微生物学：病毒课件

项目二病毒（Viruses）一、大小与形态个体小（测量单位：纳米）→电镜观察不同病毒的毒粒大小差别很大（如痘病毒颗粒直径约为300nm，口蹄疫病毒颗粒直径10-22nm）形态大致可分球形、杆形和其他形状（如蝌蚪状，卵圆形丝状、砖形、子弹形等）植物病毒多呈杆形或丝状，少数呈球状。噬菌体多呈蝌蚪状，也有球状和丝状。大都病毒可通过细菌滤器。动物病毒多呈球形、卵圆形或砖形。几种病毒的形态和大小二、毒粒的化学组成脂类基本化学组成碳水化合物核酸蛋白质病毒颗粒在化学上表现为核蛋白三、结构核酸衣壳囊膜纤突统称核衣壳所有（真）病毒共有衣壳衣壳囊膜核酸纤突衣壳的结构单位位于毒粒中心，构成其基因组。一种病毒只有一种类型的核酸：RNA或DNA。可能单股或双股；可能线状或环状；可能分节段或不分节段。核酸

无衣壳的病毒核酸仍具有感染性，且感染范围更广，但感染力较弱。衣壳的功能保护病毒核酸免受核酸酶及其它理化因子的破坏。决定病毒感染的特异性，与易感细胞表面存在的受体具特异性亲和力，促使病毒粒子的吸附和入侵。决定病毒的抗原性，能刺激机体产生相应的抗体。毒粒宿主细胞有繁殖性的病毒基因组病毒基因组复制、表达病毒核酸和蛋白质装配成具感染性的毒粒释放至细胞外提供原料，能量及生物合成场所三、病毒增殖（一）核酸复制具有感染性的毒粒消失1、吸附毒粒易感细胞静电吸引无特异性，可逆吸附病毒表面蛋白与细胞受体结合特异性，不可逆吸附2、侵入囊膜与细胞膜融合胞饮作用直接侵入有囊膜病毒无囊膜病毒侵入方式3、脱壳

病毒侵入细胞后，囊膜和/或衣壳除去而释放出核酸的过程。毒粒消失，失去原有的感染性，进入隐蔽期。脱壳是病毒基因组进行功能表达所必需的。隐蔽期自毒粒在受染细胞内消失到细胞内出现新的感染性毒粒的时间。

不同病毒的隐蔽期长短不同如：DNA动物病毒的隐蔽期为5～20hRNA动物病毒为2～10h（四）动物病毒的繁殖特点①完整病毒穿过细胞膜的移位方式；②细胞的内吞功能；③毒粒包膜与细胞质膜的融合；1、侵入5、装配与释放新合成的毒粒结构组分组装成完整的病毒颗粒，称做病毒的装配,亦称成熟。成熟的子代病毒颗粒依一定的途径释放到细胞外。有囊膜病毒在出芽释放过程中获得囊膜。出芽细胞溶解装配与释放有包膜病毒的装配与释放有时也是同时完成的病毒的实验室检查一、病料的采集防止病料污染注意问题采集适宜的病料：含毒量最多注意采集病料的时间低温保存与运送高速离心采集时无菌操作病料处理抗生素细菌滤器过滤除菌几乎所有的禽源病毒都能在禽胚上增殖常用接种途径羊膜腔接种绒毛尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种细胞类型原代细胞传代细胞系二倍体细胞株将新鲜动物组织经胰酶等消化获得的单个细胞染色体数目异常，可在体外无限分裂增殖将原代细胞连续传代后获得，染色体数目不变（二）病毒的鉴定1、电镜（EM）形态观察：一般不用2、包涵体检查3、细胞病变效应（CPE）4、免疫学试验血清学试验：HA及HI试验、琼扩试验、中和试验等免疫标记技术：荧光抗体、酶标抗体等包涵体

病毒感染细胞后，于细胞内形成的一种特殊结构，染色后可用光学显微镜观察到.特殊名称：天花病毒包涵体称为顾氏小体（Guarnier），狂犬病毒包涵体称为内基氏小体（Negri），烟草花叶病毒包涵体称为X体包涵体是某些病毒对敏感机体或细胞的病理学特征，其位置、数量、大小、形态、染色特性等可作为病毒鉴定的依据

