液相色谱维修保养课件

液相色谱仪的保养与维修

M.LUOM.LUO

一.仪器的保养

M.LUO1.整机保养（一）《短期停机》在完成一天工作以后，都要停机等第二天再继续工作，则可按以下步骤停机。A）关闭二次仪表（记录仪、积分仪或色谱工作站）。B）关闭检测器电源（同时切断柱箱温度检测器的电源）。C）停止恒流泵工作，然后切断其电源。D）用二次蒸馏水冲洗进样阀的进样孔（在“LOAD”和“INJECT”两个位置）。E）切断实验室工作电源，加满盛液瓶中的流动相，待第二天使用。F）将仪器罩上防尘罩。M.LUO整机保养（二）D）用二次蒸馏水或去离子水输入输液泵，开启泵，流量1mL/min~2mL/min，冲洗泵体、进样阀、检测器流通池数分钟，在冲洗过程切换六通阀数次，使定量管得到清洗。E）拆除替代柱的导管、泵输入端和出口的导管和流通池输入、输出口导管，分别用螺帽密封输液泵出口和流通池输入、输出口。F）拨下总电源接线板的插头，贮存好专用的流动相和样品，用干布擦洗仪器，罩上防尘罩。G）检测器存放地点应干燥，必要时应将其密封存放在干燥容器内，以预防光学系统霉变。M.LUO《输液泵是液相色谱仪的心脏部件，品质再好的泵，若不注意日常保养，其损坏的几率是极高的，将大大降低仪器的使用价值。》a)使用甲醇作流动相，请注意自身保护和环境保护，废液注入空瓶内，集中处理，不得倒入下水道内。b)输液泵使用前，先注意探漏检查，视各密封点和泵体有否漏液。c)在无流动相通入的情况下，严禁启动泵体电机，以免柱塞密封环磨损。d)测试泵流量性能时，用于收集液体的容器，应选用小口瓶颈的容器，防止收集过程中，溶液蒸发，影响测量精度。2.输液泵的保养M.LUOe)金属泵体的输液泵，应尽量避免使用含有卤离子（如KCL、NaCL、NH4CL）的流动相或能产生卤离子的流动相，若必须使用此类流动相，建议使用泵体用非金属材料制造的输液泵。方则使用后，应立即使用去离子水清洗泵体和整个色谱系统的管路。f)使用的流动相必须是HPLC级或分析纯级，特别是配置的流动相，在使用前，必须过滤掉其中的颗粒状杂质和其他物质（使用0.45μm的滤膜过滤）g)长期不使用输液泵，应在最后分析结束时，用注射器吸取去离子水通过专用的泵头清洗孔清洗泵体和柱塞杆。以延长密封圈和宝石柱塞杆的寿命。h)输液泵液路在维修或保养时，应切断仪器电源。非专业维修人员请不要打开机箱罩。输液泵的保养M.LUO《可按下图所示清洗单向阀和泵体》抽取阀体导管单向阀输入端注射器酒精（乙醇）《或去离子水》清洗单向阀和阀体：M.LUO《清洗单向阀》单向阀不易损坏，但长期运行，会有污染物粘在阀芯中的宝石球和宝石座上，为此须拆开阀体，进行清洗。输入端单向阀输出端单向阀宝石座宝石球φ3mm宝石球Φ1.75mmM.LUO《输液泵主要零部件的推荐保养周期》(2)

项目

推荐保养周期备注检查冲洗管路的密封圈

贰年若冲洗柱塞杆时，有冲洗液泄漏，则需要更换密封圈。检查管路过滤器半年长期使用造成过滤器堵塞，请用超声波清洗器清洗检查流动相储液瓶中不锈钢过滤头贰年长期使用后，流动相中的微粒可能会堵塞过滤头，可用压缩空气反吹清洗或用超声波清洗。检查进出口单向阀壹年发现进出口单向阀污染造成压力上不去或设置流量误差过大时，应用超声波清洗器清洗阀芯M.LUO《过滤样品的器具》注射器过滤膜（＜4.5μ）A.有机相－－有机溶剂B.无机相－－无机水溶液过滤器《测试样品的处理》分析样品（注射器内）过滤器已过滤的样品小烧杯若进样量小于20微升，可使用50微升的微量平头注射器（液相专用）。每次进样保持20微升，可使用1毫升的注射器，但必须使用特殊的平头注射针头，每次注射量约0.05～0.1毫升，可一次吸取0.9～1毫升的分析样品，多次进样。（转动进样阀时，不必拔出注射器）

