李晓红侵袭性真菌感染的形态学诊断课件

1侵袭性真菌感染的形态学诊断第六届全国侵袭性真菌病实验室诊断及临床治疗新进展研讨会汇报李晓红1侵袭性真菌感染的形态学诊断第六届全国侵袭性真菌病实验室诊断1真菌室封闭式实验室脚感开门器生物安全柜

涂片（10%KOH、棉酚兰）丝状菌压片2真菌室生物安全柜2228℃和35℃恒温恒湿培养箱真菌常规培养28℃、真菌药敏35℃（检测双相真菌必备）328℃和35℃恒温恒湿培养箱33显微镜观察形态学10%KOH压片快速鉴定非常重要的步骤

真菌小培养 真菌乳酸酚棉蓝染色4显微镜观察形态学10%KOH压片44培养基、试剂、鉴定药敏lllllllllll沙保弱琼脂斜面科玛嘉显色培养基（CHROMagar）沙保弱琼脂（Sabouraudagar，SDA）平皿土豆培养基（Potatoagar,PDA）脑心浸液培基（BHI）乳酸棉酚蓝真菌KOH压片API20C试剂盒VITEK2YST鉴定卡ATBFUNGUS3酵母菌药敏试验真菌Etest药敏试验培养基、试剂、鉴定药敏l沙保弱琼脂斜面5常见引起侵袭性感染的真菌有那几种？ll引起侵袭性感染的真菌是指侵袭深部组织和内脏，引起全身性感染的病原真菌或条件致病真菌主要包括念珠菌属、隐球菌菌属、曲霉属、毛霉属和双相型真菌等，常见双相型真菌有组织胞浆菌、马尔尼菲青霉菌等6常见引起侵袭性感染的真菌有那几种？l引起侵袭性感染的真菌是指6显微镜观察形态学是非常重要的步骤l某些真菌特异性结构是在感染病症，是显微镜直接检查确诊如：卡氏肺孢子虫菌孢囊的检测（六胺银染色)13p0681痰，感染内科憋气（HIV+)13p0854肺泡灌洗液，ICU感染性休克呼吸衰竭9显微镜观察形态学是非常重要的步骤l某些真菌特异性结构是在感染7CSF新型隐球菌09W7612儿科发热待查革兰染色CSF墨汁染色（+）13W1998神经科门诊(20倍低倍镜、40倍高倍镜）

墨汁染色10CSF新型隐球菌09W7612革兰染色CSF墨汁染色（+）1813R588痰呼吸科诊断：间质性肺炎涂片：有隔菌丝45℃高度可疑曲菌（报危急！）培养：烟曲霉1113R588痰呼吸科诊断：间质性肺炎11910W8601胸水革兰染色-低倍镜-油镜（诊断：肺癌痰培养克柔、白念、热带）1210W8601胸水革兰染色-低倍镜-油镜121013R3268消化内科病房痰革兰染色：酵母样孢子假菌丝培养：白念、鲍曼痰、支气管吸取物、便均培养：白念、光滑1313R3268消化内科病房痰革兰染色：酵母样孢子假1113z6088分泌物（急诊内科-消化科）诊断：溃疡性结肠炎涂片：酵母样孢子假菌丝大量、培养：白念1413z6088分泌物（急诊内科-消化科）141212R12739痰血液科诊断：浆细胞白血病涂片：关节孢子、芽生孢子、菌丝及断裂后形成的孢子培养：阿萨希毛孢子菌1512R12739痰血液科诊断：浆细胞白血病151313R330痰诊断：卵巢癌复发涂片：有隔菌丝培养：地霉属（长方形关节孢子有角部发芽、没有芽孢）1613R330痰诊断：卵巢癌复发161413r2231痰国际医疗部诊断：不明原因发热需氧血培养1次痰培养+涂片1次培养（-)涂片提示：可疑努卡菌建议复查1713r2231痰国际医疗部171513xr750痰涂片（未做努卡检查）免疫内科病房诊断：皮肌炎、支气管扩张弱抗酸（+)报危急！培养+药敏：圣乔治教堂努卡菌（Nocadiacvriacigeorgica）1813xr750痰涂片（未做努卡检查）1816

