甾体激素类药物的分析1精选课件_第1页
甾体激素类药物的分析1精选课件_第2页
甾体激素类药物的分析1精选课件_第3页
甾体激素类药物的分析1精选课件_第4页
甾体激素类药物的分析1精选课件_第5页
已阅读5页,还剩121页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

甾体激素类药物的分析4甾体激素类药物的分析41ABCD12345678910111213141516171819基本结构

概述甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核。ABCD123456789101112131415161712分类甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素孕激素雌激素蛋白同化激素分类甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素孕激素雌激素蛋白3

(一)肾上腺皮质激素△4–3–酮基(紫外吸收)天然皮质激素:氢化可的松

母核有21个碳原子C17–醇酮基(还原性)(一)肾上腺皮质激素△4–3–酮基天然皮质激素:氢化可的松4醋酸地塞米松结构修饰曲安息龙地塞米松磷酸钠提高结构稳定性增强抗炎作用醋酸地塞米松结构修饰曲安息龙地塞米松磷酸钠提高结构稳定性5(二)雄性激素和蛋白同化激素天然雄性激素:睾酮

△4–3–酮基4位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用

母核有19个碳原子

A环中有△4–3–酮基结构(二)雄性激素和蛋白同化激素天然雄性激素:睾酮△4–36结构修饰增加脂溶性,制成油注射剂可口服、延效丙酸睾酮甲睾酮增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强可口服结构修饰增加脂溶性,制成油注射剂丙酸睾酮甲睾酮增加位阻,难代7蛋白同化激素苯丙酸诺龙4-氯醋酸睾丸素

母核有18或19个碳原子蛋白同化激素苯丙酸诺龙4-氯醋酸睾丸素母核有18或19个碳8(三)孕激素C17--甲酮基△4–3–酮基天然孕激素:黄体酮

母核有21个碳原子

口服被迅速破坏失效,只能肌注(三)孕激素C17--甲酮基△4–3–酮基天然孕激素:黄体9结构修饰醋酸甲地孕酮(孕酮类孕激素)炔诺孕酮(睾酮类孕激素)炔诺酮(睾酮类孕激素)口服、长效口服、长效,17-OH作成庚酸酯,注射一次可维持3个月结构修饰醋酸甲地孕酮(孕酮类孕激素)炔诺孕酮(睾酮类孕激素)10呈色强度较无水乙醇中高C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反应较慢,需加热或较长时间放置,才完成反应。(五)UV-ViS分光光度法均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。定量方法:内标法内标-1示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查结构修饰增加脂溶性,制成油注射剂酸:异烟肼=2:1其中以四氮唑盐的显色反应最为常用,不但可用作层析法的显色剂,还可用于含量测定.(2)与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的肟或缩氨脲。原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。2、苯环280nm(±)雌激素增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强水分、温度、O2与光线的影响(四)雌激素

天然的雌性激素:雌二醇

母核有18个碳原子

A环为苯环,C3位上有酚羟基,C17位上有β-羟基

结构不稳定,口服无效呈色强度较无水乙醇中高(四)雌激素天然的雌性11结构修饰

炔雌醇

戊酸雌二醇

苯甲酸雌二醇乙炔基引入,使仲醇变叔醇,增加空间位阻,阻碍酶对药物的氧化代谢,可口服17位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效3位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效可口服高效长效结构修饰炔雌醇戊酸雌二醇12人工合成代用品:非甾体化合物己烯雌二酚高效、长效人工合成代用品:非甾体化合物己烯雌二酚高效、长效13△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羟基C17–甲酮基A环为3–OH苯环肾上腺皮质激素++雄性与蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鉴别反应UV、羰基试剂、氨基脲反应还原性(碱性酒石酸酮、氨制AgNO3)可成酯与亚硝基铁氰化钠、间二硝基苯反应UV、与重氮苯磺酸盐反应二、特殊官能团与分析方法△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羟基C17–甲酮基14第二节鉴别试验一、物理常数的测定二、化学鉴别法三、制备衍生物测定熔点四、紫外分光光度法五、红外分光光度六、薄层色谱法七、高效液相色谱法第二节鉴别试验一、物理常数的测定二、化学鉴别法三、制备15第二节鉴别试验二、化学鉴别法(一)呈色反应(1)与强酸的呈色反应强酸:H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。第二节鉴别试验二、化学鉴别法(1)与强酸的呈色反应强酸16(五)UV-ViS分光光度法原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。200-760nm有特征吸收。层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。酸:异烟肼=2:1判断:供试液如显杂质斑点,不得多于3个,其颜色与对照液的主斑点比较,不得更深。乙炔基引入,使仲醇变叔醇,增加空间位阻,阻碍酶对药物的氧化代谢,可口服C11=O不反应USP、BP、JP均采用结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。+Cu2O+H2O(3)与AgNO3的沉淀反应测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。测定样品:黄体酮原料、注射液。原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。水分、温度、O2与光线的影响O2与光线对反应的影响不大其他甾体:有些杂质与该甾体激素药物结构类似,也具有一定的药理作用而又互不相同,因此在甾体激素类药物的质量控制中,“其他甾体”的限度检查显得很重要。显色荧光加水稀释氢化可的松棕黄色至红色绿色黄色至橙黄色炔雌醇橙红黄绿玫红絮状↓炔雌醚橙红黄绿红色↓泼尼松黄→橙—黄色渐变蓝绿色泼尼松龙深红—灰色絮状↓地塞米松淡红棕色—颜色消失苯甲酸雌二醇黄绿色蓝色淡橙色与硫酸显色反应(五)UV-ViS分光光度法显色荧光加水稀释氢化可的171、C3–酮基和C20–酮基(1)与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼反应生成腙。(2)官能团的呈色反应(2)与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的肟或缩氨脲。1、C3–酮基和C20–酮基(1)与羰基试剂2,4-二硝基苯18+HCl黄色3,20-双腙室温下长时间加热+HCl黄色3,20-双腙室温下长时间加热19结论:成腙反应中

