史上最强生物课件动物细胞工程- XXXX

1.为什么要培养动物细胞？2.要培养动物细胞，对取材有何要求？实验材料，药性、毒性检测，提取细胞分泌物等选择胚胎细胞或幼年动物组织，因为其分裂增殖能力强。3.培养基是用液体的还是固体的？培养基中的成分有何特点？培养基是液体的，成份与动物内环境相似。

动物血清4.动物细胞培养条件有何特点？体温和PH都应与动物体内环境相似。动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。5.培养动物细胞需要哪些条件？液体、营养物质（血清）、PH、温度、气体、无菌等动物组织块细胞悬液原代培养传代培养胰蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养加入培养液用胰蛋白酶等处理贴壁细胞适宜条件不死性细胞电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛克隆牛体细胞培养去核卵母细胞去核胚胎移植体细胞核移植过程

（体细胞克隆动物）体细胞核移植技术存在的问题（1）成功率非常低（2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题1970年，有两位科学家做了一个著名的实验：人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。人—鼠细胞是怎样实现融合的？动物细胞融合有什么实践意义呢？三、动物细胞融合与单克隆抗体1.细胞融合：是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞的过程。⑴自然发生：

受精卵⑵人工诱导：

利用诱导剂诱导动物细胞融合

诱导因素：聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。

仙台病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）①什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。②灭活病毒诱导细胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞正在融合的鸡血细胞⑶动物细胞融合的原理：细胞膜的流动性把两个不不同的动动物细胞胞放在一一起，用用灭活的的病毒处处理细胞胞，它们们先发生生质融合合，再出出现核融融合，进进而形成成杂交细细胞。融合后的的杂交细细胞经过过有丝分分裂后仍仍能形成成两个完完整的杂杂交细胞胞2.动物细胞胞融合技技术的应应用：⑴突破了了有性杂杂交的局局限，使使远缘杂杂交成为为可能；；⑵为制造造单克隆抗抗体开辟了新新途径使用相应应的抗体体检测乙乙肝病毒毒——抗原3.单克隆抗抗体的制制备医院一般般怎样检检测人体体内是否否存在乙乙肝病毒毒？乙肝病毒毒模式图图凡能够引引起机体体产生特特异性免疫应答答的物质质叫做抗抗原。⑴什么是抗抗原？例如花粉粉、病菌菌、病毒毒等。有有时自身身的组织织或细胞胞也会成成为抗原原，如癌癌细胞等等。抗原决定定簇：抗原表面面具有的的某些特定的化化学基团团，能决定抗抗原特异异性，是免疫疫细胞识识别抗原原的重要要依据。。各种抗原原的决定定簇数目目不同，，同一抗抗原的决决定簇可可能有多多种。⑵什么是抗体？由何种种细胞产产生？主主要分布布在哪里里?起何作用用？当机体受受到抗原原刺激剂剂后由效效应B细胞（浆浆细胞））产生的的，并且且能与该该抗原发发生特异性性结合合的具有有免疫疫功能能的球球蛋白白——抗体。。抗体分分布于于血清清中，，也分分布于于组织织液及及外分分泌液液中。。抗体与与相应应抗原原特异异性结结合

抗体由由何种种细胞胞产生生？主主要分分布在在哪里里?血清抗抗体（（也称称多克克隆抗抗体））由血清中提取取的抗抗体是是由不不同淋淋巴细细胞产产生的的多种种抗体体的混混合物物，可可达百百万种种以上上，称称为多克隆隆抗体体。特点：：产量低低、纯纯度低低、特特异性性差、、反应应不够够灵敏敏。抗原不不纯抗体不不纯

