疟原虫镜检技术.(2015)课件

江苏省寄生虫病防治研究所顾亚萍疟原虫镜检技术疟原虫的基本形态特征血片制作与染色疟原虫计数显微镜的维护与保养

疟疾是由蚊子传播的寄生虫病，它的病原体是疟原虫。寄生于人体的疟原虫有4种1.核

呈鲜红色，呈圆形或椭圆形。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。疟原虫基本结构2.细胞浆

蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。疟原虫基本结构胞浆疟原虫基本结构不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异，疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。间日疟原虫－－呈短棒状，黄褐色；恶性疟原虫－－呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫－－呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫－－与间日疟原虫相似。3.疟色素滋养体期：早期、晚期滋养体裂殖体期：未成熟、成熟裂殖体配子体期：雌、雄配子体疟原虫在RBC内各期形态各不相同疟原虫在红细胞内按照生长发育繁殖的阶段不同疟原虫基本结构红细胞通常涨大薛氏点明显环状体较粗大滋养体胞浆有阿米巴样伪足血片中可见各期的原虫形态成熟裂殖体约含12-24个裂殖子，排列不规则

间日疟（P.vivax）

鉴定要点卵形疟（P.ovale）

诊断要点红细胞略涨大或正常，卵圆形或边缘呈锯齿状环状体中等大小，核较大，胞浆粗厚薛氏点出现较早粗大，量多成熟裂殖体约含6-12个裂殖子

5.常可查见各阶段的疟原虫

恶性疟原虫厚血膜RingsGametocytes间日疟原虫

厚血膜环状体配子体滋养体裂殖体

由于在血膜制备过程中红细胞溶解，因而其原形态消失，且染液和玻片上可能存在杂质等，要根据疟原虫的三个基本要素仔细加以鉴别。（1)疑似疟色素（2）疑似疟原虫核（3）疑似疟原虫胞浆疟原虫与其他异物的鉴别（4）血液成份与分析（5）杂质---类似疟原虫的物质（6）形态失常

疟原虫成份丢失。成份增加。形态改变。药物影响。血片的制作与染色

每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。血片制作取血液4-5μl

血滴置于载片的中央偏右1/3，由里向外划圈涂成直径为0.8-1厘米厚薄均匀、圆形厚血膜.血片制作厚血膜的涂制：薄血膜的涂制：取血液1-1.5μl血滴置于载玻片的中央，将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，两玻片保持20-30°角，推成舌状薄血膜，长约2-2.5CM。血片制作血片染色两种染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法常用吉氏染色法

吉氏染液：染色方法薄血膜经甲醇固定干燥后，用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液或蒸馏水将吉氏原液稀释，原液与缓冲液为1:20。混匀染色20-30分钟，晾干镜检。厚血膜溶血染色

放置多时未染色的血片（2天以上，薄片已用甲醇固定），在染色之前，须在厚血膜上用清水进行溶血，待血膜全部溶解后倒掉，用吉氏染液染色,清水漂洗干净,晾干。染色用水和冲洗用水pH7.0～pH7.2缓冲蒸馏水效果最佳。先制备好两种贮备液贮备液I1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液

Na2HPO49.5g

蒸馏水1000ml贮备液Ⅱ1/15M磷酸二氢钾（KH2PO4）溶液

KH2PO49.07g

蒸馏水1000ml血片制作注意事项（1）在制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址（2）载玻片必须清洁无油污，理想的薄血膜是一层血细胞均匀分布不重叠和空泡，血膜末端呈舌状。（3）厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜。（4）制成的血片在未干前不能倾斜放置，待其自然干燥，不要加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果．血片制作注意事项（1）染料溶剂的质量（2）染液的新旧（3）染液稀释后使用时间原液必须临用时稀释，随配随用。（4）染液的稀释浓度（5）染色时间

(6)染色稀释用水:Ph7.0-7.2

染色质量影响因素（7）血膜在制备后应尽量能在当天染色，一般夏天不超过48小时，冬天也不能超过72小时。新制血片染色时厚血膜无需溶血放置多时的血片，在染色之前先用清水滴加在厚血膜上进行溶血.疟原虫密度计算疟原虫密度计算

计算疟原虫密度的三种方法：●白细胞原虫密度计数法(厚血膜WHO)●半定量计数法(厚血膜)●红细胞感染密度计算法(薄血膜)白细胞原虫密度计数法镜检厚血膜，按视野顺序，记录200个白细胞中的疟原虫数，如果原虫密度较低，可增加白细胞，计数500-1000个。密度单位:原虫数/μl计算公式：疟原虫数÷计数的白细胞数×患者每微升血白细胞数=疟原虫数/μl血。如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8000个白细胞计数(国际标准)。疟原虫密度计算厚血膜的疟原虫计数从血膜的左上角开始，横向。计数1个视野后，每次间隔5个视野,再计数。厚血膜疟原虫密度计算显微镜的使用与维护1.学习镜检疟原虫之前，必须熟悉显微镜的基本构造，使用方法和维修与保养。防止油镜进灰、进油和发霉。2.疟原虫的厚薄血片都必须在油镜下观察，显微镜用光要充足。包括反光镜、光圈、聚光器要达到油镜使用的最佳限度。显微镜检查注意事项3.玻片未加油时观察标本应按：低倍→高倍→油镜程序。如在加油区内重找目标应按照：低倍→油镜程序，不要经高倍镜，以免油沾污镜头。注意保护镜头，切不可压碎标本被片，损坏镜头。显微镜检查注意事项4.视野模糊不清

显微镜问题：镜头镜油用量、沾污灰尘或含有气泡；油镜头破损、进油或有霉斑、灰尘；显微镜用光调整不足。血片问题：载玻片不洁、毛玻璃样或有霉斑；血片染色过度或血膜过厚。显微镜检查注意事项显微镜检查注意事项5.应先学会看薄血膜，掌握薄血膜上各期的形态特征后，再学看厚血膜。对熟练的镜检员一般以镜