二级生物安全实验室操作规范课件

二级生物安全实验室操作规范

二级生物安全实验室操作规范

1实验室生物安全的概念是指在从事病原微生物实验活动中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害,对环境的污染和对公众的伤害,为了保证试验研究的科学性还要保护试验因子免受污染.其措施包括强化工作和管理人员生物安全意识,建立规范化、法制化和日常化的管理体系，加强人才的建设培训，配备必要的物理、生物防护设施、设备，掌握规范和微生物操作技术和方法等等。实验室生物安全的概念是指在从事病原微生物实验活动中避免病原微2切记：仅有先进的设施、设备和装备还不足以保证实验室的生物安全，作为实验室活动主体的操作者必须履行良好的行为规范才能最大限度保证实验室的生物安全。良好的生物安全实验室技术规范要满足保护操作者和实验环境的要求，必要时还要考虑对操作对象的保护。切记：仅有先进的设施、设备和装备还不足以保证实验室的生物安全3对于良好的实验室操作技术规范每个操作者都必须时刻铭记在心。对于每一个新进入实验室的工作人员都应该给予严格的训练，以使其掌握正确的要领，避免养成不良的习惯，从而保证以正确的意识、操作技术和工作习惯展开工作。养成正确的生物安全意识非常重要，它可以使操作者最大限度的保护自己，避免失误和事故的发生，哪怕即使发生意外，也会进行妥善的处理。对于良好的实验室操作技术规范每个操作者都必须时刻铭记在心。4从事实验活动都应遵循下列基本原则：不管是谁，从事实验活动都应遵循下列基本原则：①所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；②在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物和其他危险物质以及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件。对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施；从事实验活动都应遵循下列基本原则：不管是谁，从事实验活动都应5③熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，进行正确的操作和使用，对于各种可能的危害应非常熟悉；④应掌握各种感染性物质和其他危险物质操作的一般准则和技术要点。③熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、6实验室的生物安全技术规范，包括但不仅限于实验室运行的基本规范、仪器设备的使用规范、针对感染性材料、危险化学品、放射性核素等的操作规范以及个人防护用品的使用规范等。

实验室的生物安全技术规范，包括但不仅限于实验室运行的基本规范7一、生物安全实验室运行的基本规范这些规范不能代替各实验室的规章制度、程序文件和标准操作程序。各个实验室应遵照国家有关法律、法令、标准和规定，结合实际情况来制定相应的管理文件和标准操作程序，确保实验室生物安全符合国家的有关要求。一、生物安全实验室运行的基本规范这些规范不能代替各实验室的规8一）BSL-2实验室人员控制规范实验室的进入实验室负责人应根据要求对进入实验室的人员加以控制。未经批准或允许，任何人不得擅自进入实验室。严禁儿童进入实验室工作区域。不允许可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员进入实验室或感染动物房。一）BSL-2实验室人员控制规范实验室的进入9BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人员姓名、电话以及进入实验室的特殊要求。实验室的门应保持关闭状态。与实验工作无关的动物不得带入实验室。BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通10二）工作人员的防护规范在实验室工作时，必须穿戴合适的工作服或防护服。工作人员可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物以及其他有害物质的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。二）工作人员的防护规范在实验室工作时，必须穿戴合适的工作服或11在处理完感染性实验材料和动物以及其他有害物质后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩或其他防护设备。在处理完感染性实验材料和动物以及其他有害物质后，以及在离开实12严禁穿着实验防护服离开实验室工作区域。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理角膜接触镜。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。严禁穿着实验防护服离开实验室工作区域。13三）有关操作的指导原则严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于口内。严禁舔标签。所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。三）有关操作的指导原则严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于14污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险评估结果准备专门的污水处理系统。只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室。污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物15四）实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危险性的材料溢出应立即清除污染。所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。四）实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实16感染性材料的包装和运输应遵循国家和/或国际的相关规定。如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。感染性材料的包装和运输应遵循国家和/或国际的相关规定。17五）生物安全管理的指导原则实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或/和操作手册。实验室应当能提供常规的实验室安全培训，并建立培训制度。五）生物安全管理的指导原则实验室负责人负责制订和采用生物安全18实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作手程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害19应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、健康监测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的生物因子相关的免疫接种或检测。应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。20二、实验室仪器设备的使用规范仪器设备的不正确使用往往会造成有害物质的泄漏、个人伤害甚至于发生实验室感染，因此规范实验室仪器的使用是保证实验室生物安全的关键环节之一。二、实验室仪器设备的使用规范仪器设备的不正确使用往往会造成有21设备使用和操作规程

使用程序维护程序检定程序校准程序报废程序设备使用和操作规程221、生物安全柜的使用

1、生物安全柜的使用

23一、操作程序一、操作程序24一）II级生物安全柜内的准备工作

在开始工作之前，准备一张特别的活动所需的材料检查清单，在生物安全柜内的放置必要的材料。因为安全柜的气幕防护屏障是很脆弱的，做好充分的准备是为了在正式工作时减少手臂穿越气幕的运动次数。操作者手臂横向快速地进出安全柜会干扰气幕，并损害安全柜所提供的局部防护屏障。手臂垂直于安全柜的操作口，进出时缓慢的移动，将减少这种危险。房间其他人员的活动（例如，迅速运动，开、关房间门等）也同样可以干扰安全柜的空气保护屏障。一）II级生物安全柜内的准备工作在开始工作之前，准备一张特25在开始工作之前，操作者应该调整凳子高度，使自己的脸在前操作口之上。在手臂放进安全柜内大约一分钟之后，才能进行实验操作。这样可以使安全柜稳定，并且能让气流“清扫”掉手和臂表面的微生物污染物。当操作者的胳膊横放在前面的格栅上的时候，房间空气可能直接流动到安全柜的工作区域，而不是通过前面的格栅进风。轻微地提高胳膊会缓和这个问题。前面的格栅绝对不能让研究记录、废弃的塑料包装和吸液装置等阻挡。所有的操作应该在距离前面的格栅4英寸里面的工作面上进行。

在开始工作之前，操作者应该调整凳子高度，使自己的脸在前操作口26二）工作前的净化在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-5分钟使安全柜内的空气进行净化。安全柜的工作台面、内壁（不包括送风滤器扩散板）和观察窗的内表面用消毒剂擦拭。再用无菌蒸馏水进行擦拭以清除残余的消毒剂。

