蛋白表达不同检测方式的比较和分析

蛋白表达不同检测方式的比较和分析免疫组化法（immunohistochemistry）原理：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）。特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究（主要是定位）。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。蛋白免疫印迹（WesternBlot）原理:蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。特点：先要进行SDS,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。ELISA检测原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。

3种蛋白检测水平的比较蛋白检测方式免疫组化法Westernblot法ELISA试剂盒法相同点原理：抗体-抗原结合反应不同点样品类型组织或细胞组织或细胞血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液分析方式定位、定性及定量的研究（主要是定位，定位敏感性远远高于Westernblot法）可以用于定性和半定量，定量较免疫组化法准确多用于定量分析，其灵敏度非常高观察结果免疫组化图（膜阳性、质阳性和核阳性）电泳图（着色的位置和着色深度）蛋白浓度优点特异性强、敏感性高、定位准确、形态与功能相结合分析容量大、敏感度高、特异性强灵敏、特异、简单、快速、稳定、易于自动化操作及节省实验经费应用范围⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位；⑶对某类肿瘤进行进步的病理分型；⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供治疗方案的选择。是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。⑴组织抗原的定性定量检测；⑵多肽分子的质里测定；⑶病毒的抗体（或抗原）检测；⑷疾病早期诊断是分泌性蛋白检测首选方法之一。⑴免疫酶染色各种细胞内成份的定位；⑵研究抗酶抗体的合成；⑶显现微量的免疫沉淀反应。⑷定量检测体液中抗原或抗体成份。【多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断】各组检测方法之间的差别及特点：以下是western和ELISA的区别:westernblotting可以看到特异性的条带，但是定量比较烦ELISA可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。WB只能半定量，但是可以检测细胞膜蛋白，这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白，也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而ELISA抗原抗体都可以检测。WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而ELISA无能为力。WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而ELISA不行。WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。ELISA—块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等缺点在ELISA上表现得要好得多。MMF9和CB:…厲■■■"■卞」《HMGB1、MMP-9和CEA在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义》中英文实例分析：一、免疫组化（免疫组化图一阳性表达率）1.3免疫组化法检测肺癌组织及正常肺组织中HMGB1和MWP-9的表达及临床意义材料和方锻组织标本选择W0-2012年在我院诊断的经T-术町除的L畀例＜男67例,女33例.鱗酗11例，腺刑刃例.大细胞餅3例，绥腺鴉4例*1 ][期悄例*川IVJtH5a例）非小细胞肺癌想啬石蜡組织标本用丁免疫組侶A检测仙佃「我中50例（特肌制"女w例，嶙彌沏例・|甌蜒M例，大细胞袒I例・鳞腺梶2例训时检测WMFy丽例拥倉对常爼织作为討酿加躺患占竹期劉!艮内科学•通过手术中切除肿海大小、謝内湫巴站转移情况以履内科査悴、脚部、颅睢CT.腹部超尹、廿打揭确宦临床分期.