采血及无菌部位标本送检(需氧、厌氧、儿童瓶、分支杆菌快速/真菌）

检验中报警2014-8-28PUMCHxxl19ììPDF文件使用"pdfFactory"试用版本创建 采血及无菌部位标本送检2014-8-28PUMCHxxl17需氧瓶12.24h报警涂片找到孢子加种显色培养基白念珠菌纯培养涂片

血培养阳性瓶直接涂片显色培养基20需氧瓶12.24h报警白念珠菌纯培养涂片 血培养阳性瓶直接涂18

血培养35.38h报警近平滑念珠菌B07K04681API20CAUX鉴定

显色培养基21 血培养35.38h报警B07K04681211913B15620外周血56h报警支气管扩张直接革兰染色有隔真菌丝土豆培养基2天,大分生孢子紡锤形2213B15620外周血56h报警支气管扩张222013B15620外周血土豆琼脂8天菌落正反面呈橘红色半裸镰刀菌？2313B15620外周血半裸镰刀菌？2321细菌室在此患者诊治过程中与临床沟通对后续的诊治有所提示lllllllll病例特点:咳黄色痰10余年，间断有发热。陈旧性肺结核35年，2012年出现活动后气短CT影像诊断：印象：双肺多发斑片影伴支气管扩张考虑感染性改变可能痰培养绿脓杆菌，特治星—泰能—可乐必妥PCT(-)9月26日G实验：60pg/ml正常TB细胞亚群：B细胞比例降低，NF细胞比例升高，CD8+T细胞比例稍低，纯真CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞有异常激活10月12日抽外周血需氧瓶56小时报警，直接涂片大量有隔菌丝10月13日发热38℃，患者自动要求出院10月22日外周血培养镰刀菌属24细菌室在此患者诊治过程中与临床沟通对后l病例特点:2422真菌室培养阳性率最高的丝状真菌lll曲霉菌属：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、杂色曲霉和构巢曲霉等是常见的致病菌可从痰、支气管灌洗液、肺组织、血、外耳道、鼻窦、腹膜液等标本中分离到如果镜检看到菌丝有隔，呈二叉型，45度角分枝，高度可疑曲霉菌25真菌室培养阳性率最高的丝状真菌l曲霉菌属：烟曲霉、黄曲霉、黑23常见曲霉菌镜下形态（1）26常见曲霉菌镜下形态（1）2624常见曲霉菌镜下形态（2）27常见曲霉菌镜下形态（2）2725丝状真菌沙氏\土豆平皿点种非常重要观察菌落形态取分纯菌压片黄曲霉烟曲霉28丝状真菌沙氏\土豆平皿点种非常重要黄曲霉烟曲霉2826

13XR2689痰烟曲霉烟曲霉菌绒状或絮状边缘为白色—烟绿色分生孢子头、分生孢子梗、顶囊倒烧瓶状、瓶梗单层、分生孢子29 13XR2689痰烟曲霉2927肺组织13Z14598黄曲霉诊断：咳血、左上肺占位