《专用注射器》1mL注射器特殊平头针头（阀附件）50微升微量平头针头注射器六通阀的清洗《当多次进样，特别是注射过高浓样品或黏度较大的样品后，很容易污染阀体。因此当使用久后，必须进行清洗。》

可采用阀体专用的清洗接头（见图），按图所示接在2ml~5ml的注射器上，吸取酒精溶液，然后从进样口注射进去，余液从排液管导出，在“LOAD”和“INJECT”两个位置各进行数次。

最后再用二次蒸馏水冲洗数次用干净的压缩空气或氮气吹净进样口及定量管、废液管中的余液，待用。M.LUO

《清洗六通阀》当六通阀污染严重或通孔有异物进入而堵塞时，则必须将阀拆开，取出其中定子、定子组件、转子密封圈，浸入酒精溶液中清洗，然后再用超声波清洗器在二次蒸馏水浸洗中进行清洗，用干净气体冲洗各通孔后，烘干，重新组合装配。注射器酒精六通阀进样口清洗接头对准紧压阀体M.LUO液相色谱柱的保养重新安装时，可稍稍削去柱管输入端管口一薄层固定相（最好削后用同类固定相填补）然后装上过滤片，拧紧柱接头，封闭两端螺口。固定柱管柱接头卸柱接头取出过滤片清洗过滤片、接头除去污染层（柱头）补充柱填料重新安装柱接头色谱柱常期不使用时，除了进行清洗处理外，还必须在其中充入该柱规定的贮藏液（甲醇、去离子水等）后再密封保存，重新启用时，应用流动相冲洗数分钟后，再接入检测器，以免贮藏液进入流通池。注：液相色谱柱的种类繁多，不同的分析对象，应选用不同的分离柱、流动相和操作波长。在实际应用中用户可参阅专业液相色谱仪文献和书籍中介绍的内容结合本仪器的特点，选择最佳的分析条件，以达到您的分析目的。液相色谱柱的保养

《阳离子分离柱（YSC系列）》无机物污染：

0.2M酒石酸钠淋洗15min→去离子水淋洗10min→1NHNO3淋洗15min→正常淋洗液平衡15～20min→使用有机物污染：

10％乙睛＋90％0.2M酒石酸钠淋洗15min→去离子水淋洗10min→1NHNO3淋洗15min→正常淋洗液平衡15～20min→使用保存：

0.3％H3BO3淋洗10min，然后密封保存。（用去离子水淋洗5min后方能使用）常用离子色谱柱的保养（供参考）3.4.2色谱柱保养5.液相检测器的保养微小的颗粒杂质或薄膜沉积在流通池里，会导致基线噪声的增加或降低灵敏度。此时必须进行清洗处理。一般常规清洗不必拆下流通池，可直接在流通池入口处（即检测器输入端），接上一个专用的注射器接头，依次用去离子水、酒精和3MHNO3冲洗流通池，最后用去离子水反复冲洗数次。检测器出口用玻璃瓶盛接流出的废液。若检测器已长期使用或受到高浓度样品的污染，经上述方法还不能除去污垢，就得取下流通池，按以下步骤拆开进行清洗：3.4.2色谱柱保养液相检测器的保养4）烘干各部件（注意：避免用手直接接触透镜及石英窗）。5）重新装配流通池体。6)按原样装在流通池支架上，并接好导管，并进行试漏。（方法：池体输入端与恒流泵连接，开启恒流泵（流动相用蒸馏水），视各密封点及石英窗口是否有漏液溢出。7）装入紫外检测器机箱内，盖上盖板，并用原螺钉、螺帽固定。注：上述拆洗应有经培训过的专业维修人员进行。

