高三二轮复习生物：专题2 尿素分解菌和纤维素分解菌的分离课件

知识回顾1.菌落的概念？作用？概念：在固体培养基生长，一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体P18作用：鉴定菌种的重要依据2.实验室筛选微生物的原理？P213.微生物的培养？P20将接种后的培养基和一个未接种的培养基（对照组）都放入到37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。4.培养基的制作是否合格？P205.大肠杆菌纯化的方法？微生物计数方法？

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

（一）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：P22该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？

配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。一、基础知识怎样证明此培养基具有选择性呢？P29资料二第3.（二）菌落的计数P22

如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明实验不精确，需要重新实验。（三）设置对照P23旁栏思考目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响。

除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，称为对照实验。通过书中的案例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异如此之大，请分析原因可能有哪些？并通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？P23可能原因实验结果土样不同A和其他同学用一样的土样若A与其他同学结果一样，A说法正确；培养基污染/操作失误将A同学配置的培养基不加土样情况下进行培养，作为空白对照若有菌落，培养基有污染；若无菌落，培养基无污染。1.取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。(2)如何进行无菌操作？P25(1)取样场所？P23富含有机质的pH接近中性的距地表3-8cm的土壤层。二、实验设计（一）土壤取样（二）样品的稀释（三）微生物的培养与观察注意:不同的微生物不同的稀释度P24和P23图回答P24思考旁栏的问题注意:不同的微生物不同的培养条件P24滤膜法

样品中菌数很低时的常用方法，如测定饮水中大肠杆菌数量。将一定体积的水用细菌过滤膜过滤后，将滤膜放到伊红-美蓝

鉴别培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，根据菌落数，通过计算得出水样中大肠杆菌的数量。图中滤膜的孔径应_________(填“大于”“小于”或“等于”)大肠杆菌。相关链接P26课题3分解纤维素的微生物的分离一、基础知识（一）纤维素和纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。知识回顾：（1）分离尿素分解菌的实验流程（初步筛选）：土壤取样—样品的稀释—涂布到选择培养基上（以尿素为唯一氮源）—微生物的培养与观察鉴定方法：脲酶检测法（2）分离纤维素分解菌实验流程（初步筛选）：为了确定得到的是纤维素分解菌还需要：进行发酵产纤维素酶1.对比分离尿素分解菌和纤维素分解菌的实验流程实验原理：①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物生长受到抑制。②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。二、纤维素分解菌的筛选实验设计1.土壤取样富含纤维素的环境中P282.选择培养*（此步可以省略）

选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照。

本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖，其他微生物的生长受到抑制，故有选择作用。这个培养基是否具有选择作用？3.梯度稀释:按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106。4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的固体培养基上5.挑选产生透明圈的菌落参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。

产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈，从产生明显的透明圈的菌落上挑取部分细菌，并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在30～37℃条件下培养，可获得较纯的菌种。方法一（后置）方法二（前置）步骤优点

缺点

颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用

操作繁琐，加入刚果红时会使菌落之间发生混杂操作简便，不存在菌落混杂问题

产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。先培养微生物，再加入刚果红在倒平板时就加入刚果红两种刚果红染色法比较P30

为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_____________

实验，纤维素酶的发酵方法有______发酵和______发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________含量进行定量测定。发酵产纤维素酶

液体

固体

葡萄糖思考：如何确定分离得到的是纤维素分解菌？（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落：对照组在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到实验组产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。（二）分离的结果是否一致：由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。结果分析与评价比较项目分解尿素的细菌纤维素分解菌选择培养基原理培养基类型目的将细菌涂布在只有尿素做氮源的选择培养基上将细菌接种在纤维素粉做碳源的选择培养基上固体培养基液体培养基筛选菌株增加目的菌的浓度对比分解尿素的细菌和纤维素分解菌的培养基鉴定分解尿素的细菌纤维素分解菌原理现象方法细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨使培养基的pH升高。在培养基中加入酚红指示剂会变红。培养基中加入刚果红(CR)，纤维素被纤维素酶分解后红色复合物无法形成，培养基上会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。观察酚红指示剂是否变红观察菌落周围是否出现透明圈脲酶检测法刚果红染色法研究思路（二）统计菌落数目微生物计数通常有：显微镜直接计数（不能区分死活）利用菌落数间接计数1、理论依据：P22中间恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。2、注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值，需培养计算出2个或2个以上的平板菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。为检测外卖糕点的微生物指标，食品监管人员通过无菌操作，将25g样品以及225mL磷酸盐缓冲液一起置于均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，获得均匀稀释液待用。请回答下列问题：若培养基上平均有40个菌落，则1g样品中大致的活菌数量是

个。该结果往往较实际值偏小，原因是

。有人认为，此处统计的菌落总数实际上仅为糕点样品中总细菌数的一部分，理由