粗毛毯状或放射状皱纹 黄色-黄绿色-棕绿 分生孢子头疏松放射状、分生孢 子梗长、顶囊、梗基、瓶梗、小 分生孢子30肺组织13Z14598黄曲霉3028肺活检标本真菌检测的意义llllllll咳血8个月，2013.8.1胸外科诊断:左肺上叶真菌感染手术:左开胸，左肺上叶切除术痰培养:绿脓、肺克痰真菌培养:丝状真菌肺活检真菌培养:黄曲霉两性霉素B:0.38μg/ml,伊曲康唑0.5μg/ml，伏立康唑0.125μg/mlCT检查:左肺上叶尖后段见气囊状影，支气管扩张及高密度致密影，周边可见磨玻璃密度影……病理冰冻结果:左上肺考虑为真菌菌团，PAS（+）六胺银（+）粘卡（-）31肺活检标本真菌检测的意义l咳血8个月，2013.8.1胸外科2913R2854痰神经科诊断：复发性多发血管母细胞瘤涂片：有隔菌丝、顶囊？培养：黑曲霉3213R2854痰3230黑曲霉菌分生孢子头、分生孢子梗长、顶囊、梗基、瓶梗、分生孢子表面粗糙厚绒状白色-黄色区域-黑色痰诊断：肺肿物33黑曲霉菌333113R08506构巢曲霉（壳细胞）内科ICU、鼻前庭拭子3413R08506构巢曲霉（壳细胞）3432CAPF-14：PDA培养6天乳酸酚棉蓝压片：分生孢子梗短、壳细胞CAPF-14：PDA培养6天乳酸酚棉蓝压片：分生孢子梗短3313Z11959痰棒曲霉诊断：肺炎、肺间质纤维化3613Z11959痰棒曲霉3634肺组织组织胞浆菌(双相真菌)28ºCSDA培养，镜下典型大分生孢子表面有指状突起37肺组织组织胞浆菌(双相真菌)28ºCSDA培养，镜下典型大35显示37ºC培养呈酵母镜下圆形橢显示25ºC侧支分生孢子梗和分生圆形长形（酵母样菌体）孢子链马纳菲青霉菌（丝状菌菌落）38显示37ºC培养呈酵母镜下圆形橢显示25ºC侧支分生孢36毛霉属直接镜检及培养lllll组织标本鼻窦抽吸物肺支气管冲洗液（离心）可见宽大（7-15mm）透明极少分隔，分支呈直角的菌丝有诊断意义毛霉属菌落生长迅速疏松呈灰或褐灰色大型孢子囊,无囊托,无匍匐菌丝及假根39毛霉属直接镜检及培养l组织标本3937孢子囊、包囊梗从菌丝长出、90度角分枝菌丝毛霉属涂片08z09969sp孢囊梗、囊轴、孢子囊孢子40孢子囊、包囊梗从菌丝长出、毛霉属涂片08z09969sp3813Z14339痰诊断：肺部阴影根霉属：白色-灰褐色至黑色匍匐菌丝，菌丝由假根长出，假根,孢囊梗,孢子囊,孢子囊孢子4113Z14339痰4139帚狀枝真菌标本中不常见条件致病菌或环境中污染菌区别青霉菌属（Aspergillus）或透明丝孢霉和暗色丝孢霉病的病原体（瓶霉、外瓶霉、枝孢霉）

绒状灰绿色青霉属

42帚狀枝真菌标本中不常见条件 绒状灰绿色青霉属4240红色毛癣菌13z14691脓标本诊断：慢性粒-单核细胞白血病43红色毛癣菌4341CAPF-16:脱发部位皮损标本须癣毛癣菌SDA培养6天，棒状大分生孢子，螺旋状菌丝结节状器官44CAPF-16:脱发部位皮损标本4442CAPF-16:脱发部位皮损标本须癣毛癣菌

SDA培养5天，白色绒毛状菌落，扁平圆盘状，背面黄色45CAPF-16:脱发部位皮损标本4543须癣毛癣菌与红色毛癣菌区别红色毛癣菌菌落背面典型酒红色诊断：慢性粒-单核细胞白血病46须癣毛癣菌与红色毛癣菌区别4644细菌室可为临床医师做的细菌、真菌、分枝杆菌ll及时报告血培养报警瓶/无菌部位标本危急报告结果，严格按照三级报告/危急报告制度及时与临床主管医生联系融入临床，了解临床，学习临床，因为在患者诊治过程中我们和临床医师有着共同的责任！

谢谢！47细菌室可为临床医师做的l及时报告血培养报警瓶/无菌部位标本危451侵袭性真菌感染的形态学诊断第六届全国侵袭性真菌病实验室诊断及临床治疗新进展研讨会汇报李晓红1侵袭性真菌感染的形态学诊断第六届全国侵袭性真菌病实验室诊断46真菌室封闭式实验室脚感开门器生物安全柜

涂片（10%KOH、棉酚兰）丝状菌压片2真菌室生物安全柜24728℃和35℃恒温恒湿培养箱真菌常规培养28℃、真菌药敏35℃（检测双相真菌必备）328℃和35℃恒温恒湿培养箱348显微镜观察形态学10%KOH压片快速鉴定非常重要的步骤