抗原动物体内刺激效应B抗体每一个个B淋巴细细胞只只分泌泌一种种化学性性质单单一，，特异异性强强的抗抗体。如果利利用单单个B淋巴细细胞进进行无无性繁繁殖（（克隆隆），，形成成细胞胞群，，这样样的细细胞群群就有有可能能产生生出化学性性质单单一、特异性性强的抗体体——单克隆隆抗体体。问题：：怎样获获得化化学性性质单单一、、特异异性强强的抗抗体呢呢？在体外外培养养的条条件下下，一一个B淋巴细细胞能能无限限增殖殖形成成细胞胞群吗吗？什么样样的细细胞能能够在在体外外无限限增殖殖呢？？——肿瘤细细胞！！科勒米尔斯斯坦荣获1984年诺贝贝尔生生理学学或医医学奖奖如果把把一种种B淋巴细细胞与与能在在体外外大量量增殖殖的骨骨髓瘤瘤细胞胞进行行融合合，所所得到到的融合细细胞既能大大量增增殖，，又能能产生生足够够数量量的特特定抗抗体。。⑵如何诱诱导融融合？？加入聚聚乙二二醇（PEG）⑴如何得得到B淋巴细细胞？？3.制备单克隆隆抗体体的过程⑶细胞两两两融融合后后，有有哪些些类型型？B-BB-瘤(杂交瘤瘤细胞胞)瘤-瘤⑷如何筛筛选出出杂交交瘤细细胞？？单克隆隆抗体体制备备过程程中，，总共共有两两次筛筛选，，第一一次筛筛选出出杂交交瘤细细胞，，第二二次筛筛选出出能产产生特特异性性抗体体的杂杂交瘤瘤细胞胞，两两次筛筛选的的原理理和方方法是是不相相同的的。①首先先用选选择培培养基基筛选选出杂杂交瘤瘤细胞胞①细胞合合成DNA有D和S两条途途径，，其中中D途径能能被氨氨基嘌嘌呤阻阻断。。②人淋巴巴细胞胞中有有这两两种DNA的合成成途径径，但但一般般不分分裂增增殖。。③鼠骨髓髓瘤细细胞中中只有有D途径，，没有有S途径，，可是是能不不断分分裂增增殖。。你想到到筛选选杂交交瘤细细胞的的方案案了么么？小资料料：在培养养液中中加入入氨基基蝶呤呤，收收集增增殖细细胞！！加入氨氨基嘌嘌呤后后，使使D合成途途径阻阻断，，仅有有D合成途途径的的骨髓髓瘤细细胞及及其彼彼此融融合的的细胞胞就不不能增增殖，，但人淋淋巴细细胞和和骨髓髓瘤细细胞融融合后后的杂杂种细细胞因因为可可以利利用淋淋巴细细胞中中的S途径合合成DNA而增殖殖。通常采用有有限稀稀释克克隆细细胞的的方法法，将杂杂交瘤瘤细胞胞多倍倍稀释释，接接种在在多孔孔细胞胞培养养板上上培养养，使使每孔孔细胞胞不超超过一一个，，再由这这些单单细胞胞克隆隆生长长，然后检检测各各孔上上清液液中细细胞分分泌的的抗体体，那那些上上清液液可与与特定定抗原原结合合的培培养孔孔为阳阳性孔孔。最终选选出分分泌预预定特特异抗抗体的的杂交交细胞胞株进进行扩扩大培培养。。②再筛选选出能分泌泌所需需抗体体的杂杂交瘤瘤细胞胞阳性孔孔方法——抗原-抗体杂杂交法法在单克克隆抗抗体制制备过过程中中，两两次筛筛选的的原理理和方方法是是不相相同的的。⑻如何得得到大大量的的单克克隆抗抗体？？体内培培养体外培培养单克隆隆抗体体——化学性性质单单一、、特异异性强强抗体体抗原原应答答抗体体的不不纯性性动物细细胞受受到抗抗原刺刺激,引起免免疫反反应产产生的的球蛋蛋白.不是自自己的的而又又能引引起免免疫应应答反反应的的物质质就是是抗原原.一种抗抗原有有多种种不同同的决决定簇簇,刺激的的是多多种B细胞,作用于于不同同的B细胞后后,会产生生多种种抗体体,这是多多克隆隆的,故不纯纯!1.制备单单克隆隆抗体体的思思路抗原

B细胞浆细胞抗体

刺激怎么么才能能得到到纯的的抗体体?光纯还还不行行,还要大大量.怎么办办?但，有有问题:找，什什么细细胞能能无限限繁殖殖呢?思路就就出来来了:要想获获单一一的纯纯抗体体,就必须须从一一个B细胞出出发.让B细胞大大量繁繁殖(克隆)就可以以产生生大量量抗体体了.B细胞是是不能能无限限繁殖殖的.怎么办办?癌!只有癌癌细胞胞.但它不不能产产生抗抗体.癌细胞胞能无无限繁繁殖,但不能能产生生抗体体.B细胞能能产生生抗体体,但不能能大量量繁殖殖.融合呀呀!只要将将两个个细胞胞融合合即可可互补补.2.技术思思路的的重点点杂交瘤细胞

