《实验室生物安全通用要求》培训班

GB-19489–2004-《实验室生物安全通用要求》培训班

中国CDC传染病所

什么是生物危险生物危险是指由生物因子形成潜在的危险，当在实验室中处理致病微生物时，或处理基因重组过程中产生的可能具有潜在生物危害的新未知基因时，或在处理致病因子的产物时，这些病原体有可能对实验室的工作人员造成危害。当实验室硬件条件缺失、管理制度不完善以及不规范的操作程序，导致实验室致病因子泄漏和逃逸。则可能造成灾难性的后果。什么是生物安全生物安全是指避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。什么是生物安全实验室生物安全实验室是指在研究传染性疾病或微生物时能够避免病原体意外伤害的实验室气溶胶感染主要途径

吸球（即吸管）操作。吸球是微生物学方面最基本的器具，用吸球操作时，能导致气溶胶发生，例如由吸管中向外排液，用力过猛则会使液滴飞溅，弹离液体或固体培养基表面，释放出大量微粒；或者，当吸管末端含有物快排尽时，可能产生气泡，尤其是富于蛋白性悬液更易形成气泡，而气泡破裂就成为气溶胶。离心沉淀时，沉淀管装量太满，管盖未盖或不严，以及离心操作过操作过程中离心管破裂，都可导致气溶胶散播。

气溶胶感染主要途径注射器操作时，当抽吸后或者拨出时，注射器针头由于颤动而散发出液体微粒。用接种针去粘沾液体时，液柱断裂。镜检涂片时，液丝断裂。传染性材料倾注出来。打开培养皿盖时，盖内壁往往有传染性的凝结水薄膜，因破裂而散播气溶胶。气溶胶感染主要途径开安瓿时，如瓿内为液体，则当锉刀锉断瓿颈后，即可能发生气溶胶；如瓿内为干燥的活菌或菌种，特别是用真空熔封的，更易产生溶胶。机械振荡和超声振荡，或者研磨、浸解，拨出研磨柱时，都可形成气溶胶。装有液体容器的破损或液体益出。用超声波清洗机清洗污染器具时，也可能发生大量气溶胶。在粗糙的培养基表面涂布菌液时。高压灭菌器在灭菌前的排气。从玻璃或离心管上拨出棉塞时。处理关过受感染动物的笼子。各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数超声波处理5×10-7~9-10-5混合器（开口）1×10-6（开始1min关闭，然后打开）~2×10-3（从开始即打开）混合器（闭锁）9×10-9（螺口罩）~2×10-8*（塑料罩）液体下滴2×10-6（90cm高）由吸管混合2×10-6（无吹出）~1×104（有吹出）离心作用产生的飞沫2×10-6瓶子的振荡7×10-9~2×10-3各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数干燥后安瓿的开封肉汤2×10-9半血清4×10-9-9从试管上取下棉塞6×10-9~2×10-7白金耳放在火焰上加热3×10-9~3×10-7把冻结干燥的粉末状物倒入别的试管2×10-11各种操作的气溶胶飞散系数操作飞散系数把冻结干燥的安瓿的断1、以牛奶肉汁悬浮液作原料时3×10-92、以加营养的肉汁作原料时3×10-93、以羊的血清作原料时4×10–104、用浸酒精纱布覆盖时05、用干燥灭菌纱布覆盖时6×10-11各种操作的的气溶胶飞飞散系数操作飞散系数捣碎器1、开放式2×10-32、运动中拧紧盖，停转后1min打开1×10-6

3、用塑料罩罩着进行2×10-84、拧紧盖进行9×10-9可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险皮下注射针头意外的注射．不要修剪针头·使用针头可锁定式注射器以防止针头和针管的脱肉，或使用针头或针管为一体的一次性注射器．．运用良好的实验技术，如：一小心地将液体注入针管以尽可能地减少气泡或使培养液起泡可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险皮下注射针头意外的注射一避免用注射罪搅拌传染性液体；否则，应保证针尖在药管内液体表层下，避免用力过度。一当从有橡皮塞的瓶子上取下针头时，应用经适当的消毒剂浸泡了的棉团包住针头和瓶塞．一垂直地将注射器内的多余的液体和气泡排人浸有适当的消毒剂的棉团或装有棉花的小瓶中.可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险皮下注射针头。处理传染性物质时，所有的操作应在生物安全操作箱内进行。。给动物注射时应对动物加以控制。进行鼻口注射时，使用钝头针头或套管。使用生物安全操作箱。用后进行高压灭菌处理并保证使用正确的废物处理方法。离心机会产生烟雾，喷溅和试管破裂使用封闭式甩桶（安全杯）可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险离心机会产生烟雾，喷溅和试管破裂使用封闭式甩桶（安全杯）超速离心机会产生雾，喷溅和试管破裂在离心机和真空泵之间安HEPA过滤器。对每台马达的盍时间进行措施以减少机械故障在生物安全操作箱内拆卸甩干桶。