真菌小培养 真菌乳酸酚棉蓝染色4显微镜观察形态学10%KOH压片449培养基、试剂、鉴定药敏lllllllllll沙保弱琼脂斜面科玛嘉显色培养基（CHROMagar）沙保弱琼脂（Sabouraudagar，SDA）平皿土豆培养基（Potatoagar,PDA）脑心浸液培基（BHI）乳酸棉酚蓝真菌KOH压片API20C试剂盒VITEK2YST鉴定卡ATBFUNGUS3酵母菌药敏试验真菌Etest药敏试验培养基、试剂、鉴定药敏l沙保弱琼脂斜面50常见引起侵袭性感染的真菌有那几种？ll引起侵袭性感染的真菌是指侵袭深部组织和内脏，引起全身性感染的病原真菌或条件致病真菌主要包括念珠菌属、隐球菌菌属、曲霉属、毛霉属和双相型真菌等，常见双相型真菌有组织胞浆菌、马尔尼菲青霉菌等6常见引起侵袭性感染的真菌有那几种？l引起侵袭性感染的真菌是指51显微镜观察形态学是非常重要的步骤l某些真菌特异性结构是在感染病症，是显微镜直接检查确诊如：卡氏肺孢子虫菌孢囊的检测（六胺银染色)13p0681痰，感染内科憋气（HIV+)13p0854肺泡灌洗液，ICU感染性休克呼吸衰竭9显微镜观察形态学是非常重要的步骤l某些真菌特异性结构是在感染52CSF新型隐球菌09W7612儿科发热待查革兰染色CSF墨汁染色（+）13W1998神经科门诊(20倍低倍镜、40倍高倍镜）

墨汁染色10CSF新型隐球菌09W7612革兰染色CSF墨汁染色（+）15313R588痰呼吸科诊断：间质性肺炎涂片：有隔菌丝45℃高度可疑曲菌（报危急！）培养：烟曲霉1113R588痰呼吸科诊断：间质性肺炎115410W8601胸水革兰染色-低倍镜-油镜（诊断：肺癌痰培养克柔、白念、热带）1210W8601胸水革兰染色-低倍镜-油镜125513R3268消化内科病房痰革兰染色：酵母样孢子假菌丝培养：白念、鲍曼痰、支气管吸取物、便均培养：白念、光滑1313R3268消化内科病房痰革兰染色：酵母样孢子假5613z6088分泌物（急诊内科-消化科）诊断：溃疡性结肠炎涂片：酵母样孢子假菌丝大量、培养：白念1413z6088分泌物（急诊内科-消化科）145712R12739痰血液科诊断：浆细胞白血病涂片：关节孢子、芽生孢子、菌丝及断裂后形成的孢子培养：阿萨希毛孢子菌1512R12739痰血液科诊断：浆细胞白血病155813R330痰诊断：卵巢癌复发涂片：有隔菌丝培养：地霉属（长方形关节孢子有角部发芽、没有芽孢）1613R330痰诊断：卵巢癌复发165913r2231痰国际医疗部诊断：不明原因发热需氧血培养1次痰培养+涂片1次培养（-)涂片提示：可疑努卡菌建议复查1713r2231痰国际医疗部176013xr750痰涂片（未做努卡检查）免疫内科病房诊断：皮肌炎、支气管扩张弱抗酸（+)报危急！培养+药敏：圣乔治教堂努卡菌（Nocadiacvriacigeorgica）1813xr750痰涂片（未做努卡检查）1861

采血及无菌部位标本送检(需氧、厌氧、儿童瓶、分支杆菌快速/真菌）

检验中报警2014-8-28PUMCHxxl19ììPDF文件使用"pdfFactory"试用版本创建 采血及无菌部位标本送检2014-8-28PUMCHxxl62需氧瓶12.24h报警涂片找到孢子加种显色培养基白念珠菌纯培养涂片

