医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-

医学微生物学实验

综合性实验三空气的细菌学检查结果分析手指皮肤的细菌学检查结果分析空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟)CFU：colonyformingunitWHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围Ⅰ级区＜10器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液实验室Ⅱ级区＜200无菌室、手术室、供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房Ⅲ级区200～500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围≤1000≤103～5星级宾馆、饭店≤1500≤202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店≤2500≤30普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱≤4000≤40音乐厅、影剧院、录像厅（室）、游艺厅、舞厅、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）≤7000≤75展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室液体或固体标本菌落总数测定可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。倾注46℃营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时。选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。132

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4手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

2人1块平板上:甲、丙→常规洗手下:乙、丁→标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+第2格为洗手后常规(甲、丙)洗手方法：?标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：？第4格空白对照：-医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）菌落特征观察P11细菌纯培养P10脓汁和粪便标本检验（录像）油镜使用方法（讲解）细菌在固体培养基中的生长现象菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）。菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落特征P11大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直径约1mm以下)。形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。细菌菌的的溶溶血血现现象象根据据细细菌菌对对血血平平板板中中红红细细胞胞的的溶溶解解能能力力可可分分为为以以下下三三种种溶溶血血类类型型α（（甲甲型型））溶溶血血:产生生溶溶血血素素，，不不完完全全性性溶溶血血，，在在血血平平板板上上菌菌落落周周围围有有1～～2mm半半透透明明的的草草绿绿色色溶溶血血环环。。β（（乙乙型型））溶溶血血:呈完完全全性性溶溶血血，，在在血血平平板上菌菌落落周周围围有有2～～4mm宽宽，，界界限限分分明明，，无无色色透透明明的的溶溶血血环环。。γ（（丙丙型型））溶溶血血:不产产生生溶溶血血素素，，在在血血平平板上的的菌菌落落周周围围无无溶溶血血环环。。细菌菌的的纯纯培培养养挑选选单单菌菌落落:脓汁汁标标本本在在普普通通平平板板上上有有黄黄色色、、白白色色两两种种菌菌落落，，菌菌落落的的色色素素是是脂脂溶溶性性的的，，是是细细菌菌本本身身的的颜颜色色。。菌菌落落直直径径2mm左左右右、、圆圆形形、、隆隆起起、、表表面面光光滑滑、、湿湿润润、、边边缘缘整整齐齐、、不不透透明明。。粪便便标标本本在在伊伊红红美美蓝蓝平平板板上上，，有有紫紫黑黑色色、、淡淡粉粉红红色色两两种种菌菌落落，，菌菌落落颜颜色色是是水水溶溶性性的的，，不不是是细细菌菌本本身身的的颜颜色色，，颜颜色色的的产产生生是是因因为为大大肠肠埃埃希希菌菌分分解解乳乳糖糖产产酸酸，，酸酸使使伊伊红红与与美美蓝蓝结结合合，，形形成成紫紫黑黑色色具具有有金金属属光光泽泽、、大大而而隆隆起起、、不不透透明明的的菌菌落落；；菌菌落落直直径径2～3mm。。致致病病菌菌不不分分解解乳乳糖糖，，菌菌落落呈呈伊伊红红的的颜颜色色，，很很淡淡的的粉粉红红色色，，半半透透明明，，直直径径1～～2mm。※选选择择平平板板上上相相同同的的菌菌落落数数多多的的、、典典型型的的、、容容易易挑挑取取的的单单菌菌落落，，进进行行接接种种。。37℃培养养24小时时37℃培养养24小时时紫黑色通常描述的的菌落直径径和颜色是是特指培养养18～24小时，，菌落分布布比较稀少少的区域、、典型的菌菌落。若培养物放放置时间过过长，或者者平板上某某个部位细细菌比较多多、菌落比比较密集，，大肠杆菌菌菌落颜色色可能会发发生改变。。