放到安全柜的容器和材料的表面应该以70%的乙醇擦拭，以减少将环境的杂菌带到安全柜内。定期的对孵箱和冰箱进行消毒二）工作前的净化在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-527三）生物安全柜内部材料的放置在安全柜的工作台面上可以放一块塑料衬底的能吸水的毛巾。所有的材料应该放在离安全柜前面的格栅和后面工作台面的边缘尽可能远的位置。容易产生气溶胶的设备（例如，旋转搅拌器，台式离心机）应该靠近安全柜的后部放置。操作时的动作应该从工作台面的清洁区到污染区。三）生物安全柜内部材料的放置在安全柜的工作台面上可以放一块塑28二级生物安全实验室操作规范课件29安全柜内材料的放置洁净培养物（左边）可以进行接种（中心）；用过的污染吸管放在浅的平底盘里，而其它污染的材料可以放在生物危害包（右边）中。这安排对于习惯于左手操作的人要颠倒过来。

洁净污染安全柜内材料的放置洁净培养物（左边）可以进行接种（中心）；用30四）II级生物安全柜内的操作

在生物安全柜内所进行的许多普通过程可能产生喷溅或气溶胶。应该始终采用良好的微生物学技术，减少喷溅和气溶胶产生。II级生物安全柜的设计可以使水平方向喷出的孢子在14英寸的传播距离以内被安全柜向下流动的气流所俘获。因此，保持干净的材料离开产生气溶胶的活动至少1英尺以外将会减少交叉污染的可能性。四）II级生物安全柜内的操作在生物安全柜内所进行的许多普通31二级生物安全实验室操作规范课件32二级生物安全实验室操作规范课件33五）消毒

表面消毒

工作完成时，所有的容器和设备应该进行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作结束时，应该对安全柜进行最后的表面消毒，包括工作台面、安全柜的边壁、后壁和观察窗玻璃内部的擦拭。如果必要，安全柜也应该进行放射性检测并进行必要的消毒。作为安全的微生物学操作的最后步骤，操作者应该摘下手套、脱下工作服并且洗手。

五）消毒表面消毒34二级生物安全实验室操作规范课件35六）发生少量的喷洒时的消毒在生物安全柜内发生少量的喷洒时，应该用污染清除吸收纸巾立即进行处理，并将使用过的纸巾放到这个生物危害包里。对安全柜内的所有物品和安全柜内部，用浸满消毒液的毛巾立即进行擦洗。

六）发生少量的喷洒时的消毒在生物安全柜内发生少量的喷洒时，应36七）发生大量的溢出当发生大量的溢出时，液体会通过前面或后部的格栅流到下面去，这时要求更广泛的消毒。安全柜内的所有的物品应该进行表面消毒并拿出安全柜。应该使消毒液维持20-30分钟的适当接触时间如果溢出的液体含有放射性材料，可采取类似的程序。并应该与辐射安全人员联系，寻求特殊的指导。七）发生大量的溢出当发生大量的溢出时，液体会通过前面或后部的37八）气体消毒在更换HEPA过滤器或进行内部维修之前，要对生物安全柜必须进行消毒。八）气体消毒在更换HEPA过滤器或进行内部维修之前，要对生物38九、生物安全柜的日常维护1.定期清洁操作台面和前窗玻璃2.保持实验室内空气质量,延长高效过滤器的使用寿命3.定期检测紫外灯的照射强度,及时更换灯管4.长期不用应定期进行维护性运行高效过滤器应定期检测,及时更换.5.做好使用和维护记录.九、生物安全柜的日常维护1.定期清洁操作台面和前窗玻璃39五、感染性物质的操作与防护规范一）、实验室内检测样本的安全操作在实验室内，进行感染性物质的操作，包括其样本采集、内部运输、接收和开启的方法不正确，都会增加造成相关人员发生实验室感染的危险性。因此，进行感染性物质的操作应注意以下问题：五、感染性物质的操作与防护规范一）、实验室内检测样本的安全401、包装容器用于装盛感染性物质的容器一般不建议使用玻璃制品，为了保证安全，最好采用塑料制品（根据实际需要而定）。样本容器应当坚固，不易破碎，带螺旋盖，盖好后不应有液体渗漏。所有的标本都应存放在容器内。容器应贴上标签以利于识别，标签上应有样品名称、采集日期、编号等必要的信息。样品的有关表格和/或说明不要绑在容器外面，而应单独放在防水的袋子里，以防止发生污染而影响使用。1、包装容器用于装盛感染性物质的容器一般不建议使用玻璃制品，412、标本的接收大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域进行。对于病原已知的按国家规定可在BSL－2操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低应在一个专用区域或房间接受，并在生物安全柜内打开外包装，操作人员应穿防水的防护服，戴生物安全专用口罩和眼罩、手套。2、标本的接收大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域42样本接受由收样员按照规定程序收样，并做好收样登记，与送样人员做好交接工作，最后双方签字确认。样本接受由收样员按照规定程序收样，并做好收样登记，与送样人员433、实验室内运输为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全，在实验室内运输感染性物质时，应使用金属的或塑料材质的第二层容器（如盒子）加以包裹，在第二层容器中应该有标本容器的支架，将标本容器固定在支架上，以使其保持直立。第二层容器应耐高压或者能抵抗化学消毒剂的腐蚀，以便定期清除污染。封口处最好有一个垫圈，以防止发生渗漏。3、实验室内运输为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全，44按国家规定需要在BSL-3或以上级实验室操作的病原微生物或标本，应按国家规定的防护等级，在相应级别的实验室的安全柜内打开，并采取相应的防护措施。为保证安全，不应在普通的BSL-1实验室接受具有感染性的检测样本。按国家规定需要在BSL-3或以上级实验室操作的病原微生物或标453、标本包装的打开接收并打开样本包装的人员应受过专业防护培训（尤其是处理破裂的或渗漏容器）并应知道所操作标本的潜在的健康危害，操作时要采取合适的防护措施。所有标本应该在生物安全柜里打开包装，同时备有消毒剂以便随时处理可能出现的标本泄露。3、标本包装的打开接收并打开样本包装的人员应受过专业防护培训46打开包装前应仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检报告与内容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破损等，要登记详细的报告单并记录处置方法。接收标本应由2人进行。打开包装前应仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检47避免感染性物质扩散的要领为避免接种物从接种环上脱落，微生物接种环直径应为2～3mm并且完全闭合，柄的长度不应超过6cm以最大限度地减少抖动。应该使用密闭的微型电加热灭菌灯消毒接种环，以免在开放式的本生灯火焰上灭菌时感染性物质溅落。最好使用一次性的、无需灭菌的接种环。避免感染性物质扩散的要领为避免接种物从接种环上脱落，微生物接48小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。要高压灭菌和/或丢弃的废弃标本及培养物应放在防渗漏的容器里，如使用耐高压的医疗废物专用袋。放入废弃物容器前，标本的顶部应标明是安全的（如使用高压标签）。应对实验室进行定期的终末消毒。小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。49避免吸入或接触感染性物质的规范在微生物实验操作中释放的较大颗粒和小液滴（直径大于5um）会很快落在操作台表面以及操作者的手上，为了避免污染，操作者应戴一次性手套。实验人员做实验时要避免触摸嘴、眼和面部。避免吸入或接触感染性物质的规范在微生物实验操作中释放的较大颗50严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮料。实验室内不许咬笔、嚼口香糖。实验室内不许化妆和装卸角膜接触镜。在任何可能导致潜在的传染性物质溅出的操作过程中，应该保护好面部、眼睛和嘴。严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮料。51避免传染性物质接种的规范要尽力避免由破裂的或由缺口的玻璃器皿引起的感染性物质的意外感染。尽量以塑料器皿和吸管代替玻璃器皿和吸管。锐器，如皮下接种针（针头）、玻璃吸管和碎玻璃可导致实验人员感染，因此要小心操作。避免传染性物质接种的规范要尽力避免由破裂的或由缺口的玻璃器皿52为减少注射器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可以用简单的工具开启瓶塞，这样就可以用吸管代替注射器和针头）。必须使用注射器和针头时，要采用锐器保护装置。针头永远不要重新盖帽，若需对接不要直接用手对接注射器和针头，用过的一次性物品要放进专用的耐针刺的有盖容器中。为减少注射器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可53对玻璃和“锐器”的使用规范尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能使用实验室级玻璃（硼硅酸盐），而且任何碎裂或有裂纹的器皿都应丢弃。皮下注射针不应用做吸管。对玻璃和“锐器”的使用规范尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能54二级生物安全实验室的安全防护二级生物安全实验室操作规范课件55病原微生物实验室的生物危险气溶胶(aerosol)：固体或＼和液体微粒稳定地悬浮于气体介质中形成的分散体系，粒径一般为0.001~100μm。微生物气溶胶(microbialaerosol)：微粒中含有微生物。感染性气溶胶(infectiousaerosol)：微粒中含有致病微生物。病原微生物实验室的生物危险气溶胶(aer56气溶胶粒子的大小不同，经呼吸道到达体内的深度和归宿不同