包涵体可在细胞核或细胞浆内；可一个或多个；有的较大，有的较小；或圆形或无规律形态；可嗜酸（伊红染成粉红色），可嗜碱（苏木精染成蓝色）病毒的包涵体图病毒蚀斑（plaque）：又称空斑，是病毒在表面覆盖有营养琼脂的细胞单层上形成肉眼可见的局部病损区域。是多数动物病毒经敏感细胞培养引起的细胞显微表现的改变CPE是病毒在细胞内增殖的重要指标，具有种的特征。病毒的纯化及量的测定CPE类型：细胞聚集、圆缩、脱落，形成合胞体细胞病变效应（cytopathiceffect—

CPE）通常认为一颗病毒形成一个蚀斑第四节常见的动物病毒重点：病毒的致病性微生物学检验：主要采用免疫学方法口蹄疫病毒（微RNA病毒科口疮病毒属）血清型（7个）：A型、0型、C型、SAT（1型、2型、3型）、亚洲I型不耐酸肉品自然酸化去毒致病性自然条件下，偶蹄兽最易感猪、牛、羊等的口蹄疫（口腔黏膜，舌，蹄，间或乳房部位皮肤发生水疱）实验室检查动物接种血清定型病料乳鼠（3d、9d）皮下或腹腔注射均死亡区别于猪水疱病病毒（3d死、9d不死）中和试验狂犬病病毒（弹状病毒科弹状病毒属）从自然病例分离到的病毒街毒家兔毒力减弱固定毒形成胞浆包涵体（内基氏小体）：位于脑组织致病性脑内接种连续传代可感染各种温血动物；犬、猫及食肉动物最易感狂犬病（神经症状）带毒动物咬伤麻痹型兴奋型实验室检查包涵体检查荧光抗体检查脑组织切片或触片Seller氏染色镜检胞浆内基氏小体：鲜红色（间质呈粉红色；红细胞呈橘红色）脑组织或唾液腺切片或触片荧光抗体染色荧光显微镜观察：荧光犬细小病毒（细小病毒科细小病毒属）血凝性：凝集猪、猴红细胞致病性主要感染犬、以断奶幼犬最易感肠炎型心肌炎型实验室检查免疫试纸条猪瘟病毒（黄病毒科瘟病毒属）致病性只感染猪典型猪瘟（急性型）非典型猪瘟（亚急性型及慢性型）实验室检查典型病例：病毒鉴定（荧光抗体或酶标抗体等）非典型病例：血清抗体检查猪传染性胃肠炎病毒（冠状病毒科冠状病毒属）致病性只感染猪，10d以内仔猪高发病率和高致死率表现呕吐、腹泻实验室检查病毒分离鉴定血清抗体检查采集发病期及康复期双份血清中和试验或ELISA检测抗体病料荧光抗体或ELISA快速检测细胞培养中和试验或荧光抗体鉴定新城疫病毒（副粘病毒科副粘病毒属）血凝性凝集多种禽类及哺乳动物红细胞培养致病性鸡胚（10日龄）：尿囊腔接种侵害鸡、火鸡、鹅等病毒毒力型中毒型弱毒型强毒型表现有呼吸道、消化道、神经症状，产蛋下降实验室检查病毒分离鉴定血清抗体监测病料鸡胚培养收集尿囊液HA及HI试验毒力测定）（HI试验小鹅瘟病毒（细小病毒科细小病毒属）培养初分离番鸭胚鹅胚12—14日龄尿囊腔接种致病性侵害1m以内雏鹅，雏番鸭也可感染发病特征病变：回肠部位形成肠栓实验室检查病毒分离鉴定病料鹅胚中和试验阳性血清死亡率大于50%小于10%鸭瘟病毒（疱疹病毒科）培养初分离：鸭胚（9—12日龄）绒毛尿囊接种膜上白色痘斑，胚体食死亡，肝有坏死灶形成核内包涵体致病性主要侵害鸭，鹅也可感染发病腹泻、流泪、两腿麻痹、部分鸭头肿大（病变：消化道充血出血，后