物细胞工程课件

2.2动物细胞工程2.2动物细胞工程1“温故知新”1.植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养、植物体细胞杂交离体的植物器官、组织或细胞（外植体）愈伤组织胚状体或丛芽完整植株脱分化再分化“温故知新”1.植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培2植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合正在融合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞愈伤组织杂种植株去细胞壁纤维素酶果胶酶物理方法化学方法：离心振动电刺激聚乙二醇(PEG)脱分化植物组织培养植物细胞融合酶解法人工诱导方法过程：意义？克服不同生物远源杂交不亲和的障碍！原理？细胞膜的流动性和细胞的全能性。再分化融合完成的标志植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合正在融合32.动物细胞工程常用的技术手段有哪些？动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体——其他动物细胞工程技术的基础2.动物细胞工程常用的技术手段有哪些？动物细胞培养——其他动4“动物细胞培养发展历史”20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。“动物细胞培养发展历史”20世纪初，人们不知道神经纤5动物细胞工程课件6问题讨论:取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后构建人造皮肤再移植。烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？图2-15用培养的人细胞构建的人造皮肤问题讨论:取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后构建人7一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出

，

将它分散成

，然后，放在适宜的

中

，让这些细胞

。相关的组织单个细胞培养基生长和增殖1.概念：2.原理：细胞的增殖一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出8一、动物细胞培养幼龄动物3、过程：取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞单个细胞的获取细胞悬浮液的制取细胞的传代培养细胞的原代培养一、动物细胞培养幼龄动物3、过程：取动物器官剪碎组织胰蛋白酶91、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？“想一想”胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛

2、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？没有3、动物细胞培养过程是否将组织分散成单个细胞了呢？是单个细胞的获取1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器10４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶有什么作用呢？由此可说明细胞间的物质主要是什么成份？６、细胞膜的主要成份是什么？剪刀剪碎,然后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质蛋白质和磷脂细胞间的成份主要是蛋白质“知识拓展”动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。单个细胞的获取４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶有什么作用11７、胰蛋白酶对细胞有损伤作用吗？８、既然胰蛋白酶对细胞有损伤作用，那将动物组织分散成单个细胞时我们应该注意什么问题呢？有注意时间的控制９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2-7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。单个细胞的获取()()单个细胞“试一试”取动物组织块剪碎胰蛋白酶处理７、胰蛋白酶对细胞有损伤作用吗？８、既然胰蛋白酶对细胞有损12细胞悬浮液的制取制成细胞悬液用胰蛋白酶处理分散成单个细胞如何制取细胞悬浮液呢？用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬浮液细胞悬浮液的制取制成细胞悬液用胰蛋白酶处理如何制取细胞悬浮液13细胞的原代培养人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上1.动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？培养贴壁性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能够生长增殖接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。2.在动物细胞培养过程中为何将组织分散成单个细胞的呢？成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖细胞的原代培养人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养14疑问？细胞在原代培养时，发生了细胞接触抑制现象，而此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办呢？将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。传代培养细胞的传代培养1.传代培养的细胞能一直传代下去吗？2.那为什么还是有些能一直传下去呢？4.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？3.那我们动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？不都能发生突变，朝着癌细胞方向发展不是保存10代以内的细胞，因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展疑问？细胞在原代培养时，发生了细胞接触抑制现象，而此时细胞数15动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个

细胞加培养液细胞悬浮液原代培养传代培养10代细胞细胞贴壁50代细胞剥离、分瓶部分细胞“癌变”，无限传代细胞动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个

细胞加培养液16多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据我们所学知识，思考并讨论以下问题：1、体外培养细胞时需要提供哪些物质？2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？问题探讨多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据我们所学知识，思17二、细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等）3、温度和pH36.5+（-）0.5℃，PH为7.2-7.44、气体环境

O2和CO2（95%空气和5%CO2）二、细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境18三、动物细胞培养技术的应用

1、大规模生产蛋白质生物制品2、为烧伤病人提供可供移植皮肤3、用于检测有毒物质4、为基因工程提供受体细胞5、用于科学研究三、动物细胞培养技术的应用1、大规模生产蛋白质生物制品192.2动物细胞工程二、细胞培养的条件三、动物细胞培养技术的应用单个细胞的获取细胞悬浮液的制取细胞的原代培养细胞的传代培养一、动物细胞培养1、概念：2、原理：细胞的增殖3、过程：2.2动物细胞工程二、细胞培养的条件三、动物细胞培养技术的20概念图细胞工程“练一练”概念图细胞工程“练一练”211．在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（）A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养只能传50代左右，所培育的细胞会衰老死去D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理2．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）

A.容易产生各种变异B.具有更强的全能性

C.取材十分方便D.分裂增殖的能力强随堂练习1．在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（）随堂练223.右图是动物细胞培养的基本示意图。请据此回答。(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自