粒径>10μm，一般被阻留在鼻腔内；5~10μm，可到达支气管；<5μm，可进入细支气管和肺泡。气溶胶粒子越小，进入的部位就越深：<1μm的在肺泡内沉积率最高；<0.4μm的粒子能较自由地进出肺泡并可随呼气排出体外，沉积较少。气溶胶粒子的大小不同，经呼吸道到达体内的深度和归宿不同

粒径57生物安全防护应遵循的三个原则：配备安全防护设备。使用个体防护装置和措施（一级防护）对实验室的特殊设计和建设要求（二级防护）严格的管理制度、标准化操作程序和规程。生物安全防护应遵循的三个原则：配备安全防护设备。使用个体防护58生物安全的三项技术措施：样品隔离技术定向流技术消毒灭菌技术（物理、化学）生物安全的三项技术措施：样品隔离技术59二级生物安全实验室防护的基本要求建设的防护要求设备的要求人员的要求管理的要求实验人员的免疫预防和健康监护要求各类人员的岗位培训实验废弃物和废水的处理要求二级生物安全实验室防护的基本要求建设的防护要求60生物安全实验室个人防护装备

是指用于防止工作人员受到物理、化学和生物等有害因子伤害的器材和用品。在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是保护实验人员免于感染性材料的各种方式的暴露，避免实验室相关感染。生物安全实验室个人防护装备是指用于防止工作人员受到物61生物安全实验室个人防护装备所涉及的防护部位：

1、眼睛、

2、头面部、

3、躯体、

4、手、

5、足、耳（听力）

6、呼吸道生物安全实验室个人防护装备所涉及的防护部位：62生物安全实验室个人防护装备装备包括：

1、眼镜（安全镜、护目镜）

2、口罩、面罩、防毒面具

3、帽子

4、防护衣(实验服、隔离衣、连体衣、围群)5、手套

6、鞋套

7、听力保护器等。生物安全实验室个人防护装备装备包括：63个人防护装备选择原则在危害评估的基础上，实验室工作人员根据不同级别的防护要求选择适当的个人防护装备。结合工作的具体性质选择个人防护装备

个人防护装备选择原则在危害评估的基础上，实验室工作人员根据不64

注意事项

1、个人防护用品应符合国家规定的有关标准

2、对个人防护装备的选择、使用、维护应有明确的书面规定、程序和使用指导

4、使用前应仔细检查，不使用标志不清、破损或泄漏的防护用品注意事项1、个人防护用品应符合国家规定的有关标准65（一）眼睛防护装备1、安全眼镜和护目镜

A）在所有易发生潜在眼睛损伤（物理、化学和生物因素引起）的生物安全实验室中工作时必须采取眼睛防护措施

B）所选用的眼睛防护装备的类型取决于外界危害因子对眼睛危害程度。建议：工作人员在生物安全实验室工作时不配戴隐型眼镜

不得戴眼镜防护装备离开实验室区域！

（一）眼睛防护装备66眼睛防护装备

a、安全镜

大多数情况,佩戴侧面带有护罩的安全眼镜能够保护工作人员避免受到大部分实验室操作所带来的损害.眼睛防护装备67d.眼镜配戴和卸下方法示意图

1）对某些特殊的操作如腐蚀性液体喷溅出或细小颗粒飞溅出时。2）用铬酸类溶液洗涤玻璃器皿、碾磨物品.3）或在使用玻璃器皿进行极具爆破或破损危害（例如在压力或温度突然增加或降低的情况下）的实验室操作时。佩戴安全眼镜是不够安全的！---在这些情况下，有必要保护整个面部和喉部，应该佩戴面罩。

d.眼镜配戴和卸下方法示意图68佩戴侧面带有护罩的安全眼镜就可以达到防护的目的。当在进行有可能

b、安全护目镜只有在进行有可能发生化学和生物污染物质溅出的实验时，必须佩戴护目镜。

佩戴侧面带有护罩的安全眼镜就可以达到防护的目的。当在进行有可69洗眼装置

规定：BSL-2和BSL-3实验室应配备紧急洗眼装置

如发生腐蚀性液体或生物危害液体喷溅至工作人员的眼睛时，应该（或在同事的帮助下）在就近的洗眼台（洗眼装置）用大量缓流清水冲洗眼睛表面至少15到30分钟。洗眼装置70淋浴装置和应急消毒喷淋装置1）规定：--BSL-2实验室在必要时应有应急喷淋装置--BSL-3实验室应设置淋浴装置（清洁区），必要时在半污染区设置应急消毒喷淋装置。