C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反应较慢,需加热或较长时间放置,才完成反应。

C11–酮基受C18、C19位甲基甲基的阻碍,不发生反应。

C3–酮基空间位阻最小,最易起反应,室温下先生成单腙。结论:成腙反应中C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反202、C17–α–醇酮基的呈色反应(还原性)能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。其中以四氮唑盐的显色反应最为常用,不但可用作层析法的显色剂,还可用于含量测定.适用:肾上腺皮质激素。2、C17–α–醇酮基的呈色反应(还原性)能与碱性酒石酸铜21+2Cu2++4OH-+Cu2O+H2O橙红色+2Ag++2OH-+2Ag+CH3COOH黑色醋酸去氧皮质酮+2Cu2++4OH-+Cu2O+H2O橙22+H2O+CH3COOH++OH-醋酸泼尼松深红色的三苯甲鐕四氮唑盐+H2O+CH3COOH++OH-醋酸泼尼松深红色的三苯23结论:

三苯甲鐕于490nm处显示最大吸收,可用比色法测含量。

四氮唑盐反应还用于肾上腺皮质激素类药物中杂质“有关物质”检查的显色剂。

反应在碱性条件下(水解)进行。结论:三苯甲鐕于490nm处显示最大吸收,可用比色法测含量24杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。酸的种类和浓度及异烟肼的浓度3位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效二、UV-ViS分光光度法定量方法:内标法内标-1酸:异烟肼=2:1能与重氮苯磺酸发生偶合反应,生成红色偶氮染料。三、有机溶剂残留量的检查三、有机溶剂残留量的检查增加脂溶性,制成油注射剂加快红色产物的形成200-760nm有特征吸收。加快黄色产物的形成、转化水分、温度、O2与光线的影响测定样品:黄体酮原料、注射液。以氢氧化四甲基铵的结果最佳UV、与重氮苯磺酸盐反应200-760nm有特征吸收。A环中有△4–3–酮基结构层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。系统适用性试验:n>1000,R符合规定。适用:具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物。3.甲酮基的呈色反应能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。孕激素(1)甲酮基:黄体酮专属性反应。黄体酮其他甾体亚硝基铁氰化钠蓝紫色淡橙色或不显色杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷25结论:

在碱性条件下进行。与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普钠反应。(2)亚甲基的反应:硫酸普拉睾酮乙醇间二硝基苯氢氧化钠紫红色结论:在碱性条件下进行。与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普26适用:雌激素类药物。4.酚羟基的呈色反应能与重氮苯磺酸发生偶合反应,生成红色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H++红色适用:雌激素类药物。4.酚羟基的呈色反应能与重氮苯磺酸27有机氟Fˉ有机破坏有机氯5、卤元素的呈色反应茜素氟蓝—硝酸亚铈硝酸—硝酸银呈蓝紫色

