仿制药生物等效性实验设计崔一民

仿制药生物等效性试验设计崔一民北京大学第一医院E-mail:cuiymzy@126.com生物等效性（BE）的概念

生物等效性试验是指用生物利用度研究的方法，以药代动力学参数为指标，比较同一种药物的相同或者不同剂型的制剂，在相同的试验条件下，其活性成分吸收程度和速度有无统计学差异的人体试验。生物等效性试验在药物研究开发的不同阶段，其作用可能稍有差别，但究其根本，生物等效性试验的目的都是通过测定血药浓度的方法，来比较不同的制剂对药物吸收的影响，也即药物不同制剂之间的差异，以此来推测其临床治疗效果差异的可接受性，即不同制剂之间的可替换性。BE研究适用范围改变国内已上市销售药品的剂型，但不改变给药途径的口服制剂或其他有关制剂（化学药）。已有国家药品标准的制剂（化学药）。改变口服药物制剂处方或工艺的补充申请其他BE研究方法通常意义的BE研究是指通过测量不同时间点的生物样本（如血浆或尿液）中药物浓度，获得药物浓度-时间曲线来反映药物从制剂中释放吸收到体循环中的动态过程。并经过适当的计算得到曲线下面积（AUC）、达峰浓度（Cmax）、达峰时间（Tmax）等参数后，通过统计学比较判断两制剂是否生物等效。

生物样本中药物浓度测定建立生物样本中药物浓度定量分析方法是进行生物等效性研究的关键之一。开始入选受试者前，应建立可靠的和可重现的药物浓度定量分析方法。

方法学建立和考察的内容特异性；标准曲线和定量范围；定量下限；精密度与准确度；样品稳定性；提取回收率。普通制剂随机、交叉、单剂量、两周期试验设计控、缓释制剂随机、交叉、单剂量和多剂量、两周期试验设计生物等效性临床试验的设计生物等效性临床试验的设计交叉设计是目前应用最多最广的方法。把受试对象随机分为两组，按一定顺序处理，一组受试者先服用受试制剂，后服用参比制剂；另一组受试者先服用参比制剂，后服用受试制剂。两顺序间应有足够长的间隔时间，为清洗期。生物等效性临床试验的设计为什么采用一般采用交叉设计？对每位受试者都连续接受两次或多次的处理，相当于自身对照，可以将制剂因素对药物吸收的影响与其他因素区分开来，减少了不同试验周期和个体间差异对试验结果的影响。