可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险厌氧罐爆传染性物质的喷溅确保催化剂周围的金属线外壳的完完整烘干箱内爆、玻璃碎渣和传染性物质的喷溅放在坚固的线圈内均化吕，组织碾磨机产生烟雾和泄漏在生物安全操作箱内操作。使用特制的型号以防止马达轴承和0形垫圈的泄漏或使用stomacher.可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险近距离声波定位器，超声波清洗器听力损害和皮肤发炎确保操作时保持距离以避免次谐波的危害。戴上保护手套，防止高频以及洗涤剂的危害。培养基搅拌器，摇动器，产生烟雾溢出和泄漏在生物安全操作箱内或特制的严格密封的容器内操作。搅拌器用强力带螺旋塞的培养基玻璃瓶，如果需要，安装有过滤保护咀的出口并盖严。可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险冷冻箱产生烟雾和直接接触污染源使用0型连接器，封闭整个冷冻箱。使用空气过滤器以保护真空管。使用有效的消毒方法，如化学药剂家用冰箱有易燃物品（如自动温度调整器，电灯开关，加热管等），这些可导致箱内储存的易燃溶剂发出的蒸汽的燃烧在家用冰箱上放上警告标志：“在此冰箱内严禁存放易燃溶剂”。在冰箱的外部安装人工温度控制器并在冰箱箱体上电线经过的位置加以封闭。注意：自动除霜不能这样改造。可能产生危危险的设备备和操作方方法设备危险如何防止和减少危险水浴器具微生物的滋生，某些金属接触叠氮化钠后可产生易爆炸的混合物进行定期的洗涤和消毒。不能用叠氮化钠防止微生物的滋生生物安全实实验室微生生物操作技技术规范实验室事故故、伤害以以及与工作作有关的感感染主要是是由于人为为失误、不不良实验技技术以及仪仪器使用不不当造成的的，实验室室样品的收收集以及内内部传递和和接收不当当时，都能能够带来使使相关人员员感染的危危险。应建建立完善的的管理制度度与操作细细则，避免免或尽量减减少这类问问题的发生生。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范样品容器样品容器可可以是玻璃璃的，但最最好使用塑塑料制品。。样品容器器应当坚固固，正确地地用盖子或或塞子盖好好后应无泄泄漏。在容容器外部不不能有残留留物。容器器上应当正正确地张贴贴标签以便便于识别。。样品的要要求或说明明书不能够够卷在容器器外面，而而是要分开开放置，最最好放置在在防水的袋袋子里。样样品在设施施内的传递递为了避免免意外泄漏漏或溢出，，应当使用用盒子等二二级容器，，并将其固固定在架子子上使装有有样品的容容器保持直直立。二级级容器可以以是金属或或塑料制品品，应该可可以耐高压压灭菌或耐耐受化学消消毒剂的作作用。密封封口最好有有一个垫圈圈，要定期期清除污染染。样品接收需要接收大大量样品的的实验室应应当指定专专门的房间间或空间。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范包装开启接收和打开开样品的人人员应当了了解样品对对身体健康康的潜在危危害，并接接受过如何何采用常规规预防措施施的培训，，尤其是处处理破碎或或泄漏的容容器时更应应如此。样样品要在生生物安全柜柜内打开，，并准备好好消毒剂。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范移液管和移移液辅助器器的使用1．应使用用移液辅助助器，严禁禁用口吸取取。2．所有移液管管应带有棉棉塞以减少少移液器具具的污染。。3．不能向向含有感染染性物质的的溶液中吹吹人气体。。4．感染性物质质不能够用用移液管反反复吹吸混混合。5．不能将将液体从移移液管内用用力吹出。。6．刻度对对应(Mark——to—mark)移液管不需需要吹出最最后一滴液液体，因此此最好使用用这种移液液管。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范移液管和移移液辅助器器的使用7．污染的的移液管应应该完全浸浸泡在盛有有适当消毒毒液的防碎碎容器中。。移液管应应当在消毒毒剂中浸泡泡18／，，24小时时后再进行行处理。8．盛放废废弃移液管管的容器应应当放在生生物安全柜柜内，而不不能放在外外面。9．固定有有皮下注射射针头的注注射器不能能够用于移移液。应当当用钝头导导管替代针针头。可以以用工具打打开瓶塞后后再用移液液管取样，，从而避免免使用注射射器和针头头。10．为了了避免感染染性物质从从移液管中中意外滴出出而扩散，，在工作台台面应当放放置一块浸浸有消毒液液的布或吸吸有消毒液液的纸，使使用后将其其高压灭菌菌或按感染染性废物处处理。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范避免感染性性物质的扩扩散1．为了避避免转移物物质洒落，，微生物接接种环的直直径应为2—3mm并完全封闭闭，手柄(shanks)的长度应小小于6cm以减小振动动。或者采采用一次性性灭菌棉签签。2．使用封封闭式微型型电加热器器消毒接种种环能够避避免在本生生灯的明火火上加热所所引起的感感染性物质质爆溅。