I.3；2M用13.2-1非小！ffl船薛癌中仙卿的班达HMGB4MMlP-4|!W67初女1«4h2D522?43人出胞務31M期4ZsiHMGB4MMlP-4|!W67初女1«4h2D522?43人出胞務31M期4Zsim-hiU!542i⑨井疣爼駅和不帘蛆级的比软man在肺JSSfl捉中"主痊衷达于曲就中，细腿林中为少■农走.山刚開曲细也中"宵门创黑达呈朝性，阳性牢角时例標嘴正第细損，廿谗例袁広卒UHrt..恨祖免力:归.眾，^<0.05・石虢计学童叟.ftf也也C.用#讪即血住ftl舞itf^itfj左达”Vd畀为FMUI衣4JS组悅折衣肚.血屯:％HUCUJ在廉呷1卜,京'叶無绒的我达.②不冏嘉理关型无蛙#*理们时HOIAW!»和鸭痊的厳达刻性串恋打比⑦凰果炭现，庚占何兀険讦摆捋壽”©序尿幅用井刖伯岂桿HU；m我这抽虞的代较SS例I」h[Vf0中有柞佻HHCBI養迭凰阳性，阳tt^X151-0t.律側】-H组腮炜冇时的蛊姑昱愀雀，阳性审为即，1和再卄比戦PUQ.OE,扌.统计学总咒.说目]HHG3I壺达与卑卡临床分刪Mti匚相关*非小邹賄肺J®中剛PT的卷鈣我幻通过免疫粗忆检测前條肺癌爼钦型燥30例桶考Eflta^HHr-9的农达.给杲显示*同阿帥癌蛆媒中.有駅例我达毘闭th阳性牢为了雅，3Q例屋旁正常蛆纨有丁刮滾达呈阳禺阳性率为貉珈P<0.0&,育统计他九眇D、E、F.图孔为牝卩峠也胆癌粗故的表达，图怩齒卿A9越屈坦绘的表达'悝廿询帶1T常帥坦星的农迭.■*»»■'■-'■”. ■二］F:I!■*»»■'■-'■”. ■二］F:I!*ELb-、\4■'■P- 「F.・ ._;:、',■<ajr* j*总事+1：\ LF '1畑a也”鼻威•」片*『比*1 .n.<<1-；(• 屮FftUIH**J-J仁1瞅Hl»tfL"由尿15_11佛忧忸».Itp-Sfi-Hm-4fft^1*■.E：劇P"l<雲4丸年升H电lhd4lQFiVM'-^fiifR i"1-2lastern-blct廉测毎靳H肺癌组粗況«f旁正當脑诅瓢申MGfil1.211这朴帥剧绘横胖逡怖的非小鱼1INJ肺癌加首，年黔在和芯曲，馆19的hiJ['^.均为201K年卜3月吐苛喝丈学附属抚皑曲并料住屈泊#的煙常脚恥4术切赊轮粗劳2□投稼亦正常脑畑块「弧坯肿他型建I以上》.标本at-7orwft用.122QU刃阳配SJKtiffi沮奴以座吨務正常冕织通址梅！itg)ulotteSitHJKB1S白农达.帥瘠殂疾和嗨栄更常爼织卜馬刖備蛋向棗达为割为0.需土(1.!2.<1-21+0.72,射癌蔚AMKBl的址廿崔达明莖AJT配对止常胖ffl^t41.7,p<0L(H>Uftf2.；i*瑯乂屮3辭患苕的临冰他斌为：(I)'H.30甘，低甘化廉癌：仃同1N盼内沁咳坤巴翱税⑵*■騙扒儒那凋曲禾见特歙⑶點 S?fEncrn负说林mm酬措匹"黒啊雌射対.屮曲化型總，冋側他门洌匕绡转移.三、ELISA