2）要求：

保持管道的通畅、必须告知工作人员应急消毒喷淋装置的摆放位置、培训其操作方法。

淋浴装置和应急消毒喷淋装置1）规定：71

---应急消毒喷淋装置

在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗时间至少需要20分钟。如果为化学物品溅出污染，用大量急水冲洗。

72（二）头面部防护装备

口罩

普通口罩仅可以保护部分面部免受生物危害物质如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物的污染

适用于---BSL-1或BSL-2实验室中使用（二）头面部防护装备口罩73

一般在使用时可同时佩戴面罩，以组合使用的方法

保护整个面部,单独使用不能对工作人员提供呼吸保护。

正确佩戴和卸下外科口罩示意图

74——防护面罩（对整个脸部进行防护）

——一次性面罩

——防护面罩（对整个脸部进行防护）75

一次性简易防护帽

防护帽在生物安全实验室中佩戴简易防护帽可以保护工作人员避免化学和生物危害物质飞溅至头部(头发)所造成的污染。

要求：

工作人员在实验操作时应佩带防护帽

无纺布制成的一次性简易防护

一次性简易防护帽防护帽在生物安全实验室中76（四）呼吸防护装备

1、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限定在一定的范围内

要求使用呼吸防护装备。2、呼吸防护的有效装备----防护面具（正压面罩、个人呼吸器和正压防护服）

使用：1、在进行高度危险性的操作（清理溢出的感染性物质和气溶胶）时，可以采用防护面具来进行防护。2、根据危险类型来选择防护面具。

（四）呼吸防护装备1、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限77

一次性防护面具

一次性防护面具

一次性防护面具一次性防护面具78

特点：1、在防护面具中装有一种可更换的过滤器，它可以保护佩戴者免受气体、蒸汽、颗粒和微生物及气溶胶损害的影响。2、过滤器必须与防护面具的正确类型相配套。3、为了达到理想的防护效果，每一个防护面具都应与操作者的面部相吻合。特点：79

正压防护服

使用中的全罩式防护面具正压防护服使用中的全罩80正压面罩（头盔正压式呼吸防护系统）正压面罩81正确佩戴一次性防护面具

使用要点：（1）佩戴时选择合适和合格的防护面具（2）遮盖住鼻子、口和下颚（3）用橡皮筋（松紧带）固定在头部（4）调整在合适的面部位置并加以检验（5）吸气时防毒面具应该有塌陷状（6）呼气时在面具周围不应该漏气正确佩戴一次性防护面具使用要点：82卸下口罩时：首先提起面具下方橡皮筋（松紧带）越过头部，然后提起面具上方橡皮筋（松紧带）使面具脱离面部，值得注意的是：一次性防毒面具使用完毕后应先消毒再丢弃卸下一次性防护面具卸下口罩时：卸下一次性防护面具83（四）手部防护装备

——手套

1、在实验室整个工作过程中都应使用手套进行操作。2、在接触感染性物质（血液、体液、分泌液、渗出液、以及接触粘膜和非完整皮肤时），必须使用合适的手套以保护工作人员避免受到污染物溅出或生物污染的事故所造成的损害。3、手套如被污染，应该尽可能早的脱下，消毒后丢弃。4、手套应按所从事操作的性质符合舒适、灵活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求，并应对所涉及的危险提供足够的防护。5、对实验室工作人员进行手套选择、使用前及使用后的配戴及摘除等培训。6、一次性手套不得重复使用,必须先消毒后丢弃。

（四）手部防护装备——手套84规范使用手套的几个要点：手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物危害物质的防护

手套的检查：在使用手套前应该检查手套是否退色、穿孔（漏损）或有裂缝。可以通过充气试验，将其浸入水中观察是否有汽泡来检查手套的质量

聚氯乙烯手套乳胶手套

聚脂手套

乳胶手套聚脂手套85

3、手套的使用：

a）一般情况下，佩戴一副手套即可（BSL-1和BSL-2实验室)

b）若在生物安全柜中操作感染性物质时（BSL-3实验室）应佩戴两副手套。

c）在操作过程中，外层手套被污染，立即用消毒剂喷洒手套并脱下后丢弃在生物安全柜中的高压灭菌袋中并立即戴上新手套继续实验。

d）戴好手套后应完全遮住手及腕部，如必要可覆盖实验服衣袖。3、手套的使用：864、手套的清洗和更换：a)使用一次性手套，不可重复使用。用后立即进行高压灭菌消毒然后丢弃。b)不得戴着手套离开实验室区域.C)工作人员在完成感染性物质实验,离开生物安全柜之前,应该脱去外层手套丢入生物安全柜内的高压灭菌袋中。然后用消毒液喷洗内层手套，以避免污染门捏手、电灯开关、电话等（BSL-2和BSL-3实验室）。4、手套的清洗和更换：87

5、避免手套“触摸污染”

a)戴手套的手避免触摸鼻子、面部和避免触摸或调整其他个人防护装备（如眼镜等）b)避免触摸不必要的物体表面如灯开关、门或捏手等c)如果手套撕破应该脱去，在换戴新手套前应清洗手部d)注意尽量不去触摸工作台面和其他物品5、避免手套“触摸污染”88戴手套注意要点:

1)在实验室工作中要一直保持戴手套状态并选择正确类型和尺寸的手套；

2)将手插入手套后将手套口遮盖实验服袖;戴手套的手要远离面部。

戴手套注意要点:

1)在实验室工作中要一直89脱手套过程及注意要点:

用一手捏起另一近手腕部处的手套外缘,将手套从手上脱下并将手套外表面翻转入内；用戴着手套的手拿住该手套；用脱去手套的手指插入另一手套腕部处内面；脱下该手套使其内面向外并形成一个由两个手套组成的袋状；丢弃在高温消毒袋中并进行消毒处理。

脱手套过程及注意要点:

用一手捏起另一近手腕部处的手套外缘,90洗手

根据(GB19489-2004）要求:

1、应该安装洗手装置，该装置可以是脚控或红外控制的洗手池，或者配置一个酒精擦手器。2、洗手是一种减少有害物质暴露的有效措施，要经常洗手。a）在处理活体病原材料或动物等生物危害物质后，b）在脱去手套之后和离开实验室之前，c）在脱卸个人防护装备时发生手部可见的污染时，洗手后再继续脱卸其他个人防护设备之前。洗手一般用肥皂和水或使用酒精擦手器。洗手根据(GB19489-2004）要求:91（五）躯体防护装备