最最好使用不不需要再进进行消毒的的一次性接接种环。3．为为了避避免产产生气气泡和和气溶溶胶的的扩散散，不不要在在玻片片上进进行触触酶试试验，，而应应当采采用试试管、、毛细细管或或盖玻玻片法法。4．准准备高高压灭灭菌和和／或或处理理的废废弃样样品和和培养养物应应当放放置在在防漏漏的容容器内内，如如实验验室废废物袋袋。5．在在每一一阶段段工作作结束束后，，必须须采用用适当当的消消毒剂剂清除除工作作区的的污染染。生物安安全实实验室室微生生物操操作技技术规规范生物安安全柜柜的使使用1．应应参考考国家家标准准和相相关文文献，，介绍绍生物物安全全柜的的使用用方法法和局局限性性。并并发给给工作作人员员书面面的操操作步步骤、、安全全或操操作手手册。。应明明确注注明当当出现现溢出出、破破损或或不良良操作作时，，安全全柜就就不再再能保保护操操作者者。2．生生物安安全柜柜必须须运行行正常常时才才能使使用。。3．生生物安安全柜柜在使使用中中不能能打开开玻璃璃观察察挡板板。4．安安全柜柜内应应尽量量少放放置器器材或或样品品，不不能阻阻碍后后部的的气流流循环环。样样品在在放人人安全全柜内内的工工作区区前需需要清清除表表面污污染。。5．安安全柜柜内不不能使使用酒酒精灯灯，否否则燃燃烧产产生的的热量量会干干扰气气流并并可能能损坏坏过滤滤器。。允许许使用用微型型电加加热器器，但但最好好使用用一次次性无无菌接接种环环。生物安安全实实验室室微生生物操操作技技术规规范生物安安全柜柜的使使用6．所所有工工作必必须在在工作作台面面的中中后部部进行行，并并能够够通过过观察察挡板板看到到。7．尽尽量减减少操操作者者身后后的人人员流流动。。8．操操作者者不应应反复复移出出和伸伸进手手臂以以免干干扰气气流。。9．实实验记记录、、移液液管以以及其其他物物品不不能够够阻碍碍前面面的空空气格格栅，，因为为这将将干扰扰气体体流动动，引引起物物品的的潜在在污染染和操操作者者的暴暴露。。10．．工作作完成成后以以及每每天下下班前前，应应使用用适当当的消消毒剂剂对生生物安安全柜柜的表表面进进行擦擦拭。。11．．工作作开始始前和和结束束后，，安全全柜的的风机机应至至少运运行5分钟钟。生物安安全实实验室室微生生物操操作技技术规规范避免感感染性性物质质的注注入1．通通过认认真练练习和和仔细细操作作，可可以避避免破破碎玻玻璃器器皿的的意外外刺伤伤。尽尽可能能用塑塑料制制品代代替玻玻璃制制品。。2．皮皮下注注射针针头、、玻璃璃吸管管以及及破碎碎的玻玻璃均均可能能将感感染性性物质质注入入体内内。3．以以下两两点可可以减减少针针刺事事故：：(a)注射时特别别小心(b)减少使用注注射器和针针头；许多多操作可用用带有钝头导管管的注射器器替代。可可用一些简简单的装置置来打开瓶瓶塞，然后后使用吸管管取样。4．不要重重新给用过过的针头戴戴护套。一次性注射射器用完后后，不必将将针头从注注射器上取取下，应丢丢弃在防穿穿透的带盖盖容器中。。5．应当用用塑料吸管管代替玻璃璃吸管。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范血清的分离离1．只有经经过严格培培训的人员员才能进行行这项工作作。2．操作时时应戴手套套以及眼睛睛和黏膜的的保护装置置。3．规范的的实验操作作技术可以以避免或尽尽量减少喷喷溅和气溶溶胶的产生生。血液和和血清应当当小心吸取取，而不能能倾倒。严严禁用口吸吸液。4．移液管管使用后应应完全浸入入次氯酸盐盐或其他适适当的消毒毒液中。移移液管应在在消毒液中中浸泡至少少18小时时，然后再再丢弃或灭灭菌清洗后后重复使用用。5．带有血血凝块等的的废弃样品品管，在加加盖后应当当放在适当当的防漏容容器内高压压灭菌和／／或焚烧。。6．为了了清洗喷溅溅和溢出的的血样，应应当备有每每天新鲜配配制的次氯氯酸盐溶液液。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范离心机的使使用1．在使用用实验室离离心机时，，仪器良好好的机械性性能是保障障微生物安安全的前提提条件。2．应按照照操作手册册来操作离离心机。3．离心机机放置的高高度应当使使低于平均均身高的工工作人员也也能够看到到离心机腔腔体内部，，以正确放放置十字轴轴和离心管管套。4．离心管管和盛放离离心样品的的容器应当当由厚壁玻玻璃制成，，或最好为为塑料制品品，并且在在使用前应应检查是否否破损。5．用于离离心的试管管和样品容容器应当始始终牢固盖盖紧(最好好使用螺旋旋盖)。6．离心管管套的装载载、平衡、、密封和打打开必须在在生物安全全柜内进行行。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范离心机的使使用7．离心管管套和十字字轴应按重重量配对，，并在装载载离心管后后正确平衡衡。8．操作指指南中应给给出液面距距离心管边边缘需要留留出的空间间大小。9．空离心心管套应当当用蒸馏水水或乙醇(异丙醇，，70％)平衡。盐盐溶液或次次氯酸盐溶溶液对金属属具有腐蚀蚀作用，因因此不能使使用。10．