最新植物生理学实验课件

上海师范大学植物生理学实验课件上海师范大学植物生理学实验课件1植物组织渗透势的测定实验原理当植物组织细胞内的汁液其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。这种渗透势相等的溶液为等渗溶液。该溶液的浓度称为等渗浓度。当用一系列梯度浓度溶液观察细胞质壁分离现象时，细胞的等渗浓度将介于刚刚引起初始质壁分离的浓度和尚不能引起质壁分离的浓度之间的溶液浓度。代入公式即可计算其渗透势。植物组织渗透势的测定实验原理2最新植物生理学实验课件3最新植物生理学实验课件4最新植物生理学实验课件5最新植物生理学实验课件6最新植物生理学实验课件7最新植物生理学实验课件8植物组织水势的测定实验步骤用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同浓度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L）各10mL，分别注入编好号的7支对照组试管中。另取7个青霉素小瓶对应试管编号，从对照管中分别吸2mL溶液入相同编号的试验组小瓶中。用打孔器在叶片中部靠近主脉附近打取叶圆片，随机取样，每试验组小瓶中放入30片叶圆片，加塞，放置30min，其间摇动数次。植物组织水势的测定实验步骤9植物组织水势的测定实验步骤到时间后，用解剖针沾取少许甲烯蓝粉末加入小瓶中，并震荡，此时溶液呈蓝色。用7支毛细滴管从试验组小瓶中依次吸取着色的液体少许，伸入同号对照组溶液的中部，缓慢放出蓝色溶液，轻轻取出滴管，观察蓝色液滴的移动方向。根据公式计算叶片细胞的水势ψw=

-icRTi为解离系数，蔗糖为1；c为小液滴在其中基本不动的溶液的浓度，单位为mol/L；R为摩尔气体常数，R=0.0083L·MPa/mol·K；T为热力学温度，单位K植物组织水势的测定实验步骤10植物组织水势的测定实验结果

外液浓度mol/L小液滴移动方向组织水势与外液水势比较组织水势计算0.050.10.20.30.40.50.6植物组织水势的测定实验结果外液浓度mol/L11植物组织水势的测定实验结果在0.05、0.1mol/L溶液中液滴下降，说明叶片细胞水势小于外液水势，细胞吸水，外液密度变大；在0.3、0.4、0.5、0.6mol/L溶液中液滴上升，说明叶片细胞水势大于外液水势，细胞失水，外液密度变小在0.2mol/L溶液中液滴基本不动，说明细胞水势与此外液的渗透势相等实验所测叶片细胞水势

=-1×0.2×0.0083×（273+20）=-0.48638MPa实验温度为20℃

植物组织水势的测定实验结果12植物的元素缺乏症实验原理植物的生长发育，除需要充足的阳光和水分外，还需要矿质元素，否则植物就不能很好地生长发育甚至死亡。应用溶液培养技术，可以观察矿质元素对植物生活的必需性；用溶液培养做植物的营养实验，可以避免土壤里的各种复杂因素。植物的元素缺乏症实验原理13植物的元素缺乏症实验器材与试剂实验仪器分析天平，培养缸，烧杯，移液管实验材料玉米（或番茄、蓖麻、小麦）种子植物的元素缺乏症实验器材与试剂14植物的元素缺乏症实验器材与试剂实验试剂按下表配制贮备液药品名称用量/（g•L－1）药品名称用量/（g•L－1）Ca(NO3)282.07CaCl255.50KNO350.56KCl37.28MgSO4·7H2O61.62Fe-EDTANa-EDTA7.45g，FeSO4·7H2O5.57gKH2PO427.22NaH2PO424.00微量元素H3BO32.860g，MnSO41.015g，CuSO4·5H2O0.079g，ZnSO4·7H2O0.220g，H2MoO40.090gNaNO342.45MgCl223.81Na2SO435.51植物的元素缺乏症实验器材与试剂药品名称用量/（g•L－1）15植物的元素缺乏症实验步骤材料准备种子用漂白粉溶液灭菌30min，用无菌水冲洗数次，然后放在洗净的石英砂中发芽，加蒸馏水，等幼苗长出第一真叶时待用。植物的元素缺乏症实验步骤16植物的元素缺乏症配制缺元素培养液贮备液贮备液/mL完全－N－P－K－Ca－Mg－S－FeCa(NO3)25－55－555KNO35－5－5555MgSO4·7H2O55555－－5KH2PO455－－5555NaH2PO4－－－5－－－－Fe-EDTA0.50.50.50.50.50.50.5－微量元素0.50.50.50.50.50.50.50.5NaNO3－－－55－－－MgCl2－－－－－－5－Na2SO4－－－－－5－－CaCl2－5－－－－－－KCl－52－－－－－植物的元素缺乏症配制缺元素培养液贮备液贮备液/mL完全－N－17植物的元素缺乏症配制时先于棕色瓶中加入300mL蒸馏水，然后加贮备液，最后配成500mL，用稀酸、碱调节至pH5～6。选取大小一致的植株，小心剥去剩余胚乳，用棉花包裹茎部，穿过瓶盖小孔，使根部浸入培养液，将培养瓶移到温室中，注意管理并观察记录植株的生长情况，各种元素缺乏症的症状及出现的部位。植物的元素缺乏症配制时先于棕色瓶中加入300mL蒸馏水18植物的元素缺乏症实验结果植物的元素缺乏症实验结果19硝酸还原酶活性的测定实验原理硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键性酶，与作物吸收和利用氮肥有关。它作用于NO3－使之还原为NO2－：NO3－＋NADH＋H+→NO2－＋NAD+＋H2O产生的NO2－可以从组织内渗透到外界溶液中，并积累在溶液中，测定反应液中NO2－含量的增加，即表现该酶活性的大小。硝酸还原酶活性的测定实验原理20硝酸还原酶活性的测定实验原理NO2－含量的测定用磺胺（对氨基苯磺酸胺）比色法。在酸性溶液中磺胺与NO2－形成重氮盐，再与α-萘胺偶联形成紫红色的偶氮染料。反应液的酸度大，则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度。所以反应需要在相同条件下进行。这种方法非常灵敏，能测定每毫升含0.5μg的NaNO2。硝酸还原酶活性的测定实验原理21硝酸还原酶活性的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，注射器，温箱，天平，钻孔器，三角烧瓶，移液管，烧杯，试管实验试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.5），0.2mol/LKNO3，磺胺试剂，α-萘胺试剂，NaNO2标准溶液实验材料蓖麻、向日葵、油菜、小麦或棉花的叶子硝酸还原酶活性的测定实验器材与试剂22硝酸还原酶活性的测定实验步骤将新鲜取回的叶片水洗，用吸水纸吸干，然后用钻孔器打叶圆片，用蒸馏水洗涤2～3次，吸干水分，于分析天平上称取等重的叶圆片两份。每份约0.3～0.4g（或每份取50个圆片），分别置于含下列溶液的烧瓶中：①0.1mol/L磷酸缓冲液5mL+蒸馏水5mL；②0.1mol/L磷酸缓冲液5mL+0.2mol/LKNO35mL。用注射器抽气，至叶圆片沉于溶液中。将烧瓶放入30℃温箱中，避光保温30min。硝酸还原酶活性的测定实验步骤23硝酸还原酶活性的测定实验步骤分别吸取反应液1mL于试管中，加入磺胺试剂2mL及α-萘胺试剂2mL，混合摇匀，静置30min，用分光光度计（520nm）进行测定，记下OD值，从标准曲线上读出NO2－含量，再计算酶的活性。硝酸还原酶活性的测定实验步骤24硝酸还原酶活性的测定实验步骤用5μg/mLNaNO2母液稀释成0.5、1、2、3、4μg/mL的梯度浓度的NaNO2溶液