ClˉAgCl氯原子结合在母核环上有机氟Fˉ有机破坏有机氯5、卤元素的呈色反应茜素氟蓝—硝酸亚286、沉淀反应(1)与碱性酒石酸铜(斐林试液)的沉淀反应(2)氨制AgNO3(多伦试液)的沉淀反应(3)与AgNO3的沉淀反应适用:含炔基的甾体激素类药物(炔雌醇、炔诺酮)。机理:↓HNO3++NaOH滴定,电位法指示终点6、沉淀反应(1)与碱性酒石酸铜(斐林试液)的沉淀反应(2)29(4)与HNO3-AgNO3的沉淀反应适用:甾体激素类药物C21位上有氯原子取代,如丙酸氯倍他索。机理:有机氯原子水解加热无机氯原子结合在母核环上的氯原子氧瓶燃烧法破坏无机氯原子硝酸—硝酸银AgCl(4)与HNO3-AgNO3的沉淀反应适用:甾体激素类药物30原理:一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构,可先行水解,根据水解产物来鉴别。7、水解产物的反应适用:本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯结果:醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应,生成有香气醋酸乙酯。戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸,进行鉴别。原理:一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构,31三、制备衍生物测熔点(二)酯的水解醇制KOH水解m.p.为150℃~156℃(一)酯的生成+KOH丙酸睾丸素睾丸素m.p.为201℃+三、制备衍生物测熔点(二)酯的水解醇制KOHm.p.为15032m.p.约182℃(分解)(三)缩氨基脲的生成苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙缩氨脲H2NCONHNH2(四)酮肟的生成炔诺酮HONH2炔诺酮肟m.p.约195℃(分解)醋酸泼尼松m.p.约182℃(分解)(三)缩氨基脲的生成苯丙酸诺龙苯丙33△4-3-酮(五)UV-ViS分光光度法240nm左右280nm左右苯环其他共轭结构原理200-760nm有特征吸收。方法可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。△4-3-酮(五)UV-ViS分光光度法240nm左右28034水分、温度、O2与光线的影响还原性(碱性酒石酸酮、氨制AgNO3)≤图A中峰1面积的四分之三1、TLC法(自身对照法)C21-OH未酯化>C21-OH酯化C3–酮基空间位阻最小,最易起反应,室温下先生成单腙。人工合成代用品:非甾体化合物内标物己烯雌酚能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。eg:氢化可的松中其他甾体的检查杂质来源:原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。以氢氧化四甲基铵的结果最佳测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查+Cu2O+H2O增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强适用:肾上腺皮质激素。均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用其中以四氮唑盐的显色反应最为常用,不但可用作层析法的显色剂,还可用于含量测定.判定方法:规定杂质峰数目炔诺孕酮(睾酮类孕激素)

示例曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇浓度20μg/ml20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收,A为0.57~0.60,在239nm与263nm处的吸收度比值为2.25~2.45水分、温度、O2与光线的影响示例曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂35结构特征:酚羟基C17–OHC17–乙炔基eg1:炔雌醇(六)IR法原料药结构特征:eg1:炔雌醇(六)IR法原料药361505cm-13505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动1505cm-13505cm-13300cm-1ν1590c37eg2:黄体酮△4-3-酮结构特征:C17-酮基eg2:黄体酮△4-3-酮结构特征:C17-酮基381700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基139七、TLC法八、HPLC应用甾体激素类药物原料与制剂的鉴别甾体激素类药物原料与制剂的鉴别(如:醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏)方法对照品法对照品法结果判断要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同要求在含量测定项下记录的色谱图中,供试品峰的tR与对照品峰的tR一致七、TLC法八、HPLC应用甾体激素类药物原料与制剂的鉴别甾40第三节特殊杂质检查

杂质来源:原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。一、有关物质的检查

其他甾体:有些杂质与该甾体激素药物结构类似,也具有一定的药理作用而又互不相同,因此在甾体激素类药物的质量控制中,“其他甾体”的限度检查显得很重要。第三节特殊杂质检查杂质来源:原料、中间体、异构体、降解41检查方法:(具有一定分离能力)判定方法:规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色1、TLC法(自身对照法)eg:氢化可的松中其他甾体的检查供试液:本品+氯仿-甲醇(9:1)浓度:3.0mg/ml对照液:供试液(3.0mg/ml)+氯仿-甲醇(9:1)60μg/ml层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。判断:供试液如显杂质斑点,不得多于3个,其颜色与对照液的主斑点比较,不得更深。检查方法:(具有一定分离能力)判定方法:规定杂质斑点数目422、HPLC法(自身对照法)≤图A中峰1面积的四分之三判定方法:规定杂质峰数目规定杂质峰面积2、HPLC法(自身对照法)≤图A中峰1面积的四分之三判定方43二、游离磷酸盐的检查方法:对照品比色法

杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。740nm原理:供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝二、游离磷酸盐的检查方法:对照品比色法杂质来源:地塞米44在238nm处有最大吸收在238nm处有最大吸收200-760nm有特征吸收。异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度(0.人工合成代用品:非甾体化合物第四节含量测定能与重氮苯磺酸发生偶合反应,生成红色偶氮染料。均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用+2Cu2++4OH-层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。C11=O>C11-OHA环中有△4–3–酮基结构适用:本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。判断:供试液如显杂质斑点,不得多于3个,其颜色与对照液的主斑点比较,不得更深。测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。(2)官能团的呈色反应口服被迅速破坏失效,只能肌注4位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造三、有机溶剂残留量的检查eg:地塞米松磷酸钠方法:GC色谱法杂质来源:地塞米松磷酸钠生产中,使用大量甲醇和丙酮。结果判断:不得出现甲醇峰,甲醇含量≤0.3%丙酮规定不得过≤5.0%在238nm处有最大吸收三、有机溶剂残留量的检查eg:地塞米45四、硒的检查氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定

杂质来源:地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激素类药物,在生产中使用二氧化硒(SeO2)脱氢工艺,药物可能引入杂质硒。

方法:药物

结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度(0.005%~0.01%)

。378nm五、雌酮六、乙炔基四、硒的检查氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定杂质来源:地塞米松、46第四节含量测定

常用方法容量法比色法紫外分光光度法荧光法气相色谱法高效液相色谱四氮唑盐比色法异烟肼比色法铁-酚试剂比色法第四节含量测定常用方法容量法比色法紫外分光光度法荧47一、HPLC法USP、BP、JP均采用方法:RP-HPLC(内标法)测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。eg:黄体酮的含量测定

色谱条件:固定相ODS,检测波长254nm流动相甲醇-水(65:35)内标物己烯雌酚系统适用性试验:n>1000,R符合规定。

一、HPLC法USP、BP、JP均采用方法:RP-HPLC(48测定样品:黄体酮原料、注射液。

定量方法:内标法内标-1测定样品:黄体酮原料、注射液。

定量方法:内标法内标-149二、UV-ViS分光光度法1、△4-3-酮240nm(±)2、苯环280nm(±)雌激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素(一)UV分光光度法缺点:专属性不强二、UV-ViS分光光度法1、△4-3-酮240nm(±50示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查(1)配制供试液,取10片分别进行测定

(2)测定:240nm

(3)计算

示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查51(二)比色法有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH-1、四氮唑盐比色法(1)原理:肾上腺皮质激素类C17-α-醇酮基强还原性。[H]氯化三苯四氮唑(TTC)三苯甲瓒↓深红(二)比色法有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH-1、52蓝四氮唑(BT)525nm蓝四氮唑(BT)5325℃氢氧化四甲基铵对照液供试液ATTC40~45′暗(2)方法:对照品法(3)影响因素A.基团对反应速度的影响C11=O>C11-OHC21-OH未酯化>C21-OH酯化25℃氢氧化四甲基铵对照液供试液ATTC40~45′暗(2)54B、溶剂和水分的影响

以无水乙醇为溶剂,水含量大时,呈色减慢,不超过5%对结果没有影响。C、O2与光线的影响避光、隔绝空气、快速、充N2D、碱的种类及加入顺序以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序:皮质激素溶液四氮唑盐碱试液B、溶剂和水分的影响以无水乙醇为溶剂,水含量大时,55E.温度与时间室温(25℃)反应40~45minF.干扰物的影响油膏、冷霜等制剂含聚乙二醇、丙二醇、羊毛脂对BT的显色反应有干扰,要先分离后测定。E.温度与时间室温(25℃)反应40~45minF.干56(1)原理异烟腙(黄)HCl420nm2、异烟肼比色法C3-酮基+异烟肼H2O肾上腺皮质激素雄性激素蛋白同化激素孕激素(1)原理异烟腙(黄)HCl420nm2、异烟肼比色法C357基团对反应速度的影响C11=O>C11-OH(3)与AgNO3的沉淀反应第三节特殊杂质检查(4)与HNO3-AgNO3的沉淀反应人工合成代用品:非甾体化合物增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强规定杂质峰面积(四)雌激素杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。200-760nm有特征吸收。(2)官能团的呈色反应[(NH4)2Fe(SO4)2+H2SO4+H2O2+苯酚]能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。定量方法:内标法内标-14位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造A环中有△4–3–酮基结构示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查(四)雌激素甾体激素类药物的分析4UV、与重氮苯磺酸盐反应(2)方法:对照品法60℃异烟肼无水甲醇对照液供试液A暗60′基团对反应速度的影响(2)方法:对照品法60℃异烟肼无水甲醇58(3)影响因素A.反应速度(反应专属性)C3=O>C17=O、C20=OC11=O不反应B.溶剂的选择异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响无水甲醇无水乙醇对试剂的稳定性好呈色强度较无水乙醇中高对植物油的溶解度小(3)影响因素A.反应速度(反应专属性)C3=O>C17=59C.水分、温度、O2与光线的影响