对于于危险度3级和4级级的微生物物，必须使使用可封口口的离心离离心管套(安全杯)。11．当使使用固定角角离心转子子时，必须须小心不能能将离心管管装得过满满，否则会会导致漏液液。12．应当当每天检查查离心机内内转子部位位的腔壁是是否被沾染染或弄脏。。如污染明明显，应重重新评估离离心操作规规程。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范离心机的使使用13．应当当每天检查查离心转子子和离心管管套是否有有腐蚀或细细微裂痕。。14．每次次使用后，，要清除离离心管套、、转子和离离心机腔的的污染。15．使用用后离心管管套应当倒倒置存放使使平衡液流流干。16．当使使用离心机机时，可能能喷射出可可在空气中中传播的感感染性颗粒粒。如果将将离心机放放置在传统统的前开式式的I级或Ⅱ级生生物安全柜柜内，这些些粒子由于于运动过快快而不能被被安全柜内内的气流截截留。而在在Ⅲ级生物物安全柜内内封闭离心心时，可以以防止生成成的气溶胶胶广泛扩散散。但是，，良好的离离心操作技技术和牢固固加盖的离离心管可以以提供足够够的保护，，以防止感感染性气溶溶胶和可扩扩散粒子的的产生。生物安全全实验室室微生物物操作技技术规范范匀浆器＼＼摇床＼＼搅拌器器和超声声处理器器的使用用1．实验验室不能能使用家家用(厨厨房)匀匀浆器，，因为它它们可能能泄漏或或释放气气溶胶。。使用实实验室专专用搅拌拌器和消消化器(stomacher)更为安全全。2.盖子、杯杯子或瓶瓶子应当当保持正正常状态态，没有有裂缝或或变形。。盖子应应能封盖盖严密，，衬垫也也应处于于正常状状态。生物安全全实验室室微生物物操作技技术规范范3．在使用用匀浆器、、摇床和超超声处理器器时，容器器内会产生生压力，含含有感染性性物质的气气溶胶就可可能从盖子子和容器间间隙逸出。。由于玻璃璃可能破碎碎而释放感感染性物质质并伤害操操作者，建建议使用塑塑料容器，，尤其是聚聚四氟乙烯烯(po1ytetranuoroe-thylene，，PTFE)容器。4．使用匀匀浆器、摇摇床和超声声处理器时时，应该用用一个结实实透明的塑塑料箱覆盖盖设备，并并在用完后后消毒。可可能的话，，这些仪器器可在生物物安全柜内内覆盖塑料料罩进行操操作。5．操作结结束后，应应在生物安安全柜内打打开容器。。6．应对使使用超声处处理器的人人员提供听听力保护。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范组织研磨器器的使用1．使用玻玻璃研磨器器时应戴手手套，并用用一块具有有吸收性的的软物包住住研磨器。。塑料(聚聚四氟乙烯烯)研磨器器更加安全全。2．操作和和打开组织织研磨器时时应当在生生物安全柜柜内进行。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范冰箱与冷柜柜的维护和和使用1．冰箱、、低温冷柜柜和干冰柜柜应当定期期除霜和清清洁，应清清理出所有有在储存过过程中破碎碎的安瓿和和试管等物物品。清理理时应戴厚厚橡胶手套套并进行面面部防护，，清理后要要对内表面面进行消毒毒。2．储存在在冰箱内的的所有容器器应当清楚楚地标明内内装物品的的学名、储储存日期和和储存者的的姓名。未未标明的或或废旧物品品应当高压压灭菌并丢丢弃。3．应当保保存一份冻冻存物品的的清单。4．除非采采用有效防防爆措施，，否则冰箱箱内不能放放置易燃溶溶液并冰箱箱门上应明明确标示。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范装有冻干感感染性物质质安瓿的开开启当打开装有有冻干物的的安瓿时必必须小心，，因为其内内部可能处处于负压，，瞬间进入入的空气可可能使一些些物质扩散散进入空气气。安瓿应应该在生物物安全柜内内打开，建建议按下列列步骤打开开安瓿：1．首先清清除安瓿外外表面的污污染。2．如果管管内有棉花花或纤维塞塞，可以在在管上靠近近棉花或纤纤维塞的中中部锉一痕痕迹。3．用一团团酒精浸泡泡的棉花将将安瓿包起起来以保护护双手，然然后手持安安瓿从标记记的锉痕处处打开。4．将顶部部小心移去去并按污染染物处理。。5．如果塞塞子仍然在在安瓿上，，用消毒镊镊子除去。。6．缓慢向向安瓿中加加入液体来来重悬冻干干物，避免免出现泡沫沫。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范装有感染性性物质安瓿瓿的储存装有感染性性物质的安安瓿不能浸浸入液氮中中，因为这这样会造成成有裂痕或或密封不严严的安瓿在在取出时破破碎或爆炸炸。如果需需要低温保保存，安瓿瓿应当储存存在液氮上上面的气相相中。此外外，感染性性物质应储储存在低温温冰柜或干干冰中。当当从冷冻储储存器中取取出安瓿时时，实验室室工作人员员应当进行行眼睛和手手的防护。。以这种方方式储存的的安瓿在取取出时应对对外表面进进行消毒。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范样品的收集集、标记和和运输1．始终遵遵循常规预预防措施；；所有操作作均要戴手手套2．