。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是

，然后用

酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目是

。(3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和

等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第

代，到这时的培养称为

。(4)在C瓶中正常培养了一段时间，发现细胞全部死亡。原因是

。动物胚胎或幼龄动物的器官或组织剪碎胰蛋白使每个细胞能与培养液接触动物血清10原代培养细胞没有发生癌变3.右图是动物细胞培养的基本示意图。请据此回答。动物胚胎或幼232.2动物细胞工程2.2动物细胞工程24“温故知新”1.植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养、植物体细胞杂交离体的植物器官、组织或细胞（外植体）愈伤组织胚状体或丛芽完整植株脱分化再分化“温故知新”1.植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培25植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合正在融合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞愈伤组织杂种植株去细胞壁纤维素酶果胶酶物理方法化学方法：离心振动电刺激聚乙二醇(PEG)脱分化植物组织培养植物细胞融合酶解法人工诱导方法过程：意义？克服不同生物远源杂交不亲和的障碍！原理？细胞膜的流动性和细胞的全能性。再分化融合完成的标志植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合正在融合262.动物细胞工程常用的技术手段有哪些？动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体——其他动物细胞工程技术的基础2.动物细胞工程常用的技术手段有哪些？动物细胞培养——其他动27“动物细胞培养发展历史”20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。“动物细胞培养发展历史”20世纪初，人们不知道神经纤28动物细胞工程课件29问题讨论:取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后构建人造皮肤再移植。烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？图2-15用培养的人细胞构建的人造皮肤问题讨论:取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后构建人30一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出

，

将它分散成

，然后，放在适宜的

中

，让这些细胞

。相关的组织单个细胞培养基生长和增殖1.概念：2.原理：细胞的增殖一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出31一、动物细胞培养幼龄动物3、过程：取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞单个细胞的获取细胞悬浮液的制取细胞的传代培养细胞的原代培养一、动物细胞培养幼龄动物3、过程：取动物器官剪碎组织胰蛋白酶321、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？“想一想”胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛

2、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？没有3、动物细胞培养过程是否将组织分散成单个细胞了呢？是单个细胞的获取1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器33４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶有什么作用呢？由此可说明细胞间的物质主要是什么成份？６、细胞膜的主要成份是什么？剪刀剪碎,然后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质蛋白质和磷脂细胞间的成份主要是蛋白质“知识拓展”动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。单个细胞的获取４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶有什么作用34７、胰蛋白酶对细胞有损伤作用吗？８、既然胰蛋白酶对细胞有损伤作用，那将动物组织分散成单个细胞时我们应该注意什么问题呢？有注意时间的控制９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2-7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。单个细胞的获取()()单个细胞“试一试”取动物组织块剪碎胰蛋白酶处理７、胰蛋白酶对细胞有损伤作用吗？８、既然胰蛋白酶对细胞有损35细胞悬浮液的制取制成细胞悬液用胰蛋白酶处理分散成单个细胞如何制取细胞悬浮液呢？用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬浮液细胞悬浮液的制取制成细胞悬液用胰蛋白酶处理如何制取细胞悬浮液36细胞的原代培养人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上1.动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？培养贴壁性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能够生长增殖接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。2.在动物细胞培养过程中为何将组织分散成单个细胞的呢？成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖细胞的原代培养人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养37疑问？细胞在原代培养时，发生了细胞接触抑制现象，而此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办呢？将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。传代培养细胞的传代培养1.传代培养的细胞能一直传代下去吗？2.那为什么还是有些能一直传下去呢？4.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？3.那我们动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？不都能发生突变，朝着癌细胞方向发展不是保存10代以内的细胞，因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展疑问？细胞在原代培养时，发生了细胞接触抑制现象，而此时细胞数38动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个

细胞加培养液细胞悬浮液原代培养传代培养10代细胞细胞贴壁50代细胞剥离、分瓶部分细胞“癌变”，无限传代细胞动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个

细胞加培养液39多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据我们所学知识，思考并讨论以下问题：1、体外培养细胞时需要提供哪些物质？2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？问题探讨多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据我们所学知识，思40二、细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等）3、温度和pH36.5+（-）0.5℃，PH为7.2-7.44、气体环境

O2和CO2（95%空气和5%CO2）二、细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境41三、动物细胞培养技术的应用

1、大规模生产蛋白质生物制品2、为烧伤病人提供可供移植皮肤3、用于检测有毒物质4、为基因工程提供受体细胞5、用于科学研究三、动物细胞培养技术的应用1、大规模生产蛋白质生物制品422.2动物细胞工程二、细胞培养的条件三、动物细胞培养技术的应用单个细胞的获取细胞悬浮液的制取细胞的原代培养细胞的传代培养一、动物细胞培养1、概念：2、原理：细胞的增殖3、过程：2.2动物细胞工程二、细胞培养的条件三、动物细胞培养技术的43概念图细胞工程“练一练”概念图细胞工程“练一练”441．在动物细胞培养的