3.4.2色谱柱保养6.使用液相色谱仪应注意的事项开启输液泵后，应放空泵的输出端，排除泵体内的气泡再与进样阀、色谱柱相接，方能使流速稳定。第一次使用的色谱柱或进样过高浓度样品的色谱柱，应在设置流量下，将柱出口放空，老化数小时后，再与检测器的流通池输入端相连接。开启柱箱温度控制器后，应注意色谱柱的最高使用温度，防止过温。检测器开启后，请勿带电搬动位置，防止机内氘灯损坏。流通池流出的废液必须集中收集处理，防止污染环境。3.4.2色谱柱保养使用液相色谱仪应注意的事项必须使用平头专用注射针进入样品，严禁使用普通针尖针头进样。若进样量小于定量管的容量时,可使用微量平口注射器注入六通阀后(不要拔出注射器)，立即转动六通阀，完成一次进样。当信号电压超过1V或满量程信号超过量程范围时，有可能出现“平头峰”，其积分面积及保留时间会产生很大的误差，此时应稀释样品或扩大量程范围后再进样。

液相色谱仪结构复杂，且不同型号的色谱仪，出故障时产生的现象有可能不同，以下罗列的现象仅供参考：现象原因排除方法输液泵压力指示为零(或＜0.5MPa)且柱后无液体流出。1.柱前导管接头漏液2.泵柱室内有大量气泡存在3.贮液瓶内试剂用完4.输液泵未工作1.检查各接口是否有漏液；2.放开泵出口接头；用“清洗”键冲洗泵体；3.添加流动相；4.按输液泵操作方法，检查其工作状态。

常见故障排除现象原因排除方法输液泵压力指示超过规定的范围，且柱后无液体流出 1.分离柱阻力过大(陈旧柱子)2.柱前导管堵塞3.泵柱塞内有少量气泡存在4.柱子进口处过滤膜堵塞5.进样阀手柄未旋到底(处于中间状态)6.导管中有颗粒状固体堵塞1.更换柱子2.从柱后开始逐级向上拆开接头检查3.拆开泵接头，用“清洗”档赶尽气泡。4.拆开柱前接头、更换或清洗过滤膜5.左右旋动六通阀至极限位置6.逐级检查，并更换导管

常见故障排除现象原因排除方法柱前压力逐渐升高1.流动相中存在大颗粒的物质2.样品未经过过滤处理3.柱子输入端滤片污染1.流动相经＜5μ的真空抽滤瓶过滤后再使用2.样品须经滤膜过滤3.拆下柱的滤片用超声波清洗,同时刮去柱口表面被污染的固定相基线大幅度波动(即紫外检测器的输出电平值极不稳定)1.流通池内留有大量的气泡2.流通池漏液3.紫外检测器有故障

1.排除气泡2.检修流通池3.停止恒流泵工作，检查紫外检测器

常见故障排除现象原因排除方法组份峰极小或不出峰1.波长选择不正确2.检测器输出衰减太大3.进样口漏液4.进样阀样品废液管堵塞，样品未进入定量管

5.进样后未按启动键6.定量管容积过小7.样品浓度过稀8.检测器灯源老化或失效9.流动相不纯1.按标准重新选择波长2.重新选择输出量程范围3.修理进样阀4.拆下六通阀上废液管(5#,6#)重新安装5.进样后立即按启动键6.更换大容量定量管7.浓缩样品后再进样8.更换灯源9.选择高纯度的流动相

常见故障排除现象原因排除方法温度指示波动＞±1℃1.设置温度值过低2.柱箱密封盖未盖好3.温度控制器未启动4.柱箱升过高温后，再设置低温5.温控部件有故障6.控温铂电阻接触不良1.设置最低温度应室温以上10℃2.检查柱安装过程3.按起始键(指示灯亮)4.开机后会逐渐稳定(正常现象)5.修理温度控制器6拧紧固定铂电阻引线的螺钉

常见故障排除现象原因排除方法检测器开机时屏幕显示不正常，出现缺字、坐标图形异样、光标无法移动等象。工作电源不正常或仪器附件有强干扰源存在1.检查工作电源电压，采取稳压措施2.关机后重新开机3.检测器微机系统故障常见图谱分析

由于液相色谱仪在工作中受到的影响因素较多，因此出现的色谱图形也较为复杂，除与操作者的使用和仪器所处的环境有关外，还与分离柱、流动相性质、分析对象的性质、所选择的工作条件有关。现仅对与仪器性能有关的常见图谱作一粗略分析，供参考。