应当由由受过培训训的人员来来采集病人人或动物的的血样。3．在静脉脉抽血时，，应当使用用一次性的的安全的抽抽真空设备备取代传统统的针头和和注射器，，因为这样样可以使血血液直接采采集到带塞塞的运输管管和／或培培养管中。。用完后自自动废弃针针头。4．装有样样品的试管管应置于适适当容器中中运至实验验室，在实实验室内部部转运也应应这样说明明书应当分分开放置在在防水袋或或信封内。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范玻璃器皿和和“锐器””1．尽可能能用塑料制制品代替玻玻璃制品。。只能用实实验室级别别(硼硅酸酸盐)的玻玻璃，任何何破碎或有有裂痕的玻玻璃制品均均应丢弃。。2．不能将将皮下注射射针作为移移液管使用用。可以使使用钝头导导管。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范用于显微观观察的薄膜膜和涂片用于显微观观察的血液液、唾液和和粪便样品品在固定和和染色时，，并不必杀杀死涂片上上的所有微微生物和病病毒。应当当用镊子拿拿取这些东东西，恰当当储存，并并经清除污污染和／或或高压灭菌菌后再丢弃弃。自动化仪器器(超声处处理器、涡涡旋混合器器)1．为了避避免液滴和和气溶胶的的扩散，这这些仪器应应采用封闭闭型的。2．排出物物应当收集集在封闭的的容器内进进一步高压压灭菌和／／或废弃。。3，在每一一步完成后后应根据操操作指南对对仪器进行行消毒。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范组织1．组织样样品应当采采用福尔马马林固定。。小块样品品，如针头头活检样品品，能够在在几个小时时内固定和和消毒，但但是较大样样品则可能能需要几天天时间。2．应当避避免冰冻切切片。如果果必须进行行冰冻切片片，应当罩罩住冰冻机机，操作者者要戴安全全防护罩(面具)。。清除污染染时，仪器器的温度要要升至20~C。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范生物安全实实验室消毒毒与灭活消毒和灭菌菌的基本常常识对于实实验室生物物安全是至至关重要的的。生物安安全中关于于清除污染染的特殊要要求要根据据实验工作作的类型和和所操作感感染性物质质的特性来来决定。因因此，有必必要利用已已知的普通通信息来确确立更具体体的和标准准化的程序序，以满足足某些特殊殊实验室中中各种不同同生物危害害水平的需需求。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范清除局部环环境的污染染需要联合合应用液液体和气气体消毒毒剂来清清除实验验室空间间、用具具和设备备的污染染。清除除表面污污染时可可以使用用次氯酸酸钠(Na0C1)溶液；含含有1％％有效氯氯的溶液液适于普普通的环环境卫生生设备，，但是当当处理高高危环境境时，建建议使用用高浓度度(5g／L)溶液。用用于清除除环境污污染时，，含有3％过氧氧化氢的的溶液也也可以作作为漂白白剂的代代用品。。可以通通过加热热多聚甲甲醛或煮煮沸福尔尔马林所所产生的的甲醛蒸蒸气熏蒸蒸来清除除房间和和仪器的的污染。。产生甲甲醛蒸气气。前，，房间的的所有开开口(如如门窗等等)都应应用密封封带或类类似物加加以密封封。熏蒸蒸应当在在室温不不低于21℃且且相对湿湿度70％的的条件下下进行清清除污染染时气体体需要与与物体表表面至少少接触8小时。。熏蒸后后，该区区域必须须彻底通通风后才才能允许许人员进进入。在在通风之之前需要要进入房房间时，，必须戴戴适当的的防毒面面具。可可以采采用气态态的碳酸酸氢铵来来中和甲甲醛。已已有报道道，可采采用过氧氧化氢溶溶液的气气雾熏蒸蒸污染的的空间，，但对此此还需要要进一步步的研究究。注：甲醛醛是一种种危险和和有刺激激性的气气体，并并怀疑有有致癌性性。应使使用具有有供气系系统的全全面罩式式防毒面面具。操操作时应应当采用用“双人人”制。。生物安全全实验室室微生物物操作技技术规范范生物安全全柜污染染的清除除清除I级和Ⅱ级级生物安安全柜的的污染时时，应当当将适量量的多聚聚甲醛(空气中中的终浓浓度达到到0．8％)放放在电热热板或电电热盘上上(在生生物安全全柜外进进行控制制)。然然后在生生物安全全柜内放放置第二二个放有有比多聚聚甲醛多多10％％的碳碳酸氢铵铵的加热热板或盘盘。第二二个盘上上覆盖一一个能够够从远处处将其移移走的盖盖子(如如连接一一个能够够从生物物安全柜柜外拉动动的绳子子)，从从而尽量量减少对对甲醛气气体的提提前中和和。如果果相对湿湿度低于于70％％，在在使用强强力胶带带[如““管道密密封胶带带”(ducttape)]密封前部部封闭板板前，还还要在安安全柜内内部放置置一个开开口的盛盛有热水水的容器器。如果果前部没没有封闭闭板，则则可以用用重型塑塑料布(heavygaugeplastic，，heeting)粘贴覆盖盖在前部部以保证证气体不不会泄漏漏进入房房间。生物安全全实验室室微生物物操作技技术规范范打开多聚聚甲醛盘盘的加热热开关，，1小时时后或多多聚甲醛醛完全蒸蒸发后关关闭。