含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓O2与光线对反应的影响不大t℃↑→ν↑D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸:异烟肼=2:1盐酸浓度0.0074mol/L最大A异烟肼浓度0.00365mol/LC.水分、温度、O2与光线的影响含水量↑→腙水解↑→60(1)原理λmax=4653、Kober反应比色法△△桃红黄色雌激素2OH乙醇-42SOHλmax=515(1)原理λmax=4653、Kober反应比色法△△桃红黄61雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=515雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=51562USP、BP、JP均采用戊酸雌二醇方法:对照品比色法示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查方法:RP-HPLC(内标法)戊酸雌二醇均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用测定样品:黄体酮原料、注射液。其他甾体:有些杂质与该甾体激素药物结构类似,也具有一定的药理作用而又互不相同,因此在甾体激素类药物的质量控制中,“其他甾体”的限度检查显得很重要。(五)UV-ViS分光光度法原理:供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝还原性(碱性酒石酸酮、氨制AgNO3)2、苯环280nm(±)雌激素结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度(0.3位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效流动相甲醇-水(65:35)C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反应较慢,需加热或较长时间放置,才完成反应。酸:异烟肼=2:1A环中有△4–3–酮基结构[(NH4)2Fe(SO4)2

+H2SO4+H2O2+苯酚]铁-酚试剂Iron-phenolReagent铁盐的作用加快黄色产物的形成、转化加强红色产物的稳定性酚的作用加快红色产物的形成消除反应产生的荧光USP、BP、JP均采用[(NH4)2Fe(SO4)2+63甾体激素类药物的分析4甾体激素类药物的分析464ABCD12345678910111213141516171819基本结构

概述甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核。ABCD1234567891011121314151617165分类甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素孕激素雌激素蛋白同化激素分类甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素孕激素雌激素蛋白66

(一)肾上腺皮质激素△4–3–酮基(紫外吸收)天然皮质激素:氢化可的松

母核有21个碳原子C17–醇酮基(还原性)(一)肾上腺皮质激素△4–3–酮基天然皮质激素:氢化可的松67醋酸地塞米松结构修饰曲安息龙地塞米松磷酸钠提高结构稳定性增强抗炎作用醋酸地塞米松结构修饰曲安息龙地塞米松磷酸钠提高结构稳定性68(二)雄性激素和蛋白同化激素天然雄性激素:睾酮

△4–3–酮基4位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用

母核有19个碳原子

A环中有△4–3–酮基结构(二)雄性激素和蛋白同化激素天然雄性激素:睾酮△4–369结构修饰增加脂溶性,制成油注射剂可口服、延效丙酸睾酮甲睾酮增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强可口服结构修饰增加脂溶性,制成油注射剂丙酸睾酮甲睾酮增加位阻,难代70蛋白同化激素苯丙酸诺龙4-氯醋酸睾丸素

母核有18或19个碳原子蛋白同化激素苯丙酸诺龙4-氯醋酸睾丸素母核有18或19个碳71(三)孕激素C17--甲酮基△4–3–酮基天然孕激素:黄体酮

母核有21个碳原子

口服被迅速破坏失效,只能肌注(三)孕激素C17--甲酮基△4–3–酮基天然孕激素:黄体72结构修饰醋酸甲地孕酮(孕酮类孕激素)炔诺孕酮(睾酮类孕激素)炔诺酮(睾酮类孕激素)口服、长效口服、长效,17-OH作成庚酸酯,注射一次可维持3个月结构修饰醋酸甲地孕酮(孕酮类孕激素)炔诺孕酮(睾酮类孕激素)73呈色强度较无水乙醇中高C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反应较慢,需加热或较长时间放置,才完成反应。(五)UV-ViS分光光度法均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。定量方法:内标法内标-1示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查结构修饰增加脂溶性,制成油注射剂酸:异烟肼=2:1其中以四氮唑盐的显色反应最为常用,不但可用作层析法的显色剂,还可用于含量测定.(2)与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的肟或缩氨脲。原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。2、苯环280nm(±)雌激素增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强水分、温度、O2与光线的影响(四)雌激素