图谱分析原因现象说明及排除1.环境温度变化过大2.液流不稳定或有漏液3.在技术指标范围内 1.避开室内通风口位置和发热或制冷源2.观察泵的工作状态,并查漏3.＜1×10-4Au

图谱分析原因现象说明及排除1.外界干扰讯号2.输液泵柱室内有气泡3.流通池内有气泡1.使机壳良好接地，排除附近干扰源2.用“清洗”键或排放阀排除气泡3.拆下输入导管，大流量冲洗池体或在池体出口增加阻力(接长排液导管) 漂移1.仪器在稳定中2.在技术指标范围内3.柱箱升过高温后，再处于室温工作4.检测器工作不稳定1.正常现象2.属正常状态3.将分离柱从柱箱内取出后使用4.元器件工作点不稳定，修理后再使用

图谱分析原因现象说明及排除1.组份分离不佳

a.色谱柱选择有误

b.流动相不符合分析要求

c.柱后导管过长2.波长选择不正确3.流速过大1.重叠峰

a.更换色谱柱

b.重新选择流动相

c.尽可能减短柱后导管长度2.重选波长，增大组份的吸光度差异3.减小流量值1．流动相已用完2．温度控制器失控(恒温开启条件下)3．在工作过程添加流动相 1.突然漂移大多为流动相用完造成2.检查温度控制器3.尽可能不要在工作时加流动相，可采用较大的贮液瓶

图谱分析原因现象说明及排除1．放大器量程选择过大2．放大器无输出3．二次仪表或检测器失效1.减小量程范围(若接积分仪，可减小仪器的满度电压值)2.未按起始键3.更换失效的部件基线无噪声出倒峰1.组份吸光度小于流动相的吸光度2.流动相在该波长的透过率＜100%3.输出讯号极性接反1.属正常情况2.选择百分透过率为100%级别的液相专用流动相3.对换二次仪表讯号线的极性图谱分析原因现象说明及排除1.进样器污染2.流通池污染3.灯源老化4.检测器放大器失调1.进样多次或进过浓样品后未清洗进样阀造成2.清洗池体。多次进样后未清洗池体或久日未使用后重新开机时易发生3.使用时间已大于1000小时4.重调放大器噪声过大1）视“现象”分析故障原因，在工作过程中积累经验。2)正确操作和良好的保养

是减少仪器故障的关键。

内容要点液相色谱仪的应用实例

M.LUOM.LUO1.标样“萘/甲醇”色谱图谱萘2.分析柠檬汽水苯甲酸3.分析冷罐装鲜果水A-K糖山梨酸4.分析饮料中添加剂A-K糖苯甲酸山梨酸糖精各种发色团吸收紫外线的波长功能团发色团波长（nm）醚(ETHER)－O－185烯烃(OLEFIS)－C=C－185硫醚(THIOETHER)－S－194,215胺(AMINE)－NH2195硫醇(THIOL)－SH195二硫化物(DISULFIDE)－S－S194,225嗅化物(BROMIDE)－Br208碘化物(IODIDE)－I260重氮基(AZIDO)C=N－190

酮(KETONE)C=O270－280各种发色团吸收紫外线的波长功能团发色团波长（nm）硫酮(THIOKETONE)C=S205酯(ESTERS)－COOR205醛(ALDEHYDE)－CHO280－300烊基(CARBOXYL)－COOH200－210亚硝酸盐(NITRITE)－ONO220－230,300－40

草酸(OXALICACID)HOOC－COOH250偶氮基(AZO)－N=N－285－400

亚硝基(NITROSO)

－N=O302硝酸盐(NITRATE)－OHO2270(左右)苯(BENAENE)202,255各种发色团吸收紫外线的波长功能团发色团波长（nm）二苯基(DIPHENL)246

萘(NAPHTHALENE)220,275,312蒽(ANTHRACENE)252,375吡啶(PYRIDINE)195,251喹啉(QUINOLINE)227,270,314异喹啉(ISOQUINOLINE)216,266,317常用液相色谱流动相的性质溶剂吸收紫外线的波长(nm)丙酮330二氧杂环乙烷215乙腈190异丙醇205乙醇210甲醇205乙酸208烷乙磺酸(0.005M)230四丁基氢氧化铵(0.005M)215辛烷磺酸230四丙基氢氧化铵195离子色谱仪（液相色谱仪的一种特殊形式）