HAT筛选McAb大量培养PEG诱导细胞融合免疫B

脾矿物油骨髓瘤瘤问题:在培养养体系系中,有4种细胞胞.B细胞、、瘤细细胞,和杂交交细胞胞。我们还还是拿拿不到到McAb,怎么办办?筛选！！筛出出杂交交瘤细细胞。。怎么么筛?又是一一个思思路问问题。。关键一步单克隆隆抗体体筛选杂交细细胞杂交瘤瘤细胞胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤瘤细胞诱导细胞融合特异性性杂交交瘤细细胞杂交瘤瘤细胞胞系提取经过免免疫的的B淋巴细细胞动物细细胞融融合技技术动物细细胞培培养技技术单克隆隆抗体体的制制备过过程：：特点点：：既既能能产产生生专专一一抗抗体体又又能能大大量量繁繁殖殖特点点：：特特异异性性强强灵灵敏敏度度高高可可大大量量制制备备注射抗原免疫4、单单抗抗隆隆抗抗体体的的应应用用①作为为诊诊断断试试剂剂②定位位诊诊断断肿肿瘤瘤、、心心血血管管畸畸形形等等疾疾病病用于于体体外外诊诊断断人人类类和和动动植植物物疾疾病病及及病病原原鉴鉴定定，，纯度度高高、、特特异异性性强强，具具有有准确确、、高高效效、、简简易易、、快快速速的优优点点。。③用于于治治疗疗疾疾病病和和运运载载药药物物利用用同同位位素素标标记记单单抗抗，，在在特特定定组组织织成成像像制成成生物物导导弹弹，将将药药物物定定向向带带到到癌癌细细胞胞所所在在的的位位置置，，在在原原位位杀杀死死癌癌细细胞胞，，疗疗效效高高、、副副作作用用小小。。单克克隆隆抗抗体体的的优优点点：：特异异性性强强，，灵灵敏敏度度高高，，并并可可以以大大量量制制备备。。

