消毒与灭菌效果监测技术VIP

消毒与灭菌效果监测技术消毒灭菌效果监测的重要意义1消毒灭菌设备存在质量和故障等硬件问题；2消毒灭菌工艺存在人为操作不标准因素；3操作人员存在技术不熟练或责任心问题；4消毒药品存在质量问题；5消毒药品多数不是纯品或不稳定性。工艺监测—压力蒸汽灭菌质量控制三查工艺检查:检查门框和垫圈有无损坏;门锁扣有效;压力表能否达零位;用水检查排气口有无堵塞;关门后检查是否存在漏气;检查调节阀零活度,压力和温度指示是否吻合;平安阀的有效性;输送蒸汽压力过高,加层温度过高;预真空式进行B-D检验;把关检查:灭菌包装是否符合要求;灭菌包只小不能大;灭菌包摆放是否正确;装载不过量;放常规监测器材;灭菌后检查:灭菌包有无损坏;有无湿包现象;有孔容器是否关闭;监测指标是否合格;无菌物品存放,发放,有效期等;压力蒸汽灭菌效果监测器材制作标准1.国际标准化组织关于?对化学指示剂标准?。2.美国药典第二十一版：关于生物指示剂参数的规定。3.中国标准化委员会制定并由国家技术监督局公布：国家标准〔消毒效果评价方法与标准即GB15981—1995〕。4.?消毒技术标准?2002年版对消毒灭菌监测器材有专门条款规定。压力蒸汽灭菌效果生物监测方法1生物指示剂：标准抗力菌株为嗜热脂肪杆菌〔ATCC7953或SSIK31)芽胞，制剂为商品芽孢菌片和自含式生物指示剂管。2生物指示剂含芽孢数为5×105～5×106cfu/片。3生物指示剂抗力标准：在121℃饱和压力蒸汽条件下，存活时间〔ST〕≥3.9min,杀灭时间〔KT〕≤19min,D121值1.3min～1.9min。4抗力标定：在标准生物和化学指示剂检测器内进行检测和标定。2002年版?消毒技术标准?对化学指示剂规定指标1监测条件规定：以标准抗力检测器为标定仪器，以生物指示剂抗力为标准，对化学指示剂进行抗力监测。2下排气灭菌监测121Ċ指示卡与脉动真空灭菌监测132Ċ指示卡分别在各自饱和蒸汽作用下，要求到达的符合率如下：第1组：以121Ċ饱和蒸汽作用20min，132Ċ作用3min，指示色块与标准色块符合率为100％；第2组：以121Ċ饱和蒸汽作用10min，132Ċ作用1min，指示色块与标准色块符合率＜20％；第3组：以117Ċ饱和蒸汽作用20min，128Ċ作用3min，指示色块与标准色块符合率＜20％；

有菌生长ME-型压力蒸汽灭菌ME-型压力蒸汽灭菌北京四环卫生药械厂菌管结构透气孔管盖外管培养基管菌片自含式生物指示剂管使用方法1将生物指示剂管2支直接置于标准试验包内，放于灭菌器下层排气口附近〔标准指排气口上方〕。2按正常灭菌程序进行灭菌处理。3将试验包取出，取出指示管，于管尖部夹碎套管内安瓿。4将其置于56℃培养48h。在此部位夹碎嗜热脂肪杆菌芽孢菌片使用方法1将装有1片菌片的小纸袋2份放于标准试验包中心包好。2将试验包放于灭菌器下层排气口附近。3按正常灭菌程序进行灭菌处理。4取出试验包，在100级洁净条件下，取出菌片直接接种于装有5～10ml溴甲酚紫蛋白胨培养液试管内，同时接种1片阳性对照菌片。5将接种管置于56℃培养48h观察结果，假设无菌生长继续培养至1周。菌片纸袋灭菌后取出菌片接种到培养基于56℃培养48h未培养前使用后挤破培养有菌生长菌片

生物监测结果判断：符合以下条件：1所有试验管内培养液均未变色并呈透明无沉淀物；2阳性对照管内培养液变成黄色并呈混浊，为灭菌合格。附溴甲酚紫培养液处方及配制方法

处方：蛋白胨10g，葡萄糖5g，可溶性淀粉1g，溴甲酚紫乙醇溶液10ml，加蒸馏水至1000ml。调节pH值7.0~7.2,分装试管,每管5~10ml,于115℃压力蒸汽灭菌30min,保存备用.

溴甲酚紫为2%,直接溶解于乙醇内即可.关于快速生物指示剂问题

1快速生物指示剂是近年来国外新推出的压力蒸汽灭菌效果监测器材，希望在56℃培养4h内出结果。

2原理是利用细菌生长过程产生代谢酶，再以荧光显色，以便肉眼观察；嗜热脂肪杆生长过程可产生α-D葡萄糖酶与培养基中荧光素结合显色。

3目前该产品质量尚达不到标准要求，易受一些不稳定因素影响。某医院用其监测脉动真空灭菌器出现的假阳性率达11％～44％。

RapidIndicator环氧乙烷和干热灭菌效果监测1监测所用生物指示菌为枯草杆菌黑色变种芽孢。2用标准株〔ATCC9372〕制成芽孢菌片。3监测环氧乙烷抗力标准：菌片含菌量5×105～5×106cfu/片。在环氧乙烷用量为600mg/L+30mg/L,相对湿度60％＋10％，54℃条件下，存活时间〔ST〕≥7.8min,杀灭时间〔KT〕≤58min,D10值2.6min～5.8min。4监测干热灭菌抗力标准：菌片含菌量与上述相同；在160℃干热条件下，存活时间〔ST〕≥3.9min,杀灭时间〔KT〕≤19min,D121值1.3min～1.9min。5商品菌片每个纸袋1片，每包50片。枯草杆菌黑色变种芽孢菌片使用方法1环氧乙烷灭菌效果监测：〔1〕将菌片连同纸包放入环氧乙烷灭菌包内，一式2份，放在灭菌器内适当部位；〔2〕按环氧乙烷灭菌程序处理后，在洁净度100级条件下，取出菌片将其接种到营养肉汤管内；〔3〕于37℃培养48h。2干热灭菌效果监测：〔1〕将菌片连同纸包放于玻璃试管内，分别置于上中下中央部位，在中层内角和门把手附近各放1片；〔2〕按干热灭菌要求，作用1个灭菌周期；〔3〕按上述方法接种和培养。3商品枯草杆菌黑色变种芽孢菌片只适合于灭菌效果监测，不适合作定量杀菌试验。