让让生物安安全柜静静置过夜夜。移去去第二个个盘子的的盖后打打开加热热开关，，让碳酸酸氢铵挥挥发。然然后，关关闭开关关并启动动安全柜柜让碳酸酸氢铵气气体循环环1小时时。移去去前封闭闭板(或或塑料布布)后就就可以使使用生物物安全柜柜了。生物安全全实验室室微生物物操作技技术规范范洗手／清清除手部部污染接触生物物危害性性材料时时，必须须戴合适适的手套套。但是是这并不不能代替替实验室室人员需需要经常常地、彻彻底地洗洗手。接接触过生生物危害害性材料料和动物物后、使使用过卫卫生间后后、离开开实验室室前以及及吃东西西前都必必须洗手手。生物安安全实实验室室微生生物操操作技技术规规范大多数数情况况下，，用普普通的的肥皂皂和水水彻底底冲洗洗对于于清除除手部部污染染就足足够了了。但但在高高度危危险的的情况况下，，建议议使用用杀菌菌肥皂皂。手手要完完全抹抹上肥肥皂，，搓洗洗至少少10秒钟钟，用用干净净水冲冲洗后后再用用干净净的纸纸巾或或毛巾巾擦干干(如如果有有条件件，也也推荐荐使用用暖风风干手手器)。推荐使用脚脚控或肘控控的水龙头头。如果没没有安装，，应使用纸纸巾或毛巾巾关上水龙龙头以防止止再度污染染洗净的手手。如上所所述，如果果没有条件件彻底洗手手或洗手不不方便，应该用酒精精擦手来清清除双手的的轻度污染染生物安全实实验室微生生物操作技技术规范加热灭菌和和消毒加热是最常常用的清除除病原体污污染的物理理手段。““干”热没没有腐蚀性性，可用来来处理实验验器材中许许多可耐受受160~C或更高温度度2～4小小时的物品品。燃烧或或焚化也是是一种干热热方式。高高压灭菌的的湿热法则则最为有效效。煮沸并不一一定能杀死死所有的微微生物或病病原体，但但如果其他他方法(化化学杀菌、、清除污染染、高压灭灭菌)不可可行或没有有条件时，，也可以作作为一种最最起码的消消毒措施。。灭菌后的物物品必须小小心操作并并保存，以以保证在使使用之前不不再被污染染。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范高压灭菌压力饱和蒸蒸汽灭菌(高压灭菌菌)是对实实验材料进进行灭菌时时最有效和和最可靠的的方法。对对于大多数数目的，下下列组合可可以确保正正确装载的的高压灭菌菌器的灭菌菌效果：——134℃、2、、3分钟————126℃℃、10分分钟——121℃、15分钟———115℃、25分钟生物安全实实验室微生生物操作技技术规范高压灭菌器器的装载为了利于蒸蒸汽的渗透透和空气排排出，高压压灭菌物品品应松散包包装放置在在灭菌器内内。要使蒸蒸汽能够作作用到其内内容物。通通过高压灭灭菌器内的的蒸汽，由由下而上置置换空气并并经排气孔孔排出。当当所有的空空气排出后后，关闭排排气孔的阀阀门，缓慢慢加热使压压力和温度度上升到安安全阀预置置的水平。。此时记为为灭菌开始始时间。灭灭菌结束后后停止加热热，让温度度下降到80℃以下下再打开盖盖子。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范高压灭菌器器使用注意意事项下列列规定能够够减小操作作压力容器器时会发生生的危害：：1．高压灭灭菌器的操操作和日常常维护应由由受过良好好培训的人人员负责。。预防性的的维护程序序应包括：：由有资质质人员定期期检查灭菌菌器内部、、门的密封封性以及所所有的仪表表和控制器器。2．应使用用饱和蒸汽汽，并且其其中不含腐腐蚀性抑制制剂或其他他化学试剂剂，这些物物质可能污污染正在灭灭菌的物品品。3．所有要要高压的物物品都应放放在空气能能够排出并并具有良好好热渗透性性的容器中中；灭菌器器内不能塞塞得过紧，，否则蒸汽汽不能均匀匀作用于装装载物。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范4．当灭菌菌器内部加加压时，互互锁安全装装置可以防防止门被打打开，而没没有互锁装装置的高压压灭菌器，，应当关闭闭主蒸汽阀阀并待温度度下降到80℃以下下时再打开开门。5．即使温温度下降到到80℃以以下，操作作者打开门门时也应当当戴适当的的手套和面面罩来进行行防护。6．在进行行高压灭菌菌效果的常常规监测中中，生物指指示剂或或热电偶计计应置于每每件高压灭灭菌物品的的中心。最最好在“最最大”装载载时用热偶偶计和记录录仪进行定定时监测，，以确定灭灭菌程序是是否恰当。。7．灭菌器器的过滤器器(如果有有)应当每每天拆下清清洗。8．应当注注意保证高高压灭菌器器的安全阀阀没有被高高压灭菌物物品中的纸纸等堵塞。。生物安全实实验室微生生物操作技技术规范焚烧在处理那些些经过或事事先未经清清除污染的的动物尸体体以及解剖剖组织或其其他实验室室废物时，，焚烧是一一种有效的的方法。只只有在实验验室可以控控制焚烧炉炉，并且能能够有效地地控制温度度和配备了了二级焚烧烧室时，才才能用焚烧烧代替高压压灭菌来处处理感染性性物质。焚焚烧也是一一种处理被被朊蛋白污污染物品的的有效方法法生物安全实实验室微生生物操作技技术规范需要焚烧的的材料(即即使事先已已清除污染染)应当用用袋子运送送到焚烧室室，最好使使用塑料袋袋。