⑵用用于于治治疗疗疾疾病病和和运运载载药药物物①特特异异性性强强、、灵灵敏敏度度高高生物物导导弹弹———单克克隆隆抗抗体体＋＋抗抗癌癌药药物物②疗疗效效高高、、毒毒副副作作用用小小结合同位素的单抗-----生物导弹结合合同同位位素素的的单单抗抗-----生物物导导弹弹单抗抗放射射性性同同位位素素项目动物细胞融合植物体细胞杂交原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性和植物细胞的全能性融合前提分散成单个细胞去除细胞壁诱导方法聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒聚乙二醇、离心、振动、电激、结果获得杂种细胞或细胞产物获得杂种植株用途制备单克隆抗体培育作物新品种意义使远缘杂交成为可能克服远缘杂交障碍动物物细细胞胞工工程程小小结结动物物细细胞胞培培养养：：原理理、、营营养养、、条条件件、、过过程程、、细细胞胞生生长长特特点点、、结结果果、、应应用用动物物细细胞胞融融合合：：原理理、、诱诱导导方方法法、、过过程程、、应应用用单克克隆隆抗抗体体的的制制备备：：原理理、、过过程程、、特特点点、、应应用用核移移植植与与克克隆隆动动物物：：供体体、、受受体体、、核核移移植植方方法法、、克克隆隆动动物物的的方方法法、、克克隆隆动动物物的的遗遗传传特特性性、、应应用用动、、植植物物细细胞胞工工程程的的比比较较：：植物物组组培培技技术术与与动动物物细细胞胞培培养养技技术术、、植植物物体体细细胞胞杂杂交交技技术术与与动动物物细细胞胞融融合合技技术术⑶图中中B为________过程程，，常用用_________作为为诱诱导导剂剂，该该细细胞胞继继承承___________的遗遗传传特特性性，，既既能能__________,又能能___________。B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.下图图为为某某同同学学根根据据杂杂交交瘤瘤技技术术的的方方法法，，设设计计的的生生产产破破伤伤风风杆杆菌菌的的抗抗体体实实验验方方案案⑴该实验方方案的目是；⑵A是从小鼠鼠的脾脏脏中取得得_______,该细胞能能够产生生；制备单克克隆抗体体B细胞专一抗体体细胞融合合灭活病毒毒双亲细胞胞分泌专一一抗体无限增殖殖单克隆抗抗体的制制备1、怎样获获得能分分泌专一一抗体的的B淋巴细胞胞？2、从何处处获得较较多的B淋巴细胞胞？3、用什么么方法可可以使B淋巴细胞胞与骨髓髓瘤细胞胞融合？？4、怎样筛筛选出杂杂交瘤细细胞？5、筛选出出的杂交交瘤细胞胞产生的的抗体都都一样吗吗？6、怎样获获得只产产生特异异性抗体体的杂交交瘤细胞胞？7、怎样获获得大量量的单一一抗体？？反复注射射特定的的抗原，，免疫小小鼠。小鼠的脾脾脏PEG、灭活的的病毒等等利用HAT选择培养养基培养养，筛选选否用多孔细细胞培养养板培养养，稀释释度要保证每个个孔内不不多于一一个细胞胞。抗原抗体体杂交法法检测——呈阳性反反应体内或体体外大量量培养特特异的杂杂交瘤细细胞，从从中提取取单一抗抗体。单克隆抗抗体筛选杂交细胞胞杂交瘤细细胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂杂交瘤细细胞杂交瘤细细胞系提取经过免疫疫的B淋巴细胞胞动物细胞胞融合技技术动物细胞胞培养技技术单克隆抗抗体的制制备过程程：特点：既既能产生生专一抗抗体又能能大量繁繁殖特点：特特异性强强灵敏度度高可大大量制备备注射抗原免疫1975年Kohler和Milstein的单克隆抗体体技术在生产产和使用抗体体方面开创了了新纪元，图图10示单克隆抗体体制备流程阶阶段示意图。。请据图回答答下列问题：：图10（1）该技术是在在动物细胞培培养技术和技术的基础上上发展起来的的。（2）图10中细胞A体外培养不具具有分裂能力，但但能分泌，细胞B体外培养能够够。（3）动物细胞融融合常用的方方法是。图10（1）动物细胞融融合（2）分泌特异性性抗体、无无限增殖（3）PEG（灭活的病毒毒、电刺激））（4）细胞融合是是随机的过程程，在HAT培养基中培养养，要筛选出出细胞。在细胞胞培养过程中中，为了促进进细胞摄取葡葡萄糖，常向向培养液中加加入（激素）。