可能出现的其它设计方案在进行两种以上剂型比较时，也可以进行多周期试验设计。在试验药物的半衰期过长时，可进行平行试验设计。生物等效性临床试验的设计单剂量给给药交叉叉试验设设计给药20天-7天1天3天研究日筛查-1天入院出院入院14天给药出院15天17天随访第一周期第二周期A组服试验药物B组服对照药物A组服对照药物B组服试验药物清洗期单剂量给药药平行试验验设计给药8天-7天1天研究日筛查-1天入院出院随访PKA组服试验药物B组服对照药物为什么要做做血药浓度度达到稳态态时的生物物等效性比比较？观察制剂的的控释或缓缓释特性是是否一致。。生物等效性性临床试验验的设计受试者的例例数？SFDA指导原则：：18~24例根据统计学学的把握度度进行计算算对某些变异异性大的药药物可能需需要适当增增加例数生物等效性性临床试验验的设计如果试验药药物是前药药怎么办？？原则上以原原药为基础础进行等效效性研究。。在原药代谢谢很快、药药代动力学学参数变异异大导致血血液浓度测测定困难或或受试者数数目过大时时可以主要要活性代谢谢产物为基基础进行等等效性研究究。生物等效性性临床试验验的设计如何确定参参比药物？？原则上选择择国内已经经批准上市市相同剂型型药物中的原创创药。在无法获得得原创药时时，可考虑虑选用上市市主导产品作为为参比制剂剂。生物等效性性临床试验验的设计生物等效性性临床试验验的设计如何确定给给药剂量？？给药剂量一一般应与临临床单次用用药剂量一一致，不得得超过临床床推荐的单单次最大剂剂量或已经经证明的安安全剂量。。受试制剂和和参比制剂剂一般应服服用相等剂剂量。需要使用不不相等剂量量时，应说说明理由并并提供所用用剂量范围围内的线性性药代动力力学特征依依据，结果果可以剂量量校正方式式计算生物物利用度。。生物等效性性临床试验验的设计如何确定清洗期？设定清洗期期是为了消消除两制剂剂的互相干干扰，避免免上个周期期内的处理理影响到随随后一周期期的处理中中。清洗期一般般不应短于于7个消除半衰衰期。生物等效性性临床试验验的设计如何设计取取样点？取样点的设设计对试验验结果的可可靠性及药药代动力学学参数计算算的合理性性，均有十十分重要的的意义。一般应兼顾顾到吸收相相、平衡相相（峰浓度度）和消除除相。服药药前应先取取空白血样样。一般在在吸收相部部分取2～3个点，峰浓浓度附近至至少需要3个点，消除除相取3～5个点。采样持续应应到受试药药原形或其其活性代谢谢物3～5个半衰期时时，或至血血药浓度为为Cmax的1／10～1／20，AUC0-t/AUC0-∞通常应当大大于80%。受试者入选选标准：男性健康受受试者，18～40周岁。体重指数（（体重(kg)/身高(m)2）在正常范范围（19～24）内。试验前签署署知情同意意书。生物等效性性临床试验验的设计受试者排除除标准（举举例）：通过直接提提问和体检检，有任何何显著的临临床疾病者者。临床上有显显著的变态态反应史、、特别是药药物过敏史史者。经研究前全全面体检和和实验室检检查发现有有任何显著著的临床疾疾病者。正在服用或或在服第一一剂研究药药物前3周中曾服用用任何处方方药或非处处方药（每天天3g以内扑热息息痛除外））者。在此研究给给第一剂的的日期前4个月内接受受过任何试试验性药物物者。喝酒每周超超过28单位酒精（（1单位＝285ml啤酒或25ml烈酒或1玻璃杯葡萄萄酒）者。。每天吸烟超超过10支或相等量量的烟草者者。有证据表明明其为药物物滥用者。。在研究前一一个月献过过血，或打打算在研究究期间或研研究结束后后一个月内内献血或血液液成分者。。研究者认为为受试者有有任何原因因可能不会会完成本研研究者。生物等效性性临床试验验的设计为什么选择择男性受试试者？消除性别间间的差异。。避免受女性性经期及妊妊娠的影响响。生物等效性性临床试验验的设计药代动力学学参数的计计算在生物等效效性研究中中，其主要要药代参数数Cmax和Tmax均以实测值值表示，AUC0→t以梯形法计计算。一般用非房房室数学模模型分析方方法来估算算药代动力力学参数，，为什么？？用房室模型型方法估算算药代参数数时，采用用不同的方方法或软件件其值可能能有较大差差异。BE研究中常用用的软件WinNonLinDAS研究者可根根据具体情情况选择使使用，但所所用软件必必须经确证证并应在研研究报告中中注明所用用软件。等效判断标标准采用主要药药代参数经经对数转换换后以多因因素方差分分析（ANOVA）进行显著著性检验，，然后用双双向单侧t检验和计算算90％置信区间间的统计分分析方法来来评价和判判断药物间间的生物等等效性。等效判断标标准关于方差分分析方差检验是是显著性检检验，设定定的无效假假设是两药药无差异，，检验方式式为是与否否。在P<0.05时认为两者者差异有统统计意义，，但不一定定不等效；；在P>0.05时认为两药药差异无统统计意义，，但并不能能认为两者者相等或相相近。等效判断标标准关于等效检检验双向单侧t检验及（1~2α）%置信区间法法是目前生生物等效检检验的唯一一标准。SFDA规定：一般般经对数转转换后的受受试制剂的的AUC0→t在参比制剂剂的80％～125％范围，受受试制剂的的Cmax在参比比制剂剂的70％～143％范围围，判判断两两药生生物等等效。。如有必必要时时，应应对Tmax经非参参数法法检验验，如如无差差异，，可以以认定定受试试制剂剂与参参比制制剂生生物等等效。。各国等等效判判断标标准比比较国家/地区AUC标准90%可信限Cmax标准90%可信限中国80~125%70~143%加拿大80~125%None（点估计）EMEA80~125%75~133%日本80~125%某些药物更宽WHO80~125%Cmax的可接受范围可能比AUC宽美国80~125%80~125%南非80~125%75~133%等效判判断标标准出现Tmax不等效效，Cmax等效，，AUC等效或或Cmax不等效效，AUC等效时时，怎怎么看看？