防护服

（实验服、隔离衣、连体衣、围裙以及正压防护服）1、在实验室中工作人员应该一直或持续穿上防护服2、清洁的防护服应放置在专用存放处3、污染的防护服应放置在有标志的防漏消毒袋中4、每隔适当的时间应更换防护服以确保清洁5、当防护服已被危险材料污染后应立即更换6、离开实验室区域之前应脱去防护服。

（五）躯体防护装备防护服92

实验服

隔离衣

连体防护

实验服隔离衣连体防护93

实验服（BSL-1实验室）

隔离衣和连体衣（BSL-2和BSL-3实验室）

------比实验服将更适合于在微生物实验室以及生物安全柜中的工作。围裙------当有可能发生危险物质（血液或培养液等化学或生物危害物质喷溅）到工作人员身上时，应该在实验服或隔离衣外面再穿上塑料高颈保护的围裙。

禁止在实验室中穿短袖衬衫、短裤或短裙

实验服（BSL-1实验室）94.隔离衣穿戴方式

.隔离衣穿戴方式95隔离衣脱去方式

隔离衣脱去方式96

正压防护服：（BSL-4实验室）1、具有生命支持系统（包括提供超量清洁呼吸气体的正压供气装置,内气压相对周围环境为持续正压）2、正压防护服的生命支持系统（内置式和外置式）一般在BSL-4实验室中使用（如埃博拉病毒等）正压防护服：（BSL-4实验室）97

头盔式正压呼吸防护系统头盔式正压呼吸防护系统98(六）足部防护装置

当实验室中存在物理、化学和生物危险因子的情况下，穿合适的鞋子和鞋套或靴套。可以防止实验人员足部（鞋袜）避免受到损伤。BSL-2和BSL-3实验室要坚持穿鞋套或靴套。BSL-3和BSL-4实验室要求使用专用鞋。禁止在生物安全实验室中穿凉鞋、拖鞋、露趾和机织物鞋面的鞋。(六）足部防护装置当实验室中存在物理、化学和生物危险因99(七)听力防护装备

御寒式防噪音耳罩

一次性防噪音耳塞(七)听力防护装备御寒式防噪音耳罩一次性防噪音耳塞100各级生物安全实验室个人防护要求BSL－2实验室除符合BSL－1的要求外，还应该符合下列条件：在工作服外加罩衫或穿防护服。戴帽子和口罩。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。工作完全结束后方可除去手套。各级生物安全实验室个人防护要求BSL－2实验室101穿戴个人防护装备的顺序戴口罩→戴帽子→穿防护服→戴防护眼镜→穿鞋套→戴手套穿戴个人防护装备的顺序戴口罩→戴帽子→穿防护服→戴防护眼镜102脱卸个人防护装备的顺序外层手套→防护眼镜→隔离衣→口罩和防护帽→鞋套→内层手套脱卸个人防护装备的顺序外层手套→防护眼镜→隔离衣→口罩和防103个人防护用品的去污染消毒塑料、橡胶、无纺布制品的消毒手套的消毒正压服和正压面罩消毒鞋袜的消毒个人防护用品的去污染消毒塑料、橡胶、无纺布制品的消毒104谢谢，欢迎指正！！！

谢谢，欢迎指正！！！

105二级生物安全实验室操作规范

二级生物安全实验室操作规范

106实验室生物安全的概念是指在从事病原微生物实验活动中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害,对环境的污染和对公众的伤害,为了保证试验研究的科学性还要保护试验因子免受污染.其措施包括强化工作和管理人员生物安全意识,建立规范化、法制化和日常化的管理体系，加强人才的建设培训，配备必要的物理、生物防护设施、设备，掌握规范和微生物操作技术和方法等等。实验室生物安全的概念是指在从事病原微生物实验活动中避免病原微107切记：仅有先进的设施、设备和装备还不足以保证实验室的生物安全，作为实验室活动主体的操作者必须履行良好的行为规范才能最大限度保证实验室的生物安全。良好的生物安全实验室技术规范要满足保护操作者和实验环境的要求，必要时还要考虑对操作对象的保护。切记：仅有先进的设施、设备和装备还不足以保证实验室的生物安全108对于良好的实验室操作技术规范每个操作者都必须时刻铭记在心。对于每一个新进入实验室的工作人员都应该给予严格的训练，以使其掌握正确的要领，避免养成不良的习惯，从而保证以正确的意识、操作技术和工作习惯展开工作。养成正确的生物安全意识非常重要，它可以使操作者最大限度的保护自己，避免失误和事故的发生，哪怕即使发生意外，也会进行妥善的处理。对于良好的实验室操作技术规范每个操作者都必须时刻铭记在心。109从事实验活动都应遵循下列基本原则：不管是谁，从事实验活动都应遵循下列基本原则：①所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；②在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物和其他危险物质以及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件。对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施；从事实验活动都应遵循下列基本原则：不管是谁，从事实验活动都应110③熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，进行正确的操作和使用，对于各种可能的危害应非常熟悉；④应掌握各种感染性物质和其他危险物质操作的一般准则和技术要点。③熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、111实验室的生物安全技术规范，包括但不仅限于实验室运行的基本规范、仪器设备的使用规范、针对感染性材料、危险化学品、放射性核素等的操作规范以及个人防护用品的使用规范等。

实验室的生物安全技术规范，包括但不仅限于实验室运行的基本规范112一、生物安全实验室运行的基本规范这些规范不能代替各实验室的规章制度、程序文件和标准操作程序。各个实验室应遵照国家有关法律、法令、标准和规定，结合实际情况来制定相应的管理文件和标准操作程序，确保实验室生物安全符合国家的有关要求。一、生物安全实验室运行的基本规范这些规范不能代替各实验室的规113一）BSL-2实验室人员控制规范实验室的进入实验室负责人应根据要求对进入实验室的人员加以控制。未经批准或允许，任何人不得擅自进入实验室。严禁儿童进入实验室工作区域。不允许可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员进入实验室或感染动物房。一）BSL-2实验室人员控制规范实验室的进入114BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人员姓名、电话以及进入实验室的特殊要求。实验室的门应保持关闭状态。与实验工作无关的动物不得带入实验室。BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通115二）工作人员的防护规范在实验室工作时，必须穿戴合适的工作服或防护服。工作人员可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物以及其他有害物质的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。二）工作人员的防护规范在实验室工作时，必须穿戴合适的工作服或116在处理完感染性实验材料和动物以及其他有害物质后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩或其他防护设备。在处理完感染性实验材料和动物以及其他有害物质后，以及在离开实117严禁穿着实验防护服离开实验室工作区域。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理角膜接触镜。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。严禁穿着实验防护服离开实验室工作区域。118三）有关操作的指导原则严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于口内。严禁舔标签。所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。三）有关操作的指导原则严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于119污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险评估结果准备专门的污水处理系统。只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室。污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物120四）实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危险性的材料溢出应立即清除污染。所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。四）实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实121感染性材料的包装和运输应遵循国家和/或国际的相关规定。如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。感染性材料的包装和运输应遵循国家和/或国际的相关规定。122五）生物安全管理的指导原则实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或/和操作手册。实验室应当能提供常规的实验室安全培训，并建立培训制度。五）生物安全管理的指导原则实验室负责人负责制订和采用生物安全123实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作手程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害124应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、健康监测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的生物因子相关的免疫接种或检测。应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。125二、实验室仪器设备的使用规范仪器设备的不正确使用往往会造成有害物质的泄漏、个人伤害甚至于发生实验室感染，因此规范实验室仪器的使用是保证实验室生物安全的关键环节之一。二、实验室仪器设备的使用规范仪器设备的不正确使用往往会造成有126设备使用和操作规程