（5）培养2周后，即测定定培养细胞的特征，筛选选出细胞置于不同孔孔内（如图所所示）培养。。此操作前要将将培养细胞稀稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，，其目的是。（6）要获得大量量的单克隆抗抗体，可对获得的杂杂交瘤细胞进进行培养。（4）杂交瘤、胰胰岛素（5）特异性分泌泌抗X蛋白抗体的、、保证每个孔孔内不多于一一个细胞，达达到单克隆培培养的目的（（单一细胞培培养以保证抗抗体的纯度））、（6）体外或体内内⑴写出ａ、、ｂ所指的细细胞工程各称称：ａｂ。⑵实施细胞工工程ａ时，所所需的受体细细胞大多采用用动物卵细胞胞的原因是：。。⑶多莉面部的的毛色是，判断依据是是：。⑷继植物组织织培养之后，，克隆绵羊培培育成功，证证明动物细胞胞也具有。⑸请举例说明明克隆绵羊培培育成功的实实际意义：。2.世界上第一只只克隆绵羊““多莉”的培培育等程序如如图所示。请请仔细看图后后回答问题：：黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊卵腺细胞核重组细胞早期胚胎另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉ab电脉冲处理妊娠、出生核移植胚胎移植卵细胞体积大大，易于操作作，卵细胞中中有启动核基基因表达的物物质白色多利的核基因因全部来自白白面绵阳全能性保存濒危物种种，繁殖优良良品种，医学学上克隆器官官3.科学家用小鼠鼠骨髓癌细胞胞与某种细胞胞融合，得到到杂交细胞，，经培养可产产生大量的单单克隆抗体，，与骨髓癌细细胞融合的是是A.经过免疫的B淋巴细胞B.不经过免疫的的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的的B淋巴细胞A4.科学家将雌黑黑鼠乳腺细胞胞的细胞核移移入白鼠去核核的卵细胞内内，待发育成成早期胚胎后后移植入褐鼠鼠的子宫，该该褐鼠产下小小鼠的体色和和性别分别是是A.黑、雌B.褐、雌C.白、雄D.黑、雄A5.将小鼠骨髓瘤瘤细胞与一种种B淋巴细胞融合合，可使融合合的细胞经培培养产生单克克隆抗体，其其依据是A.B淋巴细胞可以以产生抗体，，但不能无限限增殖B.B淋巴细胞只有有与骨髓瘤细细胞融合后才才能产生抗体体C.骨髓瘤细胞可可以无限增殖殖，但不能产产生抗体D.骨髓瘤细胞可可以产生抗体体，但不能增增殖（多选）ACC4．单克隆抗体体是指A、单个骨髓瘤瘤细胞增殖产产生的抗体B、单个B淋巴细胞增殖殖产生的抗体体C、单个杂交交瘤细胞增增殖产生的的抗体D、单个抗体体通过克隆隆化，产生生大量抗体体5.下列哪一项项属于克隆隆？A.将鸡的某个个DNA片段整合到到小鼠的DNA分子中B.将抗药菌的的某基因引引人草履虫虫的细胞内内C.将鼠骨髓瘤瘤细胞与经经过免疫的的脾细胞融融合成杂交交瘤细胞D.将某肿瘤细细胞在体外外培养繁殖殖成一个细细胞系D6.一只羊的卵卵细胞核被被另一只羊羊的体细胞胞核置换后后，这个卵卵细胞经过过多次分裂裂，再植入入第三只羊羊的子宫内内发育，结结果产下一一只羊羔。。这种克隆隆技术具有有多种用途途，但是不不能A．有选择地地繁殖某一一性别的家家畜B.繁殖家畜中中的优秀个个体C．用于保存存物种D.改变动物的的基因型D7.在动物细胞胞融合和植植物体细胞胞杂交的比比较中，正正确的是（（））A.结果是相同同的B.杂种细胞的的形成过程程基本相同同C.操作过程中中酶的作用用相同D.诱导融合手手段的手段段相同B8.已知细胞合合成DNA有D和S两条途径，，其中D途径能被氨氨基嘌呤阻阻断。人淋巴细胞胞中有这两两种DNA的合成途径径，但一般般DNA不分裂增殖殖。鼠骨髓髓瘤细胞中中尽管没有有S途径，但能能不断分裂裂增殖，将将这两种细细胞在试管管中混合，，加聚乙二二醇促融，，获得杂种种细胞。请请回答：⑴试管中除融融合的杂种种细胞外，，还有种融合细胞胞2⑵设计一方法法（不考虑虑机械方法法），从培培养液中分分离出杂种种细胞，并并说原理。。培养液中加加入氨基嘌嘌呤，收集集增殖的细细胞。加入氨基嘌嘌呤后，使使D合成途径阻阻断，仅有有D合成途径的的骨髓瘤细细胞及其彼彼此融合的的细胞就不不能增殖，，但人淋巴巴细胞和骨骨髓瘤细胞胞融合后的的杂种细胞胞因为可以以利用淋巴巴细胞中的的S途径合成DNA而增殖。