天然的雌性激素:雌二醇

母核有18个碳原子

A环为苯环,C3位上有酚羟基,C17位上有β-羟基

结构不稳定,口服无效呈色强度较无水乙醇中高(四)雌激素天然的雌性74结构修饰

炔雌醇

戊酸雌二醇

苯甲酸雌二醇乙炔基引入,使仲醇变叔醇,增加空间位阻,阻碍酶对药物的氧化代谢,可口服17位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效3位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效可口服高效长效结构修饰炔雌醇戊酸雌二醇75人工合成代用品:非甾体化合物己烯雌二酚高效、长效人工合成代用品:非甾体化合物己烯雌二酚高效、长效76△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羟基C17–甲酮基A环为3–OH苯环肾上腺皮质激素++雄性与蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鉴别反应UV、羰基试剂、氨基脲反应还原性(碱性酒石酸酮、氨制AgNO3)可成酯与亚硝基铁氰化钠、间二硝基苯反应UV、与重氮苯磺酸盐反应二、特殊官能团与分析方法△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羟基C17–甲酮基77第二节鉴别试验一、物理常数的测定二、化学鉴别法三、制备衍生物测定熔点四、紫外分光光度法五、红外分光光度六、薄层色谱法七、高效液相色谱法第二节鉴别试验一、物理常数的测定二、化学鉴别法三、制备78第二节鉴别试验二、化学鉴别法(一)呈色反应(1)与强酸的呈色反应强酸:H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。第二节鉴别试验二、化学鉴别法(1)与强酸的呈色反应强酸79(五)UV-ViS分光光度法原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。200-760nm有特征吸收。层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。酸:异烟肼=2:1判断:供试液如显杂质斑点,不得多于3个,其颜色与对照液的主斑点比较,不得更深。乙炔基引入,使仲醇变叔醇,增加空间位阻,阻碍酶对药物的氧化代谢,可口服C11=O不反应USP、BP、JP均采用结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。+Cu2O+H2O(3)与AgNO3的沉淀反应测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。测定样品:黄体酮原料、注射液。原理:酮基先质子化,形成正碳离子,再与HSO4-作用呈色。水分、温度、O2与光线的影响O2与光线对反应的影响不大其他甾体:有些杂质与该甾体激素药物结构类似,也具有一定的药理作用而又互不相同,因此在甾体激素类药物的质量控制中,“其他甾体”的限度检查显得很重要。显色荧光加水稀释氢化可的松棕黄色至红色绿色黄色至橙黄色炔雌醇橙红黄绿玫红絮状↓炔雌醚橙红黄绿红色↓泼尼松黄→橙—黄色渐变蓝绿色泼尼松龙深红—灰色絮状↓地塞米松淡红棕色—颜色消失苯甲酸雌二醇黄绿色蓝色淡橙色与硫酸显色反应(五)UV-ViS分光光度法显色荧光加水稀释氢化可的801、C3–酮基和C20–酮基(1)与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼反应生成腙。(2)官能团的呈色反应(2)与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的肟或缩氨脲。1、C3–酮基和C20–酮基(1)与羰基试剂2,4-二硝基苯81+HCl黄色3,20-双腙室温下长时间加热+HCl黄色3,20-双腙室温下长时间加热82结论:成腙反应中

C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反应较慢,需加热或较长时间放置,才完成反应。

C11–酮基受C18、C19位甲基甲基的阻碍,不发生反应。

C3–酮基空间位阻最小,最易起反应,室温下先生成单腙。结论:成腙反应中C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响,反832、C17–α–醇酮基的呈色反应(还原性)能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。其中以四氮唑盐的显色反应最为常用,不但可用作层析法的显色剂,还可用于含量测定.适用:肾上腺皮质激素。2、C17–α–醇酮基的呈色反应(还原性)能与碱性酒石酸铜84+2Cu2++4OH-+Cu2O+H2O橙红色+2Ag++2OH-+2Ag+CH3COOH黑色醋酸去氧皮质酮+2Cu2++4OH-+Cu2O+H2O橙85+H2O+CH3COOH++OH-醋酸泼尼松深红色的三苯甲鐕四氮唑盐+H2O+CH3COOH++OH-醋酸泼尼松深红色的三苯86结论:

三苯甲鐕于490nm处显示最大吸收,可用比色法测含量。

四氮唑盐反应还用于肾上腺皮质激素类药物中杂质“有关物质”检查的显色剂。

反应在碱性条件下(水解)进行。结论:三苯甲鐕于490nm处显示最大吸收,可用比色法测含量87杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。酸的种类和浓度及异烟肼的浓度3位羟基酯化,酯在体内缓慢水解,延效二、UV-ViS分光光度法定量方法:内标法内标-1酸:异烟肼=2:1能与重氮苯磺酸发生偶合反应,生成红色偶氮染料。三、有机溶剂残留量的检查三、有机溶剂残留量的检查增加脂溶性,制成油注射剂加快红色产物的形成200-760nm有特征吸收。加快黄色产物的形成、转化水分、温度、O2与光线的影响测定样品:黄体酮原料、注射液。以氢氧化四甲基铵的结果最佳UV、与重氮苯磺酸盐反应200-760nm有特征吸收。A环中有△4–3–酮基结构层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。系统适用性试验:n>1000,R符合规定。适用:具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物。3.甲酮基的呈色反应能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。孕激素(1)甲酮基:黄体酮专属性反应。黄体酮其他甾体亚硝基铁氰化钠蓝紫色淡橙色或不显色杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷88结论:

在碱性条件下进行。与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普钠反应。(2)亚甲基的反应:硫酸普拉睾酮乙醇间二硝基苯氢氧化钠紫红色结论:在碱性条件下进行。与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普89适用:雌激素类药物。4.酚羟基的呈色反应能与重氮苯磺酸发生偶合反应,生成红色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H++红色适用:雌激素类药物。4.酚羟基的呈色反应能与重氮苯磺酸90有机氟Fˉ有机破坏有机氯5、卤元素的呈色反应茜素氟蓝—硝酸亚铈硝酸—硝酸银呈蓝紫色

ClˉAgCl氯原子结合在母核环上有机氟Fˉ有机破坏有机氯5、卤元素的呈色反应茜素氟蓝—硝酸亚916、沉淀反应(1)与碱性酒石酸铜(斐林试液)的沉淀反应(2)氨制AgNO3(多伦试液)的沉淀反应(3)与AgNO3的沉淀反应适用:含炔基的甾体激素类药物(炔雌醇、炔诺酮)。机理:↓HNO3++NaOH滴定,电位法指示终点6、沉淀反应(1)与碱性酒石酸铜(斐林试液)的沉淀反应(2)92(4)与HNO3-AgNO3的沉淀反应适用:甾体激素类药物C21位上有氯原子取代,如丙酸氯倍他索。机理:有机氯原子水解加热无机氯原子结合在母核环上的氯原子氧瓶燃烧法破坏无机氯原子硝酸—硝酸银AgCl(4)与HNO3-AgNO3的沉淀反应适用:甾体激素类药物93原理:一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构,可先行水解,根据水解产物来鉴别。7、水解产物的反应适用:本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯结果:醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应,生成有香气醋酸乙酯。戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸,进行鉴别。原理:一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构,94三、制备衍生物测熔点(二)酯的水解醇制KOH水解m.p.为150℃~156℃(一)酯的生成+KOH丙酸睾丸素睾丸素m.p.为201℃+三、制备衍生物测熔点(二)酯的水解醇制KOHm.p.为15095m.p.约182℃(分解)(三)缩氨基脲的生成苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙缩氨脲H2NCONHNH2(四)酮肟的生成炔诺酮HONH2炔诺酮肟m.p.约195℃(分解)醋酸泼尼松m.p.约182℃(分解)(三)缩氨基脲的生成苯丙酸诺龙苯丙96△4-3-酮(五)UV-ViS分光光度法240nm左右280nm左右苯环其他共轭结构原理200-760nm有特征吸收。方法可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。△4-3-酮(五)UV-ViS分光光度法240nm左右28097水分、温度、O2与光线的影响还原性(碱性酒石酸酮、氨制AgNO3)≤图A中峰1面积的四分之三1、TLC法(自身对照法)C21-OH未酯化>C21-OH酯化C3–酮基空间位阻最小,最易起反应,室温下先生成单腙。人工合成代用品:非甾体化合物内标物己烯雌酚能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。eg:氢化可的松中其他甾体的检查杂质来源:原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。以氢氧化四甲基铵的结果最佳测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查+Cu2O+H2O增加位阻,难代谢氧化,稳定性增强适用:肾上腺皮质激素。均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用其中以四氮唑盐的显色反应最为常用,不但可用作层析法的显色剂,还可用于含量测定.判定方法:规定杂质峰数目炔诺孕酮(睾酮类孕激素)

示例曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇浓度20μg/ml20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收,A为0.57~0.60,在239nm与263nm处的吸收度比值为2.25~2.45水分、温度、O2与光线的影响示例曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂98结构特征:酚羟基C17–OHC17–乙炔基eg1:炔雌醇(六)IR法原料药结构特征:eg1:炔雌醇(六)IR法原料药991505cm-13505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动1505cm-13505cm-13300cm-1ν1590c100eg2:黄体酮△4-3-酮结构特征:C17-酮基eg2:黄体酮△4-3-酮结构特征:C17-酮基1011700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1102七、TLC法八、HPLC应用甾体激素类药物原料与制剂的鉴别甾体激素类药物原料与制剂的鉴别(如:醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏)方法对照品法对照品法结果判断要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同要求在含量测定项下记录的色谱图中,供试品峰的tR与对照品峰的tR一致七、TLC法八、HPLC应用甾体激素类药物原料与制剂的鉴别甾103第三节特殊杂质检查