目前比比较肯肯定AUC对药物物吸收收程度度的衡衡量作作用，，而Cmax、Tmax依赖取取样时时间的的安排排，用用它们们衡量量吸收收速率率有时时是不不够准准确的的，不不适合合用于于具有有多峰峰现象象的制制剂及及个体体变异异大的的试验验。故故在评评价时时，若若出现现某些些不等等效特特殊情情况，，需具具体问问题加加以具具体分分析。。BE研究的的临床床试验验报告告生物等等效性性研究究临床床报告告内容容至少少应包包括以以下内内容（1）实验验目的的；（2）生物物样本本分析析方法法考察察的数数据，，提供供必要要的图图谱；；（3）实验验设计计和操操作方方法，，包括括全部部受试试者的的资料料、样样本例例数数、参参比制制剂、、给药药剂量量、服服药方方法和和采样样时间间安排排；（4）受试试者各各时间间点的的药物物浓度度、药药代参参数和和药时时曲线线；（5）采用用的统统计分分析方方法以以及详详细统统计过过程和和结果果；（6）服药药后的的临床床不良良反应应观察察结果果，受受试者者中途途退出出和脱脱落记记录及及原因因；（7）生物物利用用度或或生物物等效效性结结果分分析以以及讨讨论；；（8）参考考文献献。化学药药物制制剂人人体生生物利利用度度和生生物等效性性研究究技术术指导导原则则(二○○○五年年三月月)主要参参考文文献举例：：A片剂的生物物等效效性研研究XXX制药有有限公公司生生产与与YYY制药有有限公公司生产A片剂的的开放放、随随机、、交叉叉研究究研究目目的在中国国男性性健康康受试试者中中评价价XXX制药有有限公公司生生产与与YYY制药有有限公公司生生产A片剂的的生物物等效效性。。试验设设计本研究究为开开放、、单剂剂量、、双周周期随随机交交叉设设计；；计划入入组24例，均均为男男性；；受试者者于试试验当当日清清晨按按试验验设计计口服服试验验制剂剂或参参比制制剂。。于1周后交交叉服服用另另一制制剂。。试验验结束束后进进行随随访；；每周期期分别别于给给药前前及给给药后后第0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、16、24小时采采集静静脉血血测定定血浆浆中A的浓度度，计计算药药代动动力学学参数数，判判定两两种制制剂是是否生生物等等效。。入选标标准年龄在在18～40周岁之之间健健康男男性,且同一一批入入组受受试者者年龄龄相差差不超超过10岁；体重指指数(BMI)在19～24之间,体重不不应低低于50Kg；自愿参参加本本试验验并签签署书书面知知情同同意书书。排除标标准受试者者在首首次服服用研研究药药物前前30天内患患有严严重疾疾病（（研究究者认认为没没有临临床显显著意意义除除外））；或或有胃胃肠肝肝肾疾疾病患患者；；或有有其他他影响响吸收收、分分布、、代谢谢和排排泄等等因素素者；；有药物过敏敏史者；受试者在筛筛选试验前前2年内有药物物滥用史或或酗酒史（（定义饮用用酒精的量量：每日饮饮用酒精的的量约为40g）；饮用过量茶茶、咖啡和和/或含有咖啡啡因的饮料料者（＞8杯/天）；乙型肝炎病病毒表面抗抗原(HBsAg)、丙型肝炎炎病毒抗体体(Anti-HCV)、艾滋病病病毒抗体(Anti-HIV)中有一项呈呈阳性者；；实验室检查查异常且研研究者认为为有临床意意义的受试试者；收缩压≤90mmHg的受试者；；卧位5分钟和站立立后立即测测定的血压压值：收缩缩压之差＞＞20mmHg，舒张压之之差＞10mmHg的受试者；；排除标准（（续）受试者在首首次服用研研究药物前前2周曾经吸过过烟或服用用过含有烟烟碱的产品品（包括但但不限定是是香烟、烟烟斗、雪茄茄烟、咀嚼嚼用烟草、、烟碱片、、烟碱口香香糖），或或在首次服服用研究药药物前1周内曾经饮饮酒者；在过去4周内采集全全血≥200ml或过去12周内采集全全血≥400ml或过去2周内采集成成分血（采采集血清成成分或血小小板成分））者；3个月内用过过已知对脏脏器有损害害的药物者者；或在给给予试验药药物前2周内有用药药史者；或或目前正在在使用药物物者；在试验开始始前2个月内参加加过其他试试验者；不能和研究究者很好沟沟通者（语语言障碍、、智力发育育不良或脑脑功能受损损者）；在紧急情况况下不能取取得联系者者；由研究者判判断为不适适合参加本本试验的受受试者。用法用量采用随机的的服药顺序序，受试者者在第一研研究周期早早晨空腹单单次口服试试验制剂或或参比制剂剂，在第二二研究周期期交叉服用用参比制剂剂或试验制制剂，剂量量均为5mg，两次服药药间隔至少少1周。生物等效性性评价指标标主要判定指指标：Cmax和AUC0-24h；参考指标：：AUC0-∞和Tmax安全性评价价指标不良事件（（症状）；；不良事件（（检查）；；生命体征（（血压、心心率）；严重不良事事件。评价方法药代动力学学：使用WinNonLinVersion5.0程序的非房房室模型法法计算试验验制剂和参参比制剂的的药代动力力学参数Cmax，Tmax，AUC0-24h，AUC0-∞，t1/2。生物等效性性分析：药药代动力学学参数Cmax，AUC0-24h，AUC0-∞的生物等效效性分析采采用WinNonLin程序中的BioequivalenceWizard模块；Tmax采用SPSS软件Wilcoxon检验法进行行分析。安全性分析析：将试试验过程中中观察到的的不良事件件及实验室室检查异常常的研究前前后的数据据进行列表表描述。对对生命体征征（血压、、心率）、、实验室检检查值进行行描述性统统计和列表表分析，按按给药组检检查时期计计算出平均均值、标准准差、最小小值、最大大值。试验结果受试者人口口学资料受试者年龄（y）身高（m）体重(kg）体重指数(kg/m2)mean±sd35.0±2.91.68±0.0663.5±6.022.4±1.3范围28~381.60~1.8151~7619.9~24.0主要药代动动力学参数数药代动力学参数试验制剂参比制剂Cmax(ng/mL)Tmax*(h)AUC0-24h(ng*h/mL)AUC0-∞(ng*h/mL)t1/2(h)F（%）*Tmax以中位