。分别吸取0.5、1、2、3、4、5μg/mL的NaNO21mL于试管中，加入磺胺试剂2mL及α-萘胺试剂2mL，混合摇匀，静置30min，用分光光度计（520nm）进行测定，记下OD值，以OD值为纵坐标，NaNO2浓度为横坐标，绘制标准曲线。硝酸还原酶活性的测定实验步骤25硝酸还原酶活性的测定实验结果标准曲线NaNO2

mol/L磺胺比色法OD520值0.512345对照反应液反应液注意：比色空白用1mL水加同样显色剂同样反应条件标出根据对照反应液和反应液的比色OD值从标准曲线上读出的NaNO2含量硝酸还原酶活性的测定实验结果NaNO2mol/L磺胺比色法26硝酸还原酶活性的测定实验结果酶的活性硝酸还原酶活性的测定实验结果27单盐毒害及离子拮抗实验原理离子间的拮抗现象的本质是复杂的，它可能反映不同离子对原生质亲水胶粒的稳定性、原生质膜的透性，以及对各类酶活性调节等方面的相互制约作用，从而维持机体的正常生理状态。单盐毒害及离子拮抗实验原理28单盐毒害及离子拮抗实验器材与试剂实验仪器烧杯，纱布，石蜡实验试剂0.12mol/LKCl，0.06mol/LCaCl2，0.12mol/LNaCl（所用药品均需用分析纯）实验材料小麦种子单盐毒害及离子拮抗实验器材与试剂29单盐毒害及离子拮抗实验步骤实验前3～4天选择饱满的小麦种子100粒浸种，在室温下萌发，待根长1cm时可用作材料。取4个小烧杯，分别加入下列溶液0.12mol/LKCl0.06mol/LCaCl20.12mol/LNaCl0.12mol/LNaCl100mL+0.06mol/LCaCl21mL+0.12mol/LKCl2.2mL单盐毒害及离子拮抗实验步骤30单盐毒害及离子拮抗实验步骤小烧杯用涂石蜡的纱布盖上。挑选大小相等及根系发育一致的小麦幼苗16株，小心种植在纱布盖的孔眼里，使根系接触到溶液，在室温下培养2～3周后，观察幼苗根的生长情况。培养期间注意补充水分，可更换一次培养液。单盐毒害及离子拮抗实验步骤31单盐毒害及离子拮抗实验结果在单盐溶液中小麦幼苗生长受阻，特别是根部出现畸形。单盐毒害及离子拮抗实验结果32叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可用丙酮将它们从叶片中提取出来。并可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离开。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理33叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光。叶绿素中的镁可被H+取代而生成褐色的去镁叶绿素；加入铜盐作用，后者则成为绿色的铜代叶绿素。铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色植物的浸渍标本。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理34叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验器材与试剂实验仪器大试管，台天平，研钵，量筒，漏斗，橡皮塞，新华滤纸，毛细管，剪刀，分液漏斗，烧杯实验试剂丙酮，碳酸钙，石英砂，无水硫酸钠，四氯化碳，乙醚，甲醇，氢氧化钾，盐酸，醋酸铜实验材料新鲜菠菜叶片叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验器材与试剂35叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的提取分离称取新鲜叶片2g，放入研钵中加丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成均浆，再加丙酮10mL，以漏斗过滤之，即为色素提取液。把展层用的滤纸剪成2cm×20cm的纸条，将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条。用毛细管吸取叶绿素溶液点于窄条的上方，注意一次所点溶液不可过多，风干后再点，重复多次。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤36叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的提取分离在大试管中加入四氯化碳3～5mL及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄条浸入溶剂中（色素点要略高于液面），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。待四种色素带清晰展开后，取出滤纸条，稍干后用铅笔勾出色素带边缘。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤37叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的理化性质叶绿素的荧光现象取上述色素提取液少许于试管中，分别在反射光和透射光一侧观察提取液的颜色。铜代反应取上述色素提取液少许于试管中，1滴1滴加浓盐酸，直至溶液出现褐绿色。然后加醋酸铜晶体少许，慢慢加热溶液，则又产生鲜亮的绿色。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤38叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的理化性质黄色素与绿色素的分离取上述色素提取液10mL，加到盛有20mL乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿漏斗边缘加入30mL蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液即分为两层。色素已转入上层乙醚中，弃去下层丙酮和水，再用蒸馏水冲洗乙醚溶液1～2次。然后加入5mL30%KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置约10min，再加蒸馏水约10mL，摇动后静置，则得到黄色素层和绿色素层。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤39叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果叶绿体色素的提取分离滤纸条自上而下的色素带分别是橙色的胡萝卜素黄色的叶黄素蓝绿色的叶绿素a黄绿色的叶绿素b叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果40叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果叶绿体色素的理化性质叶绿素的荧光现象铜代反应黄色素与绿色素的分离叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果41叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理叶绿素和类胡萝卜素都有光学特性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响。最后分别得到两种组分的含量。叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理如果混合42叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下关系：OD1=