制备单克隆隆抗体1、常规抗体体获得的方方法及其特特点2、单克隆抗抗体制备的的原理◆利用产生特异性性抗体的功功能。◆利用无限增殖的的特性。◆利用技术将两种种细胞融合合获得杂交瘤细胞胞。◆利用技术大量培培养杂交瘤瘤细胞。B淋巴细胞骨髓瘤细胞胞动物细胞融融合动物细胞培培养3、单克隆抗体体的制备4、单克隆抗抗体的应用用（1）融合后的的杂种细胞胞容易成活活吗？（2）制备单克克隆抗体的的过程应用用了哪些细细胞工程技技术手段？？（3）在整个制备备的过程中中要经过几几次筛选？？思考：细胞的同源源性越近，，融合形成成的杂种细细胞越易成成活细胞融合技技术、细胞胞培养技术术Ⅰ.筛选得到杂杂交瘤细胞胞，Ⅱ.筛选先在多多孔培养板板上，在每每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选选出特异抗抗体的细胞胞群⑷怎样筛选出出B淋巴细胞和和骨髓瘤细细胞间融合合所形成的的能产生特特定抗体的的杂交瘤细细胞？用抗体检测测和克隆化化培养得到到能分泌所所需抗体的的杂种细胞胞——专一抗体检检测。18.如何利用杂杂交瘤细胞胞来大量生生产单克隆隆抗体？①将杂交瘤瘤细胞在体外大规模模培养，从细胞培培养液中就就能提取大大量的单克克隆抗体；；②把杂交瘤瘤细胞注射射到小鼠腹腔内内增殖，再从小鼠鼠腹腔中提提取单克隆隆抗体。⑸如何进行杂杂交瘤细胞胞的抗体检检测及克隆隆化培养？？融合后的细细胞经选择择性培养基基培养后，，能存活的的细胞就是是杂交瘤细细胞。但这这些杂交瘤瘤细胞并非非都是能分分泌所需抗抗体的细胞胞，通常用用“有限稀稀释法”来来选择。将杂交瘤细细胞稀释，，用多孔细细胞培养板板培养，使使每孔细胞胞不超过一一个，通过过培养让其其增殖。然然后检测各各孔上清液液中细胞分分泌的抗体体（常用酶酶联免疫吸吸附试验法法），那些些上清液可可与特定抗抗原结合的的培养孔为为阳性孔。。阳性孔中的的细胞还不不能保证是是来自单个个细胞，挑挑选阳性孔孔的细胞继继续进行有有限稀释，，一般需进进行3～4次，直至确确信每个孔孔中增殖的的细胞为单单克隆细胞胞。该过程程即为杂交交瘤细胞的的克隆化培培养。第二次筛选选的原理和和方法：在实际免疫疫过程中，，由于采用用连续注射射抗原的方方法，且一一种抗原决决定簇刺激激机体形成成相对应的的一种效应应B淋巴细胞，，因此，从从小鼠脾脏脏中取出的的效应B淋巴细胞的的特异性是是不同的，，经HAT培养液筛选选的杂交瘤瘤细胞特异异性也存在在差异，所所以必须从从杂交瘤细细胞群中筛筛选出能产产生针对某某一预定抗抗原快定簇簇的特异性性杂交瘤细细胞。通常采用有有限稀释克克隆细胞的的方法，将将杂交瘤细细胞多倍稀稀释，接种种在多孔的的细胞培养养板上，使使每一孔含含一个或几几个杂交瘤瘤细胞（理理论上30%的孔中细胞胞数为0时，才能保保证有些孔孔中是单个个细胞），，再由这些些单细胞克克隆生长，，最终选出出分泌预定定特异抗体体的杂交细细胞株进行行扩大培养养。实验验过过程程要要解解决决的的问问题题：：1、如如何何使使机机体体产产生生能能分分泌泌抗抗体体的的B淋巴巴细细胞胞？？2、从从实实验验动动物物的的什什么么部部位位提提取取B淋巴巴细细胞胞？？3、机机体体内内什什么么细细胞胞能能无无限限增增殖殖？？3、用用什什么么方方法法诱诱导导细细胞胞融融合合？？4、杂杂交交瘤瘤细细胞胞有有几几种种类类型型？？制制备备单单克克隆隆抗抗体体需需要要哪哪种种类类型型？？5、如如何何筛筛选选杂杂交交瘤瘤细细胞胞？？根据据下下面面植植物物体体细细胞胞杂杂交交技技术术流流程程图图回回答答相相关关问问题题：：（1）若若运运用用传传统统有有性性杂杂交交（（即即用用番番茄茄、、马马铃铃薯薯杂杂交交））能能否否得得到到杂杂种种植植株株？？为为什什么么？？_____________________________________________________________________________________.不能能，，不不同同种种的的植植物物存存在在生生殖殖隔隔离离（2）在在利利用用杂杂种种细细胞胞培培育育杂杂种种植植株株的的过过程程中中，，运运用用的的技技术术手手段段是是________________，依依据据的的原原理理是是_________________,其中中过过程