负责焚焚烧的工作作人员应当当接受关于于如何装载载和控制温温度等的正正确指导。。还需要注注明的是，，焚烧炉的的操作是否否有效主要要取决于对对需要处理理的废物中中物品的正正确混合。。危险度评估估危险评价首首先集中在在实验室相相关感染的的防御上。。当实验室室活动涉及及传染或潜潜在传染因因子时，对对某一个特特定的操作作程序或实实验进行危危险度评估估，危险评评价帮助正正确选择生生物安全水水平(设施施、设备和和操作)，，评估职业业性疾病风风险、采取取相应安全全防护措施施、减少危危险性事件件发生。危险度评估估在进行危险险性的评估估和选择安安全防护措措施时，应应充分考虑虑有关实验验以及实验验动物的特特点、可能能直接或间间接参与风风险的传染染性病原，，工作人员员的专业素素养及经验验，实施项项目的具体体活动和程程序等因素素，做出决决策。根据据传染过程程的基本因因素，减少少工作人员员暴露的危危险和使环环境污染降降到最低限限度。危险度评估估危险度评估估应当由那那些对微生生物特性、、设备和操操作程序、、动物模型型、屏障设设备和设施施最为熟悉悉的人员来来进行。授授权的专业业人员进行行。危险度度评估一旦旦进行，在在必要时就就应当对它它进行常规规性的评估估和修订，，同时要考考虑收集与与危险程度度相关的新新资料以及及来自科学学文献的其其他相关的的新信息。。微生物的危危险评价涉涉及范畴1．已知的的传染微生生物经过鉴定的的病原体，，有实验室室研究、疾疾病监测和和流行病学学研究危险险评价资料料。2．未知传传染微生物物对未知传染染微生物危危险评价的的需要考虑虑以下方面面：传染性性、传播途途经、发病病率和死亡亡率等流行行病学和病病原血清型型等生物学学特性资料料。微生物的危危险评价涉涉及范畴3．基因修饰饰微生物通过基因修饰饰技术获得的的具有新特性性的微生物。。通常通过受受体和供体的的生物特性和和用量，进行行危险性评价价。修饰后是是否改变其毒毒性、繁殖能能力、宿主范范围，与宿主主染色体整合合性和对细胞胞生长周期的的影响等。4．未知传染染性的生物材材料在缺少资料证证明有或没有有未知传染性性微生物材料料时应该扩展展防护范围和和提高防护级级别。危险度评估内内容进行微生物危危险度评估最最有用的工具具之一就是列列出微生物的的危险度等级级。然而对于于一个特定的的微生物来讲讲，在进行危危险度评估时时仅仅参考危危险度等级的的分类是远远远不够的，适适当时还应考考虑其他一些些因素，包括括：1——微生物物的致病性和和感染剂量越是发病率高高、后果严重重的病原越是是危险。病原原体的来源在在危险评价时时必须考虑在在内。“来源源”涉及到微微生物来源的的地域、宿主主和特点。危险度评估内内容2——暴露的的后果发生暴露后对对人员或环境境可能的危害害后果3——自然感感染途径传染性病原能能通过四种主主要的感染途途径而致病。。即摄人、吸吸人、黏膜接接触以及肠道道外直接接种种。感染途径径，可能与自自然患病的感感染途径相类类似，也可能能截然不同。。危险度评估内内容4——实验室室操作所造成成的其他感染染途径(非消消化道途径、、空气传播、、食入)传染性病原可可通过天然的的或人为的方方式从实验动动物体内逸散散。经尿液、、唾液和粪便便排出或从皮皮肤损害部位位释出是天然然逸散方式的的例子。促使使传染性病原原从实验动物物体内逸散的的人为方式有有很多，用针针头和注射器器从病毒血症症动物身上抽抽取血样、活活组织检查或或尸体剖检操操作者时被带带有污染物的的针头、刀刃刃刺伤、割破破或擦伤，以以及被动物咬咬伤而直接接接种；照料动动物、实验操操作时吸人带带污染物的气气溶胶被溅出出的污染物，，污染的手和和污染的表面面接触操作人人员的眼睛、、鼻腔或口腔腔黏膜。气溶溶胶传播的可可能性越大，，危险性越高高。通过气溶溶胶传播的疾疾病最容易发发生实验室感感染。危险度评估内内容进行微生物危危险度评估最最有用的工具具之一就是列列出微生物的的危险度等级级。然而对于于一个特定的的微生物来讲讲，在进行危危险度评估时时仅仅参考危危险度等级的的分类是远远远不够的，适适当时还应考考虑其他一些些因素，包括括：1——微生物物在环境中的的稳定性不仅考虑微生生物的传染性性(细菌芽胞胞)，而且要要考虑其在环环境中的存活活力，抗性越越强越危险。。危险度评估内内容2——所操作作微生物的浓浓度和浓缩样样品的体积根据研究内容容，病原体浓浓度决定危险险的程度。浓浓度越高越危危险。3——适宜宿宿主(人或动动物)的存在在常见的人畜共共患疾病文文献记载的职职业性疾病来来源人体患患病的严重程程度，对疾病病的抵抗力危险度评估内内容4——从动物物研究和实验验室感染报告告或临床报告告中得到的信信息在人体数据缺缺乏时，动物物研究数据可可对危险评价价提供有用的的资料。动物物体致病性、、传染性和传传播途径的信信息可提供有有价值的提示示。但推论从从一种动物到到另一种动物物传染性时，，必须小心验验证。危险度评估内内容5——计划进进行的实验室室操作(如浓浓缩、超声处处理、气溶胶胶化、离心等等)实验室操作内内容与其设备备相关操作细细则是否可保保证其不泄露露，实验程序序和操作方法法，操作的性性质和作用避避免操作者摄摄人吸人，，直接接种，，割破或擦伤伤，针刺，咬咬伤直接接触触可能性。