Ca·ka1+C

b·kb1OD2=

Ca·ka2+C

b·kb2Ca为组分a的浓度（g·L－1），Cb为组分b的浓度（g·L－1）；OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度值，OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度值；ka1和ka2分别为组分a的比吸收系数，kb1和kb2分别为组分b的比吸收系数叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理43叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理叶绿素a和b的80%丙酮溶液的比吸收系数将数据代入上式经整理后，并把浓度单位改为mg/LCa=12.7OD663－2.69OD645Cb=22.9OD663－4.68OD645CT=Ca+Cb=8.02OD663＋20.21OD645波长/nm叶绿素a叶绿素b66382.049.2764516.7545.60叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理波长/n44叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，离心机，台天平，研钵，量筒，剪刀，移液管实验试剂丙酮，碳酸钙，石英砂实验材料新鲜菠菜叶片叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验器材与试剂45叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验步骤称取新鲜叶片1g，放入研钵中加丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成均浆，再加80%丙酮5mL，将匀浆转入离心管，并用80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后去沉淀，上清液用80%丙酮定容至20mL。取上述色素提取液1mL，加80%丙酮6mL稀释，转入比色杯中，以80%丙酮为对照，在400～500nm波长区每隔10nm，在500～600nm波长区每隔20nm，在600～700nm波长区每隔10nm，测定光密度，以绘制吸收光谱。另外测定645nm和663nm处的光密度，以计算叶绿素a和b的含量。叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验步骤46叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验结果吸收光谱叶绿素a和b含量计算波长/nm400410420430440450460470480490500520540光密度波长/nm560580600610620630640650660670680690700光密度波长/nm645663光密度叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验结果波长/n47离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验原理在低温下以等渗溶液制备完整的叶绿体，将其悬浮于适当的反应介质中，并有氧化剂如2，6-二氯酚靛酚（简称DCIP）存在时，在光照下会放出O2，同时将染料还原，这就是叶绿体中进行的光还原反应。染料被还原后，颜色从蓝色变为无色，因此可根据溶液OD值的变化进行测定，该变化在4-5min内呈线性关系。离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验原理48离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验器材与试剂实验仪器离心机，研钵，天平，纱布，试管，100W灯泡，722型分光光度计实验试剂提取介质50mmol/L（pH7.5）Tris-HCl缓冲液（内含0.4mmol/L蔗糖、10mmol/LNaCl），1mmol/L2，6-DCIP（2，6-二氯酚靛酚）溶液（用上述提取介质配制）实验材料新鲜菠菜叶片离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验器材与试剂49离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤离体叶绿体的提取称取10g新鲜菠菜叶片（去除粗叶脉），剪碎，加10mL预冷的提取介质（分两次加入）和少许石英砂，冰浴中迅速研磨成匀浆，再加10mL提取介质，用4层纱布将匀浆过滤于一离心管中，2500r/min离心3min，弃沉淀，上清液4000r/min离心10min，弃上清。所得沉淀即为完整叶绿体。用15mL提取介质使叶绿体悬浮，置冰浴中备用。离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤50离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤叶绿体光还原反应的测定取3支洁净试管，分别编号，按下表加入试剂：注：2号管加热煮沸，然后加染料，3号管为比色时的空白对照将试管置于离100W灯光60cm处照光，3min后于620nm处测光密度。管号提取介质/mL叶绿体悬液/mL煮沸时间/min染料/mL14.50.5－124.50.515135.50.5－－离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤管号提取介质/mL51离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验结果1号管的OD620值2号管的OD620值说明：离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验结果52环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验原理植物光合强度的大小受光强、光质、CO2浓度、温度等环境条件的影响。利用真空渗入法排除细胞间隙的空气，使叶片沉于水中。由于光合作用放出的O2在水中溶解度很小，而在细胞间积累，结果使原来下沉的叶片上浮，根据上浮所需时间长短，即能比较光合作用的强弱。环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验原理53环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验器材与试剂实验仪器打孔器，注射器，100W灯泡，小烧杯实验材料新鲜青菜叶片环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验器材与试剂54环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤选取健壮、叶龄相似的成熟叶片，用打孔器避开主脉打取叶圆片共60片，置于注射器中，注入水，抽气至叶片沉入水中。取6只小烧杯，各倒入20mL冷开水，用吸管向其中5只小烧杯的水中吹气，使CO2达到饱和。然后于6只小烧杯中各放入10片叶圆片，分别置于不同的条件下。杯号光强光质CO21强白光饱和2强红光饱和3强蓝光饱和4强绿光饱和5强白光微量6弱白光饱和环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤杯号光强光55环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤记录各烧杯中每一叶圆片上浮所需的时间，计算各处理中叶圆片上浮所需的平均时间或一定时间内上浮的叶圆片数。比较不同条件下光合作用的强弱。环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤56环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验结果分析：杯号叶圆片上浮所需的平均时间123456环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验结果杯号叶圆片57植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验原理利用Ba(OH)2