因为大肠肠杆菌利用用完乳糖以以后，就要要利用蛋白白质，蛋白白质分解大大多产生碱碱性物质，，中和了乳乳糖分解时时产生的酸酸。大肠杆杆菌菌落可可能会由原原来的紫黑黑色变成粉粉红色，和和致病菌颜颜色一样。。不要在菌落落密集的区区域挑选菌菌落，它可可能是菌落落形成单位位（CFU），不是是单菌落，很容易选选错。37℃培养养36小时由紫黑色变成粉红色色斜面接种法法P10（1组4支支）甲→普通平平板→黄色菌落→1支支斜面乙→普通平平板→白色菌落→1支支斜面丙→伊红美美蓝→紫黑菌落→1支支斜面丁→伊红美美蓝→粉红菌落→1支支斜面★斜面标记记：组号、、黄色、白白色、紫黑黑、粉红。。★在平皿底部部玻璃上，，画个大圈圈选菌落，，同组同学学认可，才才能挑取。。★培养时间不不得超过18小时。。斜面接种法法P10甲→黄色,乙→白色色。丙→紫黑,丁→粉红红。标记：组号号，颜色安全警告接种环接种种斜面一次次，可产生生几十个微微生物气溶溶胶颗粒。。气溶胶粒径径＞100um沉降降很快,＜＜50um在0.4s内扩散散开,＜5um通过过呼吸道直直接到达肺肺泡。Pike博博士对实验验室感染统统计分析结结果发现，，不明原因因的感染高高达82%，大多数数是气溶胶胶在空气中中扩散引起起的。实验时应坐坐着，在酒精灯半半径20厘厘米范围内内操作，保持安静、、有序，尽尽量少说话话、少走动动，以免感染病病原菌。奥林巴斯CX21型生物物显微镜（实验柜内，，每人一台））注意：只能能横放，不不得竖放。。奥林巴斯CX21型生物物显微镜使用须知显微镜是精精密光学仪仪器，请不不要让其受受到撞击，，请小心操操作。在搬运显微微镜时，请请按右图所所示，以双双手抓住镜镜臂孔的两两侧，小心心搬运。★如果拿住载载物台①和和镜筒②等等部位搬运运的话，有有可能会造造成损坏。。显微镜各部部件名称开关与调整整光强开或关之前前，必须将将亮度调整整旋钮②按按箭头相反方向转动到到最小位置，以免损坏坏灯泡。电源开关①①拨到∣侧侧为开，拨拨到○侧为为关闭。按箭头方向向转动亮度度调整旋钮钮②变亮，，相反方向向转动则变变暗。放置标本按箭头方向向转动粗调调旋钮②降降下载物台台。按箭头方向向拉开载物物台标本夹夹③，自自前向后将将标本片放放入平台，，标本夹③③轻轻放放回原位。。转动上侧垂垂直移动杆杆④和下侧侧水平移动动杆⑤，移移动标本至至光路中间间。载物台位置置刻度载物台上的的刻度方便便确定标本本位置，标标本移动后后可以快速速回到原位位。水平刻度的的标识位置置以机械载载物台的①①位置来读读取。垂直刻度的的标识线以以②的位置置来读取。。聚焦从显微镜的的侧面观察察，按箭头头方向转动动粗调旋钮钮①，使物物镜③尽可可能接近标本。一边边看目镜，，一边慢慢慢逆箭头方向转转动粗调旋旋钮①，使使载物台台下降。看到标本以以后，用微微调旋钮②②来正确对对焦。★10倍物镜镜的工作距离（WD，从从物镜到标标本的距距离）为10.5mm。★油镜的WD为0.13mm。。调整瞳距调整瞳距是是调整双目目间的距离离，使两眼眼同时看到到一个显微微镜像，能能防止观察察时的疲劳劳。方法：一边边看目镜，，一边移动动双目镜筒筒，让左右右的视野一一致。标识●的位位置表示瞳瞳距。请记记住自己的的瞳距值，，以便下次次观察时调调整。调整屈光度度数调整观察者者左右视力力。以右眼看右右侧的目镜镜，旋转粗微调旋转盘，对对好焦距。。以左眼看左左侧的目镜镜，旋转屈光度调整环①，，对好焦距距。调整聚光镜镜位置和孔孔径光阑用聚光镜上上下移动旋旋钮①，将将聚光镜转转到最上面面。在孔径光阑阑环②上刻刻有物镜倍倍率（10倍，100倍等）），观察时时将与使用用物镜相对对应的倍率率放到正面面。转换物镜旋转物镜转转盘①，将将希望使用用的物镜（（10倍、、100倍倍）转到标标本的上方方。100倍浸浸油物镜使使用方法油镜放入光光路之前，，一定要在在标本的观观察部位上上加一滴浸浸油。旋转物镜转转盘，使油油镜进入光光路，用微微调旋钮对对好焦距。。如果浸油内内有气泡，，会影响观观察，可稍稍微旋转物物镜转盘，，使油镜来来回通过1～2次浸油油，排除油油内气泡。。显微镜油镜镜的使用P1310×物镜镜→标本位位置→滴加加香柏油→→100××油镜→浸浸泡油中,几乎与标标本接触（（工作距离离0.13mm）→→细调节调调焦，观察察物像→记记录结果→→关闭电源源。油镜处理：：擦镜纸拭拭去香柏油油→擦镜镜纸沾少许许乙醇和乙乙醚（7:3）混合合液擦拭→→擦镜纸擦擦拭油镜。。显微镜罩上上防尘罩→→横放在实验柜内内。★(顺德校区区）实验台台两侧的电电源插座，，只能插入入一个插头头，请选择择离你最近近的电源插插座。★（校本部））实验台中中间，三个个位的插座座，中间那那位插孔没没有电，不不能使用，，只能用两两侧的插座座。细菌的显微微镜检查法法显微镜：光光学显微镜镜目镜镜：：10倍倍物镜镜：：油油镜镜头头（（90或或100倍倍））放大大倍倍数数：：10××90或或100＝＝900或或1000镜油油：：香香柏柏油油或或石石蜡蜡油油香柏柏油油折折射射率率（（n＝＝1.515）），，玻玻片片折折射射率率（（n＝＝1.52）），，石石蜡蜡油油（（n＝＝1.46）），，空空气气（（n＝＝1.00））。。★油镜使使用用完完毕毕必必须须擦擦拭拭油镜头头。。油透镜镜光线线载玻玻片片思考考题题在微微生生物物学学实实验验中中,怎怎样样才才能能避避免免杂杂菌菌的的污污染染?空气气的的卫卫生生标标准准规规定定如如何何?你的的实实验验结结果果说说明明了了什什么么问问题题?怎样样从从医医务务人人员员手手指指上上分分离离和和鉴鉴定定金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌?菌落落特特征征主主要要描描述述哪哪几几方方面面问问题题？？任任何何挑挑选选单单菌菌落落？？医学学微微生生物物学学实实验验综综合合性性实实验验三三、、一一空气气、、手手指指皮皮肤肤的的细细菌菌学学检检查查结结果果分分析析脓汁汁和和粪粪便便标标本本中中病病原原菌菌的的检检测测菌落落特特