使用程序维护程序检定程序校准程序报废程序设备使用和操作规程1271、生物安全柜的使用

1、生物安全柜的使用

128一、操作程序一、操作程序129一）II级生物安全柜内的准备工作

在开始工作之前，准备一张特别的活动所需的材料检查清单，在生物安全柜内的放置必要的材料。因为安全柜的气幕防护屏障是很脆弱的，做好充分的准备是为了在正式工作时减少手臂穿越气幕的运动次数。操作者手臂横向快速地进出安全柜会干扰气幕，并损害安全柜所提供的局部防护屏障。手臂垂直于安全柜的操作口，进出时缓慢的移动，将减少这种危险。房间其他人员的活动（例如，迅速运动，开、关房间门等）也同样可以干扰安全柜的空气保护屏障。一）II级生物安全柜内的准备工作在开始工作之前，准备一张特130在开始工作之前，操作者应该调整凳子高度，使自己的脸在前操作口之上。在手臂放进安全柜内大约一分钟之后，才能进行实验操作。这样可以使安全柜稳定，并且能让气流“清扫”掉手和臂表面的微生物污染物。当操作者的胳膊横放在前面的格栅上的时候，房间空气可能直接流动到安全柜的工作区域，而不是通过前面的格栅进风。轻微地提高胳膊会缓和这个问题。前面的格栅绝对不能让研究记录、废弃的塑料包装和吸液装置等阻挡。所有的操作应该在距离前面的格栅4英寸里面的工作面上进行。

在开始工作之前，操作者应该调整凳子高度，使自己的脸在前操作口131二）工作前的净化在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-5分钟使安全柜内的空气进行净化。安全柜的工作台面、内壁（不包括送风滤器扩散板）和观察窗的内表面用消毒剂擦拭。再用无菌蒸馏水进行擦拭以清除残余的消毒剂。

放到安全柜的容器和材料的表面应该以70%的乙醇擦拭，以减少将环境的杂菌带到安全柜内。定期的对孵箱和冰箱进行消毒二）工作前的净化在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-5132三）生物安全柜内部材料的放置在安全柜的工作台面上可以放一块塑料衬底的能吸水的毛巾。所有的材料应该放在离安全柜前面的格栅和后面工作台面的边缘尽可能远的位置。容易产生气溶胶的设备（例如，旋转搅拌器，台式离心机）应该靠近安全柜的后部放置。操作时的动作应该从工作台面的清洁区到污染区。三）生物安全柜内部材料的放置在安全柜的工作台面上可以放一块塑133二级生物安全实验室操作规范课件134安全柜内材料的放置洁净培养物（左边）可以进行接种（中心）；用过的污染吸管放在浅的平底盘里，而其它污染的材料可以放在生物危害包（右边）中。这安排对于习惯于左手操作的人要颠倒过来。

洁净污染安全柜内材料的放置洁净培养物（左边）可以进行接种（中心）；用135四）II级生物安全柜内的操作

在生物安全柜内所进行的许多普通过程可能产生喷溅或气溶胶。应该始终采用良好的微生物学技术，减少喷溅和气溶胶产生。II级生物安全柜的设计可以使水平方向喷出的孢子在14英寸的传播距离以内被安全柜向下流动的气流所俘获。因此，保持干净的材料离开产生气溶胶的活动至少1英尺以外将会减少交叉污染的可能性。四）II级生物安全柜内的操作在生物安全柜内所进行的许多普通136二级生物安全实验室操作规范课件137二级生物安全实验室操作规范课件138五）消毒

表面消毒

工作完成时，所有的容器和设备应该进行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作结束时，应该对安全柜进行最后的表面消毒，包括工作台面、安全柜的边壁、后壁和观察窗玻璃内部的擦拭。如果必要，安全柜也应该进行放射性检测并进行必要的消毒。作为安全的微生物学操作的最后步骤，操作者应该摘下手套、脱下工作服并且洗手。

五）消毒表面消毒139二级生物安全实验室操作规范课件140六）发生少量的喷洒时的消毒在生物安全柜内发生少量的喷洒时，应该用污染清除吸收纸巾立即进行处理，并将使用过的纸巾放到这个生物危害包里。对安全柜内的所有物品和安全柜内部，用浸满消毒液的毛巾立即进行擦洗。