溶液吸收呼吸过程中释放的CO2，实验结束后，用草酸溶液滴定残留的Ba(OH)2，从空白和样品两者消耗草酸溶液之差，即可计算出呼吸过程中释放CO2的量。植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验原理58植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验器材与试剂实验仪器广口瓶，酸式滴定管，纱布实验试剂0.05mol/LBa(OH)2，1/44mol/L草酸溶液（每mL相当于1mgCO2），指示剂实验材料萌发的小麦种子植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验器材与试剂59植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤称取萌发的小麦种子15g，包入纱布袋内，将纱布袋挂在广口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要挂得太低。在广口瓶中加0.05mol/LBa(OH)225mL，塞上瓶塞，用熔化的石蜡密封瓶口，防止漏气。每10min左右轻轻摇动广口瓶，破坏溶液表面的BaCO3薄膜，以利对CO2的吸收。1h后，打开瓶塞，迅速加2滴指示剂，用1/44mol/L草酸滴定，直到绿色变成紫色为止。记录所耗用的草酸溶液的体积（mL）数。植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤60植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤另取同样重量的煮沸杀死的小麦种子，作同样测定，以次作为对照。计算呼吸强度。植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤61植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验结果死种子装置滴定所耗草酸量（V0）：活种子装置滴定所耗草酸量（V1）：呼吸强度（CO2，mg/g·h）=（V0－V1）/种子鲜重（g）×时间（h）植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验结果62过氧化物酶活性的测定实验原理过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。过氧化物酶活性的测定实验原理63过氧化物酶活性的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，离心机，天平，研钵实验试剂愈创木酚，30%过氧化氢，20mmol/LKH2PO4，100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0），反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）50mL，加入愈创木酚28μL，加热搅拌至愈创木酚溶解，冷却后加入30%过氧化氢19μL，混合均匀，保存于冰箱中]实验材料马铃薯块茎过氧化物酶活性的测定实验器材与试剂64过氧化物酶活性的测定实验步骤粗酶液的提取称取去皮马铃薯块茎1g，加20mmol/LKH2PO4

5mL，于研钵中研磨成均浆，以4000r/min离心15min，收集上清液保存于冷处，所得残渣在用5mLKH2PO4溶液提取一次，合并两次上清液。酶活性的测定取比色杯2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO4

1mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL，立即于分光光度计470nm测量OD值，每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小。过氧化物酶活性的测定实验步骤65过氧化物酶活性的测定实验结果ΔOD470/min·鲜重g=次数12345678910OD470过氧化物酶活性的测定实验结果次数12345678910OD466种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验原理凡有生命力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）上的氢还原时，便由无色TTC变为红色的TTF。种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验原67种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验器材与试剂实验仪器恒温箱，烧杯，培养皿，镊子，刀片实验试剂0.5%TTC溶液实验材料大麦、小麦、籼谷或粳谷的种子种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验器68种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验步骤浸种将待测种子在30～35℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸强度。显色取吸胀种子100粒，，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于培养皿中，加入适量的0.5%TTC溶液覆盖种子。然后置于30℃恒温箱中1h。观察结果。将另一半在沸水中煮5min杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验步69种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验步骤计算活种子的百分数。实验结果煮沸杀死的种子胚部均为白色。未煮沸杀死的种子胚部大部分为红色，少数为白色。活种子的百分率为：种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验步70种子活力的快速测定

（红墨水法）实验原理凡活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种子胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色。种子活力的快速测定

（红墨水法）实验原理71种子活力的快速测定

（红墨水法）实验器材与试剂实验仪器恒温箱，烧杯，培养皿，镊子，刀片实验试剂5%红墨水实验材料大麦、小麦、籼谷或粳谷的种子种子活力的快速测定

（红墨水法）实验器材与试剂72种子活力的快速测定

（红墨水法）实验步骤浸种将待测种子在30～35℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸强度。显色取吸胀种子100粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于培养皿中，加入5%红墨水淹没种子。染色10～15min。倒去红墨水，用水冲洗种子，至冲洗液无色，观察结果。种子活力的快速测定

（红墨水法）实验步骤73种子活力的快速测定

（红墨水法）实验步骤将另一半在沸水中煮5min杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。计算活种子的百分数。实验结果煮沸杀死的种子胚与胚乳均染上红色。未煮沸杀死的种子胚部大部分为白色或浅红色，少数为红色。活种子的百分率为：种子活力的快速测定