杂质来源:原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。一、有关物质的检查

其他甾体:有些杂质与该甾体激素药物结构类似,也具有一定的药理作用而又互不相同,因此在甾体激素类药物的质量控制中,“其他甾体”的限度检查显得很重要。第三节特殊杂质检查杂质来源:原料、中间体、异构体、降解104检查方法:(具有一定分离能力)判定方法:规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色1、TLC法(自身对照法)eg:氢化可的松中其他甾体的检查供试液:本品+氯仿-甲醇(9:1)浓度:3.0mg/ml对照液:供试液(3.0mg/ml)+氯仿-甲醇(9:1)60μg/ml层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。判断:供试液如显杂质斑点,不得多于3个,其颜色与对照液的主斑点比较,不得更深。检查方法:(具有一定分离能力)判定方法:规定杂质斑点数目1052、HPLC法(自身对照法)≤图A中峰1面积的四分之三判定方法:规定杂质峰数目规定杂质峰面积2、HPLC法(自身对照法)≤图A中峰1面积的四分之三判定方106二、游离磷酸盐的检查方法:对照品比色法

杂质来源:地塞米松磷酸钠生产过程中,由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。740nm原理:供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝二、游离磷酸盐的检查方法:对照品比色法杂质来源:地塞米107在238nm处有最大吸收在238nm处有最大吸收200-760nm有特征吸收。异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度(0.人工合成代用品:非甾体化合物第四节含量测定能与重氮苯磺酸发生偶合反应,生成红色偶氮染料。均明显降低雄性作用,增加蛋白同化作用+2Cu2++4OH-层析:供试液对照液点样、展开、斑点检出。C11=O>C11-OHA环中有△4–3–酮基结构适用:本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯能与碱性酒石酸铜试液(斐林试液)、氨制AgNO3试液(多伦试液)、四氮唑盐反应呈色。判断:供试液如显杂质斑点,不得多于3个,其颜色与对照液的主斑点比较,不得更深。测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。(2)官能团的呈色反应口服被迅速破坏失效,只能肌注4位引入卤素或19位去甲基或将A环结构改造三、有机溶剂残留量的检查eg:地塞米松磷酸钠方法:GC色谱法杂质来源:地塞米松磷酸钠生产中,使用大量甲醇和丙酮。结果判断:不得出现甲醇峰,甲醇含量≤0.3%丙酮规定不得过≤5.0%在238nm处有最大吸收三、有机溶剂残留量的检查eg:地塞米108四、硒的检查氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定

杂质来源:地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激素类药物,在生产中使用二氧化硒(SeO2)脱氢工艺,药物可能引入杂质硒。

方法:药物

结果判断:供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度(0.005%~0.01%)

。378nm五、雌酮六、乙炔基四、硒的检查氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定杂质来源:地塞米松、109第四节含量测定

常用方法容量法比色法紫外分光光度法荧光法气相色谱法高效液相色谱四氮唑盐比色法异烟肼比色法铁-酚试剂比色法第四节含量测定常用方法容量法比色法紫外分光光度法荧110一、HPLC法USP、BP、JP均采用方法:RP-HPLC(内标法)测定对象:甾体激素类药物的原料和制剂。eg:黄体酮的含量测定

色谱条件:固定相ODS,检测波长254nm流动相甲醇-水(65:35)内标物己烯雌酚系统适用性试验:n>1000,R符合规定。

一、HPLC法USP、BP、JP均采用方法:RP-HPLC(111测定样品:黄体酮原料、注射液。

定量方法:内标法内标-1测定样品:黄体酮原料、注射液。

定量方法:内标法内标-1112二、UV-ViS分光光度法1、△4-3-酮240nm(±)2、苯环280nm(±)雌激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素(一)UV分光光度法缺点:专属性不强二、UV-ViS分光光度法1、△4-3-酮240nm(±113示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查(1)配制供试液,取10片分别进行测定

(2)测定:240nm

(3)计算

示例:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查114(二)比色法有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH-1、四氮唑盐比色法(1)原理:肾上腺皮质激素类C17-α-醇酮基强还原性。[H]氯化三苯四氮唑(TTC)三苯

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论