六）发生少量的喷洒时的消毒在生物安全柜内发生少量的喷洒时，应141七）发生大量的溢出当发生大量的溢出时，液体会通过前面或后部的格栅流到下面去，这时要求更广泛的消毒。安全柜内的所有的物品应该进行表面消毒并拿出安全柜。应该使消毒液维持20-30分钟的适当接触时间如果溢出的液体含有放射性材料，可采取类似的程序。并应该与辐射安全人员联系，寻求特殊的指导。七）发生大量的溢出当发生大量的溢出时，液体会通过前面或后部的142八）气体消毒在更换HEPA过滤器或进行内部维修之前，要对生物安全柜必须进行消毒。八）气体消毒在更换HEPA过滤器或进行内部维修之前，要对生物143九、生物安全柜的日常维护1.定期清洁操作台面和前窗玻璃2.保持实验室内空气质量,延长高效过滤器的使用寿命3.定期检测紫外灯的照射强度,及时更换灯管4.长期不用应定期进行维护性运行高效过滤器应定期检测,及时更换.5.做好使用和维护记录.九、生物安全柜的日常维护1.定期清洁操作台面和前窗玻璃144五、感染性物质的操作与防护规范一）、实验室内检测样本的安全操作在实验室内，进行感染性物质的操作，包括其样本采集、内部运输、接收和开启的方法不正确，都会增加造成相关人员发生实验室感染的危险性。因此，进行感染性物质的操作应注意以下问题：五、感染性物质的操作与防护规范一）、实验室内检测样本的安全1451、包装容器用于装盛感染性物质的容器一般不建议使用玻璃制品，为了保证安全，最好采用塑料制品（根据实际需要而定）。样本容器应当坚固，不易破碎，带螺旋盖，盖好后不应有液体渗漏。所有的标本都应存放在容器内。容器应贴上标签以利于识别，标签上应有样品名称、采集日期、编号等必要的信息。样品的有关表格和/或说明不要绑在容器外面，而应单独放在防水的袋子里，以防止发生污染而影响使用。1、包装容器用于装盛感染性物质的容器一般不建议使用玻璃制品，1462、标本的接收大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域进行。对于病原已知的按国家规定可在BSL－2操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低应在一个专用区域或房间接受，并在生物安全柜内打开外包装，操作人员应穿防水的防护服，戴生物安全专用口罩和眼罩、手套。2、标本的接收大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域147样本接受由收样员按照规定程序收样，并做好收样登记，与送样人员做好交接工作，最后双方签字确认。样本接受由收样员按照规定程序收样，并做好收样登记，与送样人员1483、实验室内运输为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全，在实验室内运输感染性物质时，应使用金属的或塑料材质的第二层容器（如盒子）加以包裹，在第二层容器中应该有标本容器的支架，将标本容器固定在支架上，以使其保持直立。第二层容器应耐高压或者能抵抗化学消毒剂的腐蚀，以便定期清除污染。封口处最好有一个垫圈，以防止发生渗漏。3、实验室内运输为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全，149按国家规定需要在BSL-3或以上级实验室操作的病原微生物或标本，应按国家规定的防护等级，在相应级别的实验室的安全柜内打开，并采取相应的防护措施。为保证安全，不应在普通的BSL-1实验室接受具有感染性的检测样本。按国家规定需要在BSL-3或以上级实验室操作的病原微生物或标1503、标本包装的打开接收并打开样本包装的人员应受过专业防护培训（尤其是处理破裂的或渗漏容器）并应知道所操作标本的潜在的健康危害，操作时要采取合适的防护措施。所有标本应该在生物安全柜里打开包装，同时备有消毒剂以便随时处理可能出现的标本泄露。3、标本包装的打开接收并打开样本包装的人员应受过专业防护培训151打开包装前应仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检报告与内容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破损等，要登记详细的报告单并记录处置方法。接收标本应由2人进行。打开包装前应仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检152避免感染性物质扩散的要领为避免接种物从接种环上脱落，微生物接种环直径应为2～3mm并且完全闭合，柄的长度不应超过6cm以最大限度地减少抖动。应该使用密闭的微型电加热灭菌灯消毒接种环，以免在开放式的本生灯火焰上灭菌时感染性物质溅落。最好使用一次性的、无需灭菌的接种环。避免感染性物质扩散的要领为避免接种物从接种环上脱落，微生物接153小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。要高压灭菌和/或丢弃的废弃标本及培养物应放在防渗漏的容器里，如使用耐高压的医疗废物专用袋。放入废弃物容器前，标本的顶部应标明是安全的（如使用高压标签）。应对实验室进行定期的终末消毒。小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。154避免吸入或接触感染性物质的规范在微生物实验操作中释放的较大颗粒和小液滴（直径大于5um）会很快落在操作台表面以及操作者的手上，为了避免污染，操作者应戴一次性手套。实验人员做实验时要避免触摸嘴、眼和面部。避免吸入或接触感染性物质的规范在微生物实验操作中释放的较大颗155严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮料。实验室内不许咬笔、嚼口香糖。实验室内不许化妆和装卸角膜接触镜。在任何可能导致潜在的传染性物质溅出的操作过程中，应该保护好面部、眼睛和嘴。严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮料。156避免传染性物质接种的规范要尽力避免由破裂的或由缺口的玻璃器皿引起的感染性物质的意外感染。尽量以塑料器皿和吸管代替玻璃器皿和吸管。锐器，如皮下接种针（针头）、玻璃吸管和碎玻璃可导致实验人员感染，因此要小心操作。避免传染性物质接种的规范要尽力避免由破裂的或由缺口的玻璃器皿157为减少注射器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可以用简单的工具开启瓶塞，这样就可以用吸管代替注射器和针头）。必须使用注射器和针头时，要采用锐器保护装置。针头永远不要重新盖帽，若需对接不要直接用手对接注射器和针头，用过的一次性物品要放进专用的耐针刺的有盖容器中。为减少注射器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可158对玻璃和“锐器”的使用规范尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能使用实验室级玻璃（硼硅酸盐），而且任何碎裂或有裂纹的器皿都应丢弃。皮下注射针不应用做吸管。对玻璃和“锐器”的使用规范尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能159二级生物安全实验室的安全防护二级生物安全实验室操作规范课件160病原微生物实验室的生物危险气溶胶(aerosol)：固体或＼和液体微粒稳定地悬浮于气体介质中形成的分散体系，粒径一般为0.001~100μm。微生物气溶胶(microbialaerosol)：微粒中含有微生物。感染性气溶胶(infectiousaerosol)：微粒中含有致病微生物。病原微生物实验室的生物危险气溶胶(aer161气溶胶粒子的大小不同，经呼吸道到达体内的深度和归宿不同

粒径>10μm，一般被阻留在鼻腔内；5~10μm，可到达支气管；<5μm，可进入细支气管和肺泡。气溶胶粒子越小，进入的部位就越深：<1μm的在肺泡内沉积率最高；<0.4μm的粒子能较自由地进出肺泡并可随呼气排出体外，沉积较少。气溶胶粒子的大小不同，经呼吸道到达体内的深度和归宿不同

粒径162生物安全防护应遵循的三个原则：配备安全防护设备。使用个体防护装置和措施（一级防护）对实验室的特殊设计和建设要求（二级防护）严格的管理制度、标准化操作程序和规程。生物安全防护应遵循的三个原则：配备安全防护设备。使用个体防护163生物安全的三项技术措施：样品隔离技术定向流技术消毒灭菌技术（物理、化学）生物安全的三项技术措施：样品隔离技术164二级生物安全实验室防护的基本要求建设的防护要求设备的要求人员的要求管理的要求实验人员的免疫预防和健康监护要求各类人员的岗位培训实验废弃物和废水的处理要求二级生物安全实验室防护的基本要求建设的防护要求165生物安全实验室个人防护装备

是指用于防止工作人员受到物理、化学和生物等有害因子伤害的器材和用品。在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是保护实验人员免于感染性材料的各种方式的暴露，避免实验室相关感染。生物安全实验室个人防护装备是指用于防止工作人员受到物166生物安全实验室个人防护装备所涉及的防护部位：