（红墨水法）实验步骤74植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验原理用植物生长调节剂（生长素类）处理插条，可以促进细胞恢复分裂能力，诱导根原基发生，促进不定根的生长。植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验原理75植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验器材与试剂实验仪器电子天平，烧杯，移液管，量筒等实验试剂1000mg/L吲哚乙酸溶液实验材料各种植物材料植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验器材与试剂76植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验步骤用1000mg/L吲哚乙酸溶液配制100mg/L、200mg/L、300mg/L吲哚乙酸溶液。从室外取植物材料，自茎顶端或枝条上端向下10～15cm处剪去植物下部分，去除花，保留1～2片叶片（如叶面积较大，可保留半张叶）。植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验步骤77植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验步骤将插枝基部2～3cm浸泡在吲哚乙酸溶液中（每种溶液中浸5枝），并以蒸馏水作对照，8h后取出枝条，插入砂质苗床中培养，注意控制温度和湿度。20d后，统计各处理枝条不定根发生的数目，观察根的粗细和长度，以了解不同浓度吲哚乙酸在一定处理时间下对生根的影响。植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验步骤78植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验结果各吲哚乙酸溶液处理的插条生根情况（平均每株根数、平均根长、粗细）好于对照。植物生长调节剂对植物插条不定根发生的影响实验结果79高温和低温对植物的伤害实验原理植物组织受到高温或低温伤害时，由于膜的功能受损或结构破坏而透性增大，细胞内各种水溶性物质不同程度地外渗。将植物组织浸入无离子水中，水的电导率将因电解质的外渗而加大。膜伤害愈重，电解质外渗愈多，电导率的增加也愈大。故可用电导率仪测定外液的电导率而得知植物受伤害程度。高温和低温对植物的伤害实验原理80高温和低温对植物的伤害实验器材与试剂实验仪器电导率仪，恒温水浴锅，打孔器，注射器，试管，移液管，恒温箱，冰箱等实验试剂去离子水实验材料植物离体叶片高温和低温对植物的伤害实验器材与试剂81高温和低温对植物的伤害实验步骤取正常生长的植株叶片若干，用水洗净并用吸水纸吸干叶表面水分，将一份放在－20℃左右的温度下冷冻30min，另一份放在40℃左右的温度下处理30min，第三份裹入潮湿的纱布中在室温下作对照。将处理叶片与对照叶片用去离子水冲洗2次，再用洁净滤纸吸净表面水分，每组叶片取叶圆片20片，分别放入注射器内，各加10mL去离子水，抽气使叶片沉入水中。高温和低温对植物的伤害实验步骤82高温和低温对植物的伤害实验步骤将叶片及去离子水分别倒入3个试管中，在室温下保持1h，期间要多次摇动试管。用电导率仪测定3组的初电导率（κ1）。测定后，将试管置沸水浴中10min，取出冷却至室温，并平衡20min，摇匀，测终电导率（κ2）。高温和低温对植物的伤害实验步骤83高温和低温对植物的伤害实验结果按下式计算相对电导率相对电导率L=κ1/κ2相对电导率的大小表示细胞受伤害的程度。由于对照也有少量电解质外渗，故可用下式计算伤害度高温伤害度=（L高－L常）/（1－L常）低温伤害度=（L低－L常）/（1－L常）高温和低温对植物的伤害实验结果84高温和低温对植物的伤害实验结果如用蒸馏水实验，相对电导率计算可用下式相对电导率L=（κ1－κ0）/（κ2－

κ0）κ0为实验用蒸馏水的电导率高温和低温对植物的伤害实验结果85最新植物生理学实验课件86上海师范大学植物生理学实验课件上海师范大学植物生理学实验课件87植物组织渗透势的测定实验原理当植物组织细胞内的汁液其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。这种渗透势相等的溶液为等渗溶液。该溶液的浓度称为等渗浓度。当用一系列梯度浓度溶液观察细胞质壁分离现象时，细胞的等渗浓度将介于刚刚引起初始质壁分离的浓度和尚不能引起质壁分离的浓度之间的溶液浓度。代入公式即可计算其渗透势。植物组织渗透势的测定实验原理88最新植物生理学实验课件89最新植物生理学实验课件90最新植物生理学实验课件91最新植物生理学实验课件92最新植物生理学实验课件93最新植物生理学实验课件94植物组织水势的测定实验步骤用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同浓度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L）各10mL，分别注入编好号的7支对照组试管中。另取7个青霉素小瓶对应试管编号，从对照管中分别吸2mL溶液入相同编号的试验组小瓶中。用打孔器在叶片中部靠近主脉附近打取叶圆片，随机取样，每试验组小瓶中放入30片叶圆片，加塞，放置30min，其间摇动数次。植物组织水势的测定实验步骤95植物组织水势的测定实验步骤到时间后，用解剖针沾取少许甲烯蓝粉末加入小瓶中，并震荡，此时溶液呈蓝色。用7支毛细滴管从试验组小瓶中依次吸取着色的液体少许，伸入同号对照组溶液的中部，缓慢放出蓝色溶液，轻轻取出滴管，观察蓝色液滴的移动方向。根据公式计算叶片细胞的水势ψw=

-icRTi为解离系数，蔗糖为1；c为小液滴在其中基本不动的溶液的浓度，单位为mol/L；R为摩尔气体常数，R=0.0083L·MPa/mol·K；T为热力学温度，单位K植物组织水势的测定实验步骤96植物组织水势的测定实验结果

外液浓度mol/L小液滴移动方向组织水势与外液水势比较组织水势计算0.050.10.20.30.40.50.6植物组织水势的测定实验结果外液浓度mol/L97植物组织水势的测定实验结果在0.05、0.1mol/L溶液中液滴下降，说明叶片细胞水势小于外液水势，细胞吸水，外液密度变大；在0.3、0.4、0.5、0.6mol/L溶液中液滴上升，说明叶片细胞水势大于外液水势，细胞失水，外液密度变小在0.2mol/L溶液中液滴基本不动，说明细胞水势与此外液的渗透势相等实验所测叶片细胞水势