血培养阳性瓶直接涂片显色培养基20需氧瓶12.24h报警白念珠菌纯培养涂片 血培养阳性瓶直接涂63

血培养35.38h报警近平滑念珠菌B07K04681API20CAUX鉴定

显色培养基21 血培养35.38h报警B07K04681216413B15620外周血56h报警支气管扩张直接革兰染色有隔真菌丝土豆培养基2天,大分生孢子紡锤形2213B15620外周血56h报警支气管扩张226513B15620外周血土豆琼脂8天菌落正反面呈橘红色半裸镰刀菌？2313B15620外周血半裸镰刀菌？2366细菌室在此患者诊治过程中与临床沟通对后续的诊治有所提示lllllllll病例特点:咳黄色痰10余年，间断有发热。陈旧性肺结核35年，2012年出现活动后气短CT影像诊断：印象：双肺多发斑片影伴支气管扩张考虑感染性改变可能痰培养绿脓杆菌，特治星—泰能—可乐必妥PCT(-)9月26日G实验：60pg/ml正常TB细胞亚群：B细胞比例降低，NF细胞比例升高，CD8+T细胞比例稍低，纯真CD4+T细胞比例降低，CD8+T细胞有异常激活10月12日抽外周血需氧瓶56小时报警，直接涂片大量有隔菌丝10月13日发热38℃，患者自动要求出院10月22日外周血培养镰刀菌属24细菌室在此患者诊治过程中与临床沟通对后l病例特点:2467真菌室培养阳性率最高的丝状真菌lll曲霉菌属：烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、杂色曲霉和构巢曲霉等是常见的致病菌可从痰、支气管灌洗液、肺组织、血、外耳道、鼻窦、腹膜液等标本中分离到如果镜检看到菌丝有隔，呈二叉型，45度角分枝，高度可疑曲霉菌25真菌室培养阳性率最高的丝状真菌l曲霉菌属：烟曲霉、黄曲霉、黑68常见曲霉菌镜下形态（1）26常见曲霉菌镜下形态（1）2669常见曲霉菌镜下形态（2）27常见曲霉菌镜下形态（2）2770丝状真菌沙氏\土豆平皿点种非常重要观察菌落形态取分纯菌压片黄曲霉烟曲霉28丝状真菌沙氏\土豆平皿点种非常重要黄曲霉烟曲霉2871

13XR2689痰烟曲霉烟曲霉菌绒状或絮状边缘为白色—烟绿色分生孢子头、分生孢子梗、顶囊倒烧瓶状、瓶梗单层、分生孢子29 13XR2689痰烟曲霉2972肺组织13Z14598黄曲霉诊断：咳血、左上肺占位

粗毛毯状或放射状皱纹 黄色-黄绿色-棕绿 分生孢子头疏松放射状、分生孢 子梗长、顶囊、梗基、瓶梗、小 分生孢子30肺组织13Z14598黄曲霉3073肺活检标本真菌检测的意义llllllll咳血8个月，2013.8.1胸外科诊断:左肺上叶真菌感染手术:左开胸，左肺上叶切除术痰培养:绿脓、肺克痰真菌培养:丝状真菌肺活检真菌培养:黄曲霉两性霉素B:0.38μg/ml,伊曲康唑0.5μg/ml，伏立康唑0.125μg/mlCT检查:左肺上叶尖后段见气囊状影，支气管扩张及高密度致密影，周边可见磨玻璃密度影……病理冰冻结果:左上肺考虑为真菌菌团，PAS（+）六胺银（+）粘卡（-）31肺活检标本真菌检测的意义l咳血8个月，2013.8.1胸外科7413R2854痰神经科诊断：复发性多发血管母细胞瘤涂片：有隔菌丝、顶囊？培养：黑曲霉3213R2854痰3275黑曲霉菌分生孢子头、分生孢子梗长、顶囊、梗基、瓶梗、分生孢子表面粗糙厚绒状白色-黄色区域-黑色痰诊断：肺肿物33黑曲霉菌337613R08506构巢曲霉（壳细胞）内科ICU、鼻前庭拭子3413R08506构巢曲霉（壳细胞）3477CAPF-14：PDA培养6天乳酸酚棉蓝压片：分生孢子梗短、壳细胞CAPF-14：PDA培养6天乳酸酚棉蓝压片：分生孢子梗短7813Z11959痰棒曲霉诊断：肺炎、肺间质纤维化3613Z11959痰棒曲霉3679肺组织组织胞浆菌(双相真菌)28ºCSDA培养，镜下典型大分生孢子表面有指状突起37肺组织组织胞浆菌(双相真菌)28ºCSDA培养，镜下典型大80显示37ºC培养呈酵母镜下圆形橢显示25ºC侧支分生孢子梗和分生圆形长形（酵母样菌体）