1、眼睛、

2、头面部、

3、躯体、

4、手、

5、足、耳（听力）

6、呼吸道生物安全实验室个人防护装备所涉及的防护部位：167生物安全实验室个人防护装备装备包括：

1、眼镜（安全镜、护目镜）

2、口罩、面罩、防毒面具

3、帽子

4、防护衣(实验服、隔离衣、连体衣、围群)5、手套

6、鞋套

7、听力保护器等。生物安全实验室个人防护装备装备包括：168个人防护装备选择原则在危害评估的基础上，实验室工作人员根据不同级别的防护要求选择适当的个人防护装备。结合工作的具体性质选择个人防护装备

个人防护装备选择原则在危害评估的基础上，实验室工作人员根据不169

注意事项

1、个人防护用品应符合国家规定的有关标准

2、对个人防护装备的选择、使用、维护应有明确的书面规定、程序和使用指导

4、使用前应仔细检查，不使用标志不清、破损或泄漏的防护用品注意事项1、个人防护用品应符合国家规定的有关标准170（一）眼睛防护装备1、安全眼镜和护目镜

A）在所有易发生潜在眼睛损伤（物理、化学和生物因素引起）的生物安全实验室中工作时必须采取眼睛防护措施

B）所选用的眼睛防护装备的类型取决于外界危害因子对眼睛危害程度。建议：工作人员在生物安全实验室工作时不配戴隐型眼镜

不得戴眼镜防护装备离开实验室区域！

（一）眼睛防护装备171眼睛防护装备

a、安全镜

大多数情况,佩戴侧面带有护罩的安全眼镜能够保护工作人员避免受到大部分实验室操作所带来的损害.眼睛防护装备172d.眼镜配戴和卸下方法示意图

1）对某些特殊的操作如腐蚀性液体喷溅出或细小颗粒飞溅出时。2）用铬酸类溶液洗涤玻璃器皿、碾磨物品.3）或在使用玻璃器皿进行极具爆破或破损危害（例如在压力或温度突然增加或降低的情况下）的实验室操作时。佩戴安全眼镜是不够安全的！---在这些情况下，有必要保护整个面部和喉部，应该佩戴面罩。

d.眼镜配戴和卸下方法示意图173佩戴侧面带有护罩的安全眼镜就可以达到防护的目的。当在进行有可能

b、安全护目镜只有在进行有可能发生化学和生物污染物质溅出的实验时，必须佩戴护目镜。

佩戴侧面带有护罩的安全眼镜就可以达到防护的目的。当在进行有可174洗眼装置

规定：BSL-2和BSL-3实验室应配备紧急洗眼装置

如发生腐蚀性液体或生物危害液体喷溅至工作人员的眼睛时，应该（或在同事的帮助下）在就近的洗眼台（洗眼装置）用大量缓流清水冲洗眼睛表面至少15到30分钟。洗眼装置175淋浴装置和应急消毒喷淋装置1）规定：--BSL-2实验室在必要时应有应急喷淋装置--BSL-3实验室应设置淋浴装置（清洁区），必要时在半污染区设置应急消毒喷淋装置。

2）要求：

保持管道的通畅、必须告知工作人员应急消毒喷淋装置的摆放位置、培训其操作方法。

淋浴装置和应急消毒喷淋装置1）规定：176

---应急消毒喷淋装置

在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗时间至少需要20分钟。如果为化学物品溅出污染，用大量急水冲洗。

177（二）头面部防护装备

口罩

普通口罩仅可以保护部分面部免受生物危害物质如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物的污染

适用于---BSL-1或BSL-2实验室中使用（二）头面部防护装备口罩178

一般在使用时可同时佩戴面罩，以组合使用的方法

保护整个面部,单独使用不能对工作人员提供呼吸保护。

正确佩戴和卸下外科口罩示意图

179——防护面罩（对整个脸部进行防护）

——一次性面罩

——防护面罩（对整个脸部进行防护）180

一次性简易防护帽

防护帽在生物安全实验室中佩戴简易防护帽可以保护工作人员避免化学和生物危害物质飞溅至头部(头发)所造成的污染。

要求：

工作人员在实验操作时应佩带防护帽

无纺布制成的一次性简易防护

一次性简易防护帽防护帽在生物安全实验室中181（四）呼吸防护装备

1、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限定在一定的范围内

要求使用呼吸防护装备。2、呼吸防护的有效装备----防护面具（正压面罩、个人呼吸器和正压防护服）

使用：1、在进行高度危险性的操作（清理溢出的感染性物质和气溶胶）时，可以采用防护面具来进行防护。2、根据危险类型来选择防护面具。

（四）呼吸防护装备1、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限182

一次性防护面具

一次性防护面具

一次性防护面具一次性防护面具183

特点：1、在防护面具中装有一种可更换的过滤器，它可以保护佩戴者免受气体、蒸汽、颗粒和微生物及气溶胶损害的影响。2、过滤器必须与防护面具的正确类型相配套。3、为了达到理想的防护效果，每一个防护面具都应与操作者的面部相吻合。特点：184

正压防护服

使用中的全罩式防护面具正压防护服使用中的全罩185正压面罩（头盔正压式呼吸防护系统）正压面罩186正确佩戴一次性防护面具

使用要点：（1）佩戴时选择合适和合格的防护面具（2）遮盖住鼻子、口和下颚（3）用橡皮筋（松紧带）固定在头部（4）调整在合适的面部位置并加以检验（5）吸气时防毒面具应该有塌陷状（6）呼气时在面具周围不应该漏气正确佩戴一次性防护面具使用要点：187卸下口罩时：首先提起面具下方橡皮筋（松紧带）越过头部，然后提起面具上方橡皮筋（松紧带）使面具脱离面部，值得注意的是：一次性防毒面具使用完毕后应先消毒再丢弃卸下一次性防护面具卸下口罩时：卸下一次性防护面具188（四）手部防护装备

——手套

1、在实验室整个工作过程中都应使用手套进行操作。2、在接触感染性物质（血液、体液、分泌液、渗出液、以及接触粘膜和非完整皮肤时），必须使用合适的手套以保护工作人员避免受到污染物溅出或生物污染的事故所造成的损害。3、手套如被污染，应该尽可能早的脱下，消毒后丢弃。4、手套应按所从事操作的性质符合舒适、灵活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求，并应对所涉及的危险提供足够的防护。5、对实验室工作人员进行手套选择、使用前及使用后的配戴及摘除等培训。6、一次性手套不得重复使用,必须先消毒后丢弃。

（四）手部防护装备——手套189规范使用手套的几个要点：手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物危害