=-1×0.2×0.0083×（273+20）=-0.48638MPa实验温度为20℃

植物组织水势的测定实验结果98植物的元素缺乏症实验原理植物的生长发育，除需要充足的阳光和水分外，还需要矿质元素，否则植物就不能很好地生长发育甚至死亡。应用溶液培养技术，可以观察矿质元素对植物生活的必需性；用溶液培养做植物的营养实验，可以避免土壤里的各种复杂因素。植物的元素缺乏症实验原理99植物的元素缺乏症实验器材与试剂实验仪器分析天平，培养缸，烧杯，移液管实验材料玉米（或番茄、蓖麻、小麦）种子植物的元素缺乏症实验器材与试剂100植物的元素缺乏症实验器材与试剂实验试剂按下表配制贮备液药品名称用量/（g•L－1）药品名称用量/（g•L－1）Ca(NO3)282.07CaCl255.50KNO350.56KCl37.28MgSO4·7H2O61.62Fe-EDTANa-EDTA7.45g，FeSO4·7H2O5.57gKH2PO427.22NaH2PO424.00微量元素H3BO32.860g，MnSO41.015g，CuSO4·5H2O0.079g，ZnSO4·7H2O0.220g，H2MoO40.090gNaNO342.45MgCl223.81Na2SO435.51植物的元素缺乏症实验器材与试剂药品名称用量/（g•L－1）101植物的元素缺乏症实验步骤材料准备种子用漂白粉溶液灭菌30min，用无菌水冲洗数次，然后放在洗净的石英砂中发芽，加蒸馏水，等幼苗长出第一真叶时待用。植物的元素缺乏症实验步骤102植物的元素缺乏症配制缺元素培养液贮备液贮备液/mL完全－N－P－K－Ca－Mg－S－FeCa(NO3)25－55－555KNO35－5－5555MgSO4·7H2O55555－－5KH2PO455－－5555NaH2PO4－－－5－－－－Fe-EDTA0.50.50.50.50.50.50.5－微量元素0.50.50.50.50.50.50.50.5NaNO3－－－55－－－MgCl2－－－－－－5－Na2SO4－－－－－5－－CaCl2－5－－－－－－KCl－52－－－－－植物的元素缺乏症配制缺元素培养液贮备液贮备液/mL完全－N－103植物的元素缺乏症配制时先于棕色瓶中加入300mL蒸馏水，然后加贮备液，最后配成500mL，用稀酸、碱调节至pH5～6。选取大小一致的植株，小心剥去剩余胚乳，用棉花包裹茎部，穿过瓶盖小孔，使根部浸入培养液，将培养瓶移到温室中，注意管理并观察记录植株的生长情况，各种元素缺乏症的症状及出现的部位。植物的元素缺乏症配制时先于棕色瓶中加入300mL蒸馏水104植物的元素缺乏症实验结果植物的元素缺乏症实验结果105硝酸还原酶活性的测定实验原理硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键性酶，与作物吸收和利用氮肥有关。它作用于NO3－使之还原为NO2－：NO3－＋NADH＋H+→NO2－＋NAD+＋H2O产生的NO2－可以从组织内渗透到外界溶液中，并积累在溶液中，测定反应液中NO2－含量的增加，即表现该酶活性的大小。硝酸还原酶活性的测定实验原理106硝酸还原酶活性的测定实验原理NO2－含量的测定用磺胺（对氨基苯磺酸胺）比色法。在酸性溶液中磺胺与NO2－形成重氮盐，再与α-萘胺偶联形成紫红色的偶氮染料。反应液的酸度大，则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度。所以反应需要在相同条件下进行。这种方法非常灵敏，能测定每毫升含0.5μg的NaNO2。硝酸还原酶活性的测定实验原理107硝酸还原酶活性的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，注射器，温箱，天平，钻孔器，三角烧瓶，移液管，烧杯，试管实验试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.5），0.2mol/LKNO3，磺胺试剂，α-萘胺试剂，NaNO2标准溶液实验材料蓖麻、向日葵、油菜、小麦或棉花的叶子硝酸还原酶活性的测定实验器材与试剂108硝酸还原酶活性的测定实验步骤将新鲜取回的叶片水洗，用吸水纸吸干，然后用钻孔器打叶圆片，用蒸馏水洗涤2～3次，吸干水分，于分析天平上称取等重的叶圆片两份。每份约0.3～0.4g（或每份取50个圆片），分别置于含下列溶液的烧瓶中：①0.1mol/L磷酸缓冲液5mL+蒸馏水5mL；②0.1mol/L磷酸缓冲液5mL+0.2mol/LKNO35mL。用注射器抽气，至叶圆片沉于溶液中。将烧瓶放入30℃温箱中，避光保温30min。硝酸还原酶活性的测定实验步骤109硝酸还原酶活性的测定实验步骤分别吸取反应液1mL于试管中，加入磺胺试剂2mL及α-萘胺试剂2mL，混合摇匀，静置30min，用分光光度计（520nm）进行测定，记下OD值，从标准曲线上读出NO2－含量，再计算酶的活性。硝酸还原酶活性的测定实验步骤110硝酸还原酶活性的测定实验步骤用5μg/mLNaNO2母液稀释成0.5、1、2、3、4μg/mL的梯度浓度的NaNO2溶液

。分别吸取0.5、1、2、3、4、5μg/mL的NaNO21mL于试管中，加入磺胺试剂2mL及α-萘胺试剂2mL，混合摇匀，静置30min，用分光光度计（520nm）进行测定，记下OD值，以OD值为纵坐标，NaNO2浓度为横坐标，绘制标准曲线。硝酸还原酶活性的测定实验步骤111硝酸还原酶活性的测定实验结果标准曲线NaNO2