M.LUO<离子色谱仪概况介绍>

离子色谱仪属于液相色谱仪的一种类型,它是上世纪七十年代创始的一种新的分离分析检测技术。是当今世界最新技术开发和生命科学研究所必须的设备。离子色谱仪广泛应用于水利、电力、环境保护、生命科学等领域的ppb、ppt级超痕量分析，特别是溶液中的糖、酶化学的分析，成功地解决了高压液相色谱仪在高温条件时固定相分解而导致无法分析的弱点。M.LUO

离子色谱仪由输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等四个部份组成：输液系统――由于离子色谱仪的流动相是具有酸性或碱性的水溶液，因此要求输液泵的液路部份为耐腐蚀、耐高压形变的高分子有机材料，目前通常用“聚醚醚酮”（PEEK）来加工（压铸）导管、泵体、接头和密封垫圈，这是整个系统的关键组件，也是制造技术中的难点。M.LUO

M.LUO分离系统――高效分离柱和适合不同领域的色谱柱是离子色谱的关键部件。目前国内无品牌商品，而国外已有40～50种以上的分离柱，国内还处于空白点，也是目前技术攻关的目标之一。由于离子色谱仪常用检测器是“电导检测器”,因此与分离柱相配套的阴、阳离子微膜抑制器是仪器独有的关键部件，其中抑制能力稳定性和全自动再生系统是抑制器制造的一大难点。目前国内仅有个别大专院校在实验室少量生产，国内用户主要靠进口商品。检测器――

常用的检测器是

电导检测器和紫外检测器。

M.LUOJJG823－1993离子色谱仪国家技术监督局（国家质量监督检验检疫总局）×××××－××××

离子色谱仪**************公司M.LUO执行的质量标准离子色谱仪主要技术指标JJG823－1993

M.LUO输液路系统液流量设定值误差0.5mL/min1.0mL/min2.0mL/min3.0mL/min系SS±5%±4%±3%±2%统流量稳定性误差

SR±3%±2%±2%±2%色谱柱设定值误差ΔTS恒温箱温度稳定性TC不超过±3℃（20℃、35℃）不超过±2℃（20℃、35℃）在5MPa液压下无漏液基线稳定性：基线噪声：≤１.5％FS

基线漂移：不超过±3.0％FS离子色谱仪主要技术指标JJG823－1993

最小检出浓度：线性范围：

≥102

（SO4－－、Na＋、Ca＋＋）线性相关系数：

≥0.995（SO4－－、Na＋、Ca＋＋）重复性：（NO3－、

SO4－－、Na＋、Ca＋＋）定性重复性——≤1.5％定量重复性——≤5.0％

M.LUO检测离子Cl－NO3－Na＋Ca＋＋浓度（μg/g）≤0.005

≤0.05≤0.05≤0.10离子色谱仪主要技术指标JJG823－1993

M.LUO分离能力：

对应以下组分离子：

F－→CL－；NO3－→SO4－－；Mg＋＋→Ca＋＋；NH4＋→K＋

分离度（RS）≥1.2洗脱时间:

（F－、CL－、NO2－、PO43－、Br－、NO3－、SO42－）≤18min

（Li＋、Na＋、NH4＋、K＋）≤15min

(Ca＋＋、

Mg＋＋）≤12min主要关键部件

M.LUO1.微膜抑制器加压自动再生（第三代产品）专利高容量自动连续再生微膜化学抑制器（第六代产品）微膜抑制器的工作原理

废液

Na2SO4

再生液(H2SO4)

H+

Na+微膜

Na+OH-H2O洗脱剂(NaOH)OH-Na+Na+OH-H2O

样品(NaF,Na+OH-H+OH-HF,HCLNaCL,Na2SO4)H2OH2SO4

微膜

Na+

H+废液

Na2SO4

再生液(H2SO4)

M.LUO微膜抑制器的功能洗脱剂(NaOH)F-,Cl-,SO42-本底电导(μs)F-CL-SO4

2-

分离柱(NaF,NaCL

(不使用抑制器)Na2SO4Na2SO4,NaOH)时间

抑

制

本底电导(μs)

器

高电导

F-

CL-SO