第二部分非小细胞肺癌患者血清H腮餉和GEA的水平及两者的2.1材斡和方注相关分析2.1材斡和方注52i.U桶丰坍兴坤聲均率自jo址翌竝商左i.U桶丰坍兴坤聲均率自jo址翌竝商左atna曉的话側非小讯购卄將更占c胆瞩：A8^rU#?IM.犬细圍胖糅I悯,]E-WVi朋样W'悯，i-]l 年岳在灯疔壬盹声2问，辛钿酣痕爭，虫73恻》,mfl■■宮留翅fit殊阳剋节，克壮竹頤芯担超関H站检硏造.番RH内斟特.曲対冉科査距南軌懵射ICT*Varii皿FCktdn(viAJD'^iiuk)10VT3«.t7加亡IjrirmeEniSD)那遽7D.66粗币常.M划寺旗£痕卜強期昇.finmCLC.fl[!liiiFlT，tEUXB农斑俎声，怦打琳卽班丁术中牌迄杲瑚丈小.刑内淋巴结转性情况来理建塔碗叮期”喘电展延空亚”甘血细】”离£■■谍#于YOT?”ffl^fJMUlJIlMCBlACEA,T]*U*2手束帝撐的恵乩 «tOlffiiLlflIlHiEWCHAt32駅副舟对鹼苦兄有乱肢建戢右为*心.年龄在他憂至“虫上何「平龄龄疽岁.另皿営，女I*2.ZI菁■■卜删诫加癌唐脅血渣CM.EIKil朮半月整廣对議营比较flJiSGLC*^Ljl^»JS<rt^iflLZ2,l!MGBL*平的也就显;ii,N3CLC出我11播「肚取平审技高于盘廉对卅吉.1^.K±SJ® L.^tncEin^'nJ..PIGOh：I4SU£SirftjtHKBL水平刚*崗『起J®对應若.廿别旳J-UJ土flLE啊.无慢姓疾悄爭口试蛆护刘車实整知梢啊.无慢姓疾悄爭口试蛆护刘車实整知梢冋鱼「筮弭艸说书.耳研猊吳医院世用蚤员盘lit准.1-11试刑和论即佛林仪购冃高取华朱电于英;41監廿地崔宜眼公祗人曲岡hj.esaotraiui談珂】M刊点"CtAHLT3A（幕国腌D舍旳》U；啊曲+Hi嗚忌若(冲1話)maulSDji^i'niLniewiiSD,m^nLPCEAlt.3^226pgoiHMGBL2.01^0&SPBJ05nt/nl.2.0T+fli65ng/»L忡爼临•・Jt农JttgtiaMCEa.raGuj27.2片苯27.2片苯jfi”対勃HHM；*：峪1：低水爭fiftjp駅I.2.3不同的昨粗网血ItH細1和血木平为「泸生芋术対也购帼肌刃的蚩响，犯忙枕眞丁FlP1B-G为「泸生芋术対也购帼肌刃的蚩响，犯忙枕眞丁FlP1B-G术前.术方帥IDK3L和CEA水平*蜡果显示,圖5虫it血水平強.毎止L.4flFB/l»L}tfi.fl±1.5Tnjyni.jWJdfff OS},XJ^lTlSHlKAIJjC^(J.12朮肠FT”)m.co>也£Dir曹'idI.nfi^lrt*?!}RLt£U罔DJ密ikJ.fCEA停06-W1J*MMHMCiHIZ6WtD.7H2.12*0.54：P^O.OSiffJ鉴睾持眉■寿曲・HKUl未甲:tM54)K^AiC3LU3r3.?3nir/iij!B#t^&.OSd.』，黑4RffJ51別荷膿餐iiA扯Ifl瘵处击的皿常mI和r同朮半粋科井析”皓嘏雄罠”小冃的韦裁霑IMiflCEAXjH3^4J'l.5tK世琶Hl祸CEX曲T•版刊患患苦・S^SI^；iS.2±^45nff/nJ..&.6±L.62n^WL懊机0»*皿iflIMG®】水平在F同的歌理美塑盂统计手莖別h臨St!血緊堪炼着分别为；3-IS±C.W<J..3.23±a^m/iiL(DO.05).腺搭[el06)犠琮(n=7l>nK3&srS.ll；-nr^fmLp:CEA19.U3.455.6L1.«2P<0.0iHMGBJlGfcO.72J.2J±O.?8F却血雄示•!、姑册理姿巾丁沖:FA.IMRIf-*n平同 W0H1申1CEA乖平51帖1蜩1flJUiAX平书：能时iftbK51帖1蜩1flJUiAX平书：能时iftbK甘VSPifflAJS町术叫，11!-师底魁尿、I-[1HfiJSSJi直瞬17LA木f廿划为：JF.T3tlL2nK/mLt.&±f.^tk^L.",115.irEJVJfiA^s1-1】Nfl.0需血胡FMI水平甘甥出3.ijtlhtanE^2.ft5Tfyt/iJ.[*电啦*见：SGtlL-JVMl«rK7|nKsn^SD^/mLIIIJfl册N)mmjiiSO,血mHPICEAi?.7L*-i.ii3L43hm：0aiI.JJitkSS2的k打An^fCfA.IBKRJ4C41Z!.5ft*Hat«€FA水平胯接性労祈对血摘；啊1^KEfizk平非KH-KSUnft孟分折，射觀5t^.t-D.^l.FD.SM.Elpone.0130839.pd

fCurr*sLn^i^riv£7X1-'JidMHi?-3《ImplicationofLeptin-SignalingProteinsandEpstein-BarrVirusinGastricCarcinomas》一、免疫组化(免疫组化图一阳性表达率)EthicsStaieme^tAUhumanIisiuespecimenswerudjlaijicddunn^diagib^'licaidth?rapciiEicsurgcrj".Ihepar-likLpjnl^didnoEpraviilcthewritlcnon^cnltopariicipmlcLnlhe-presentstudy.Th.crdrespec-W[52■•fy "<■■■■■<Eiwia^Mdh KUfM£^-md说吟ibH屮li\c5ludyva&peHbrniifdihe^toredpirdtlnblockscant2ininjEi^utsampleaflErtheand.dlnfihc伯mplc%wert誦“為nyitii屈lietort-lh^^lLidM-Thistfeim诃祖”liv?Kludy Apprdk/cdbpth电EiiKCiluH^nalR赴vum1Boardt>f5etKalNali^nnlLTiHveFSiEyBrtra^meIlofpilji!un<L*rthe-ctindilicnofikeincn^'mimEinn(IMBMn.26209d13/022-MEthicsStaieme^tAUhumanIisiuespecimenswerudjlaijicddunn^diagib^'licaidth?rapciiEicsurgcrj".Ihepar-likLpjnl^didnoEpraviilcthewritlcnon^cnltopariicipmlcLnlhe-presentstudy.Th.crdrespec-W[52■•fy "<■■■■■<Eiwia^Mdh 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