mol/L磺胺比色法OD520值0.512345对照反应液反应液注意：比色空白用1mL水加同样显色剂同样反应条件标出根据对照反应液和反应液的比色OD值从标准曲线上读出的NaNO2含量硝酸还原酶活性的测定实验结果NaNO2mol/L磺胺比色法112硝酸还原酶活性的测定实验结果酶的活性硝酸还原酶活性的测定实验结果113单盐毒害及离子拮抗实验原理离子间的拮抗现象的本质是复杂的，它可能反映不同离子对原生质亲水胶粒的稳定性、原生质膜的透性，以及对各类酶活性调节等方面的相互制约作用，从而维持机体的正常生理状态。单盐毒害及离子拮抗实验原理114单盐毒害及离子拮抗实验器材与试剂实验仪器烧杯，纱布，石蜡实验试剂0.12mol/LKCl，0.06mol/LCaCl2，0.12mol/LNaCl（所用药品均需用分析纯）实验材料小麦种子单盐毒害及离子拮抗实验器材与试剂115单盐毒害及离子拮抗实验步骤实验前3～4天选择饱满的小麦种子100粒浸种，在室温下萌发，待根长1cm时可用作材料。取4个小烧杯，分别加入下列溶液0.12mol/LKCl0.06mol/LCaCl20.12mol/LNaCl0.12mol/LNaCl100mL+0.06mol/LCaCl21mL+0.12mol/LKCl2.2mL单盐毒害及离子拮抗实验步骤116单盐毒害及离子拮抗实验步骤小烧杯用涂石蜡的纱布盖上。挑选大小相等及根系发育一致的小麦幼苗16株，小心种植在纱布盖的孔眼里，使根系接触到溶液，在室温下培养2～3周后，观察幼苗根的生长情况。培养期间注意补充水分，可更换一次培养液。单盐毒害及离子拮抗实验步骤117单盐毒害及离子拮抗实验结果在单盐溶液中小麦幼苗生长受阻，特别是根部出现畸形。单盐毒害及离子拮抗实验结果118叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可用丙酮将它们从叶片中提取出来。并可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离开。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理119叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光。叶绿素中的镁可被H+取代而生成褐色的去镁叶绿素；加入铜盐作用，后者则成为绿色的铜代叶绿素。铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色植物的浸渍标本。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理120叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验器材与试剂实验仪器大试管，台天平，研钵，量筒，漏斗，橡皮塞，新华滤纸，毛细管，剪刀，分液漏斗，烧杯实验试剂丙酮，碳酸钙，石英砂，无水硫酸钠，四氯化碳，乙醚，甲醇，氢氧化钾，盐酸，醋酸铜实验材料新鲜菠菜叶片叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验器材与试剂121叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的提取分离称取新鲜叶片2g，放入研钵中加丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成均浆，再加丙酮10mL，以漏斗过滤之，即为色素提取液。把展层用的滤纸剪成2cm×20cm的纸条，将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条。用毛细管吸取叶绿素溶液点于窄条的上方，注意一次所点溶液不可过多，风干后再点，重复多次。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤122叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的提取分离在大试管中加入四氯化碳3～5mL及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄条浸入溶剂中（色素点要略高于液面），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。待四种色素带清晰展开后，取出滤纸条，稍干后用铅笔勾出色素带边缘。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤123叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的理化性质叶绿素的荧光现象取上述色素提取液少许于试管中，分别在反射光和透射光一侧观察提取液的颜色。铜代反应取上述色素提取液少许于试管中，1滴1滴加浓盐酸，直至溶液出现褐绿色。然后加醋酸铜晶体少许，慢慢加热溶液，则又产生鲜亮的绿色。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤124叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的理化性质黄色素与绿色素的分离取上述色素提取液10mL，加到盛有20mL乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿漏斗边缘加入30mL蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液即分为两层。色素已转入上层乙醚中，弃去下层丙酮和水，再用蒸馏水冲洗乙醚溶液1～2次。然后加入5mL30%KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置约10min，再加蒸馏水约10mL，摇动后静置，则得到黄色素层和绿色素层。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤125叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果叶绿体色素的提取分离滤纸条自上而下的色素带分别是橙色的胡萝卜素黄色的叶黄素蓝绿色的叶绿素a黄绿色的叶绿素b叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果126叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果叶绿体色素的理化性质叶绿素的荧光现象铜代反应黄色素与绿色素的分离叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验结果127叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理叶绿素和类胡萝卜素都有光学特性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响。最后分别得到两种组分的含量。叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理如果混合128叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下关系：OD1=

Ca·ka1+C

b·kb1OD2=

Ca·ka2+C

b·kb2Ca为组分a的浓度（g·L－1），Cb为组分b的浓度（g·L－1）；OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度值，OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度值；ka1和ka2分别为组分a的比吸收系数，kb1和kb2分别为组分b的比吸收系数叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理129叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理叶绿素a和b的80%丙酮溶液的比吸收系数将数据代入上式经整理后，并把浓度单位改为mg/LCa=12.7OD663－2.69OD645Cb=22.9OD663－4.68OD645CT=Ca+Cb=8.02OD663＋20.21OD645波长/nm叶绿素a叶绿素b66382.049.2764516.7545.60叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验原理波长/n130叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，离心机，台天平，研钵，量筒，剪刀，移液管实验试剂丙酮，碳酸钙，石英砂实验材料新鲜菠菜叶片叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验器材与试剂131叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验步骤称取新鲜叶片1g，放入研钵中加丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成均浆，再加80%丙酮5mL，将匀浆转入离心管，并用80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后去沉淀，上清液用80%丙酮定容至20mL。取上述色素提取液1mL，加80%丙酮6mL稀释，转入比色杯中，以80%丙酮为对照，在400～500nm波长区每隔10nm，在500～600nm波长区每隔20nm，在600～700nm波长区每隔10nm，测定光密度，以绘制吸收光谱。另外测定645nm和663nm处的光密度，以计算叶绿素a和b的含量。叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验步骤132叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验结果吸收光谱叶绿素a和b含量计算波长/nm400410420430440450460470480490500520540光密度波长/nm560580600610620630640650660670680690700光密度波长/nm645663光密度叶绿体色素的吸收光谱及叶绿素a、b含量的测定实验结果波长/n133离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验原理在低温下以等渗溶液制备完整的叶绿体，将其悬浮于适当的反应介质中，并有氧化剂如2，6-二氯酚靛酚（简称DCIP）存在时，在光照下会放出O2，同时将染料还原，这就是叶绿体中进行的光还原反应。染料被还原后，颜色从蓝色变为无色，因此可根据溶液OD值的变化进行测定，该变化在4-5min内呈线性关系。离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验原理134离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验器材与试剂实验仪器离心机，研钵，天平，纱布，试管，100W灯泡，722型分光光度计实验试剂提取介质50mmol/L（pH7.5）Tris-HCl缓冲液（内含0.4mmol/L蔗糖、10mmol/LNaCl），1mmol/L2，6-DCIP（2，6-二氯酚靛酚）溶液（用上述提取介质配制）实验材料新鲜菠菜叶片离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验器材与试剂135离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤离体叶绿体的提取称取10g新鲜菠菜叶片（去除粗叶脉），剪碎，加10mL预冷的提取介质（分两次加入）和少许石英砂，冰浴中迅速研磨成匀浆，再加10mL提取介质，用4层纱布将匀浆过滤于一离心管中，2500r/min离心3min，弃沉淀，上清液4000r/min离心10min，弃上清。所得沉淀即为完整叶绿体。用15mL提取介质使叶绿体悬浮，置冰浴中备用。离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤136离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤叶绿体光还原反应的测定取3支洁净试管，分别编号，按下表加入试剂：注：2号管加热煮沸，然后加染料，3号管为比色时的空白对照将试管置于离100W灯光60cm处照光，3min后于620nm处测光密度。管号提取介质/mL叶绿体悬液/mL煮沸时间/min染料/mL14.50.5－124.50.515135.50.5－－离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验步骤管号提取介质/mL137离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验结果1号管的OD620值2号管的OD620值说明：离体叶绿体光还原反应