危险度评估内内容6——可能会会扩大微生物物的宿主范围围或改变微生生物对于已知知有效治疗方方案敏感性的的所有基因技技术对开展遗传修修饰微生物方方面的工作进进行危险度评评估时，必须须要包括对其其潜在的危害害程度、后果果的严重性以以及发生这种种危害的可能能性或频率大大小，宿主的的易感性，宿宿主菌的致病病性，包括毒毒力、传染性性、毒素生成成、宿主范范围的变化；；受体的免疫疫程度以及免免疫系统的状状态；暴露后后果的严重性性；直接由插插入的外源性性基因片段所所产生的危害害当插人外源源性基因后的的产物具有有有害生物学活活性危害性等等方面的评估估。危险度评估内内容——当地是否否可以进行有有效的预防或或治疗干预预防和治疗的的有效性是应应该考虑的重重要因素。有有效性越低，，危险性越大大，反之亦然然。试验室工工作人员，有有无免疫预防防措施，文献献记载的职职业性疾病，，工作人员的的素养及经验验。危险度评估内内容危险度评估时时，只有在明明确了上述信信息的基础上上，才能明确确所计划开展展的研究工作作的生物安全全水平级别，，并选择合适适的个体防护护装备。对于于那些所知甚甚少的样品当当了解了足够够的信息时，，才能很好地地进行上述危危险度评估。。菌（毒）种管管理与监督系系统的文件制制定为保证菌（毒毒）种管理体体系能规范化化制度化正常常运作，制定定符合本单位位实际情况的的菌（毒）种种管理及监督督标准操作细细则（SOP），，是非常常必要要的，，该（（SOP）主要内内容包包括，，菌（（毒））种管管理与与监督督标准准操作作细总总则，，其内内容包包括菌菌（毒毒）种种接收收（分分离））标准准操作作细则则（SOP）；；种子批批制备备与质质控准准操作作细则则（SOP）；；菌（毒毒）种种使用用、保保藏、、分发发标准准操作作细则则（SOP）；；菌（毒毒）种种销毁毁标准准操作作细则则（SOP）；；菌（毒毒）种种事故故应急急处理理标准准操作作细则则（SOP）：：菌（毒毒）种种管理理监督督标准准操作作细则则（SOP）。。在各细细则中中根据据其实实际内内容或或实验验，制制定更更详细细的各各实验验独立立的操操作细细则，，并制制作对对应的的规范范化表表格化化的原原始记记录。。菌（毒毒）种种管理理与监监督系系统的的文件件制定定1.菌菌（毒毒）种种管理理与监监督标标准操操作细细总则则总则的的内容容主要要为菌菌（毒毒）种种管理理与监监督的的制定定SOP指导思思想、、各SOP形成与与批准准程序序、主主要内内容提提要、、以及及各SOP目录、、实施施与监监督部部门。。2.菌菌（毒毒）种种接收收（分分离））标准准操作作细则则（SOP）菌（毒毒）种种接收收标准准操作作细则则（SOP）要求内内容:接收收(外外购、、赠送送)审审批与与接收收程序序;对对菌种种来源源,背背景资资料的的要求求、接接收样样品的的检验验。菌（毒毒）种种管理理与监监督系系统的的文件件制定定要求配配套原原始记记录:（1））菌（（毒））种外外购(接受受赠送送)申申请表表（2））菌种种来源源,背背景资资料登登记记记录（3））菌（（毒））种入入库登登记表表（4））外来来菌种种传代代与检检验记记录菌（毒毒）种种管理理与监监督系系统的的文件件制定定菌（毒毒）种种分离离标准准操作作细则则（SOP）取样程程序;对菌菌种来来源,背景景资料料的要要求、、样品品的分分离操操作(如分分离过过程较较复杂杂可分分写各各自独独立SOP)（1））样品来来源,背景景资料料登记记记录录（2））菌(毒)种分分离记记录（3））外来来菌种种传代代与检检验记记录（4））菌（（毒））种入入库或或处理理登记记表菌（毒毒）种种管理理与监监督系系统的的文件件制定定3.菌菌（毒毒）种种种子子批制制备与与质控控标准准操作作细则则（SOP）菌（毒毒）种种种子子批制制备标标准操操作细细则（（SOP）内容包包括原原代主主代及及工作作种子子批制制品过过程各各工艺艺要求求细则则;批批准种种子批批发行行使用用程序序,各各过程程应制制定相相对应应实验验原始始记录录.菌（（毒毒））种种管管理理与与监监督督系系统统的的文文件件制制定定菌（（毒毒））种种种种子子批批质质控控标标准准操操作作细细则则（（SOP））根据据各各菌菌（（毒毒））种种不不同同特特性性,制制定定相相关关的的形形态态学学、、血血清清学学、、生生化化特特性性、、免免疫疫原原性性、、纯纯菌菌或或外外源源因因子子检检查查、、核核酸酸序序列列分分析析等等检检定定方方法法与与结结果果判判定定。。各各过过程程应应制制定定相相对对应应实实验验原原始始记记录录。。各各项项检检定定项项目目应应制制定定相相对对应应实实验验原原始始记记录录，，并并有有检检定定结结果果汇汇总总表表，，种种子子批批申申请请放放行行使使用用申申请请表表与与审审批批表表。。菌（（毒毒））种种管管理理与与监监督督系系统统的的文文件件制制定定4.菌菌（（毒毒））种种使使用用、、分分发发与与保保藏藏标标准准操操作作细细则则（（SOP））菌（（毒毒））种种使使用用、、分分发发程程序序、、菌菌（（毒毒））种种保保藏藏方方法法建建立立及及验验证证、、菌菌（（毒毒））种种的的备备份