DNA重组技术的基本工具923426532课件

DNA重组技术的基本工具DNA重组技术的基本工具1烟草

中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100%

能产生狂犬病抗体蛋白的转基因烟草中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染2每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本，提高了胰岛素的供应量。治疗糖尿病特效药——据WTO调查：2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。胰岛素每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。1979年3基因工程的产物基因工程的产物4定向基因改造设想

设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三定向基因改造设想设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的5基因工程的概念DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的新生物类型和产品剪切→拼接→导入→表达基因工程的概念DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需6

转基因技术实现了一种生物的某些性状在另一种生物中表达。普通棉花抗虫棉转基因技术实现了一种生物的某些性状普通棉花抗7问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。

想一想需要做哪些关键工作？苏云金芽孢杆菌毒蛋白问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。8关键步骤：一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来二：抗虫基因与载体DNA、棉花DNA“缝合”三：抗虫基因进入棉花细胞关键步骤：一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来二：抗虫9上述关键步骤需要哪些工具？一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶二：“分子缝合针”——DNA连接酶三：“分子运输车”——基因进入受体细胞的

载体上述关键步骤需要哪些工具？一：“分子手术刀”——限制10一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1主要来源：原核生物2种类与命名：现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesens）SmaⅠ大肠杆菌（EscherichiacoliR）EcoRⅠ一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1主要来源：113作用特点：识别特定核苷酸序列,切断磷酸二酯键具有特异性。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子3作用特点：识别特定核苷酸序列,切断磷酸二酯键12T磷酸二酯键1234512345AT磷酸二酯键1234512345A13GobackGoback14限制酶的识别序列：Goback限制酶的识别序列：Goback15限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。想一想限制酶所识别的序列有什么特点？限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱165.作用结果：产生黏性末端或平末端5.作用结果：产生黏性末端或平末端17SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端18

EcoRⅠ黏性末端黏性末端GobackEcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback19

EcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback重复演示EcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback重复演示20二、“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.②作用原理：催化磷酸二酯键形成二、“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:21可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·co22

T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效23常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点24课下作业1.整理、复习本节课的学习的内容；构建知识框架。2.做课后作业：思考与探究。课下作业1.整理、复习本节课的学习的内容；构建知识框架。25DNA重组技术的基本工具923426532课件261、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。12月-2212月-22Saturday,December10,20222、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。10:18:1910:18:1910:1812/10/202210:18:19AM3、越是没有本领的就越加自命不凡。12月-2210:18:1910:18Dec-2210-Dec-224、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。10:18:1910:18:1910:18Saturday,December10,20225、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。12月-2212月-2210:18:1910:18:19December10,20226、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。10十二月202210:18:19上午10:18:1912月-227、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。。十二月2210:18上午12月-2210:18December10,20228、业余生活要有意义，不要越轨。2022/12/1010:18:1910:18:1910December20229、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。10:18:19上午10:18上午10:18:1912月-2210、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。12/10/202210:18:19AM10:18:1910-12月-2211、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。12/10/202210:18AM12/10/202210:18AM12月-2212月-2212、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。10-Dec-2210December202212月-2213、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异纸上画饼充饥，无补于事。Saturday,December10,202210-Dec-2212月-2214、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自己眷恋了。12月-2210:18:1910December202210:18谢谢大家1、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。12月-2212月27DNA重组技术的基本工具DNA重组技术的基本工具28烟草

中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100%

能产生狂犬病抗体蛋白的转基因烟草中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染29每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本，提高了胰岛素的供应量。治疗糖尿病特效药——据WTO调查：2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。胰岛素每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。1979年30基因工程的产物基因工程的产物31定向基因改造设想

设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三定向基因改造设想设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的32基因工程的概念DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的新生物类型和产品剪切→拼接→导入→表达基因工程的概念DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需33

转基因技术实现了一种生物的某些性状在另一种生物中表达。普通棉花抗虫棉转基因技术实现了一种生物的某些性状普通棉花抗34问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。

想一想需要做哪些关键工作？苏云金芽孢杆菌毒蛋白问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。35关键步骤：一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来二：抗虫基因与载体DNA、棉花DNA“缝合”三：抗虫基因进入棉花细胞关键步骤：一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来二：抗虫36上述关键步骤需要哪些工具？一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶二：“分子缝合针”——DNA连接酶三：“分子运输车”——基因进入受体细胞的

载体上述关键步骤需要哪些工具？一：“分子手术刀”——限制37一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1主要来源：原核生物2种类与命名：现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesens）SmaⅠ大肠杆菌（EscherichiacoliR）EcoRⅠ一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1主要来源：383作用特点：识别特定核苷酸序列,切断磷酸二酯键具有特异性。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子3作用特点：识别特定核苷酸序列,切断磷酸二酯键39T磷酸二酯键1234512345AT磷酸二酯键1234512345A40GobackGoback41限制酶的识别序列：Goback限制酶的识别序列：Goback42限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。想一想限制酶所识别的序列有什么特点？限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱435.作用结果：产生黏性末端或平末端5.作用结果：产生黏性末端或平末端44SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端45

EcoRⅠ黏性末端黏性末端GobackEcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback46

EcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback重复演示EcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback重复演示47二、“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.②作用原理：催化磷酸二酯键形成二、“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:48可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·co49

T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效50常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点51课下作业1.整理、复习本节课的学习的内容；构建知识框架。2.做课后作业：思考与探究。课下作业1.整理、复习本节课的学习的内容；构建知识框架。52DNA重组技术的基本工具923426532课件531、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。12月-2212月-22Saturday,December10,20222、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。10:18:1910:18:1910:1812/10/202210:18:19AM3、越是没有本领的就越加自命不凡。12月-2210:18:1910:18Dec-2210-Dec-224、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。10:18:1910:18:1910:18Saturday,December10,20225、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。12月-2212月-2210:18:1910:18:19December1