（希尔反应）实验结果138环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验原理植物光合强度的大小受光强、光质、CO2浓度、温度等环境条件的影响。利用真空渗入法排除细胞间隙的空气，使叶片沉于水中。由于光合作用放出的O2在水中溶解度很小，而在细胞间积累，结果使原来下沉的叶片上浮，根据上浮所需时间长短，即能比较光合作用的强弱。环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验原理139环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验器材与试剂实验仪器打孔器，注射器，100W灯泡，小烧杯实验材料新鲜青菜叶片环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验器材与试剂140环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤选取健壮、叶龄相似的成熟叶片，用打孔器避开主脉打取叶圆片共60片，置于注射器中，注入水，抽气至叶片沉入水中。取6只小烧杯，各倒入20mL冷开水，用吸管向其中5只小烧杯的水中吹气，使CO2达到饱和。然后于6只小烧杯中各放入10片叶圆片，分别置于不同的条件下。杯号光强光质CO21强白光饱和2强红光饱和3强蓝光饱和4强绿光饱和5强白光微量6弱白光饱和环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤杯号光强光141环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤记录各烧杯中每一叶圆片上浮所需的时间，计算各处理中叶圆片上浮所需的平均时间或一定时间内上浮的叶圆片数。比较不同条件下光合作用的强弱。环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验步骤142环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验结果分析：杯号叶圆片上浮所需的平均时间123456环境因素对光合作用的影响

（叶圆片上浮法）实验结果杯号叶圆片143植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验原理利用Ba(OH)2

溶液吸收呼吸过程中释放的CO2，实验结束后，用草酸溶液滴定残留的Ba(OH)2，从空白和样品两者消耗草酸溶液之差，即可计算出呼吸过程中释放CO2的量。植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验原理144植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验器材与试剂实验仪器广口瓶，酸式滴定管，纱布实验试剂0.05mol/LBa(OH)2，1/44mol/L草酸溶液（每mL相当于1mgCO2），指示剂实验材料萌发的小麦种子植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验器材与试剂145植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤称取萌发的小麦种子15g，包入纱布袋内，将纱布袋挂在广口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要挂得太低。在广口瓶中加0.05mol/LBa(OH)225mL，塞上瓶塞，用熔化的石蜡密封瓶口，防止漏气。每10min左右轻轻摇动广口瓶，破坏溶液表面的BaCO3薄膜，以利对CO2的吸收。1h后，打开瓶塞，迅速加2滴指示剂，用1/44mol/L草酸滴定，直到绿色变成紫色为止。记录所耗用的草酸溶液的体积（mL）数。植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤146植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤另取同样重量的煮沸杀死的小麦种子，作同样测定，以次作为对照。计算呼吸强度。植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验步骤147植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验结果死种子装置滴定所耗草酸量（V0）：活种子装置滴定所耗草酸量（V1）：呼吸强度（CO2，mg/g·h）=（V0－V1）/种子鲜重（g）×时间（h）植物呼吸强度的测定

（小篮子法）实验结果148过氧化物酶活性的测定实验原理过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。过氧化物酶活性的测定实验原理149过氧化物酶活性的测定实验器材与试剂实验仪器分光光度计，离心机，天平，研钵实验试剂愈创木酚，30%过氧化氢，20mmol/LKH2PO4，100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0），反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）50mL，加入愈创木酚28μL，加热搅拌至愈创木酚溶解，冷却后加入30%过氧化氢19μL，混合均匀，保存于冰箱中]实验材料马铃薯块茎过氧化物酶活性的测定实验器材与试剂150过氧化物酶活性的测定实验步骤粗酶液的提取称取去皮马铃薯块茎1g，加20mmol/LKH2PO4

5mL，于研钵中研磨成均浆，以4000r/min离心15min，收集上清液保存于冷处，所得残渣在用5mLKH2PO4溶液提取一次，合并两次上清液。酶活性的测定取比色杯2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO4

1mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL，立即于分光光度计470nm测量OD值，每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小。过氧化物酶活性的测定实验步骤151过氧化物酶活性的测定实验结果ΔOD470/min·鲜重g=次数12345678910OD470过氧化物酶活性的测定实验结果次数12345678910OD4152种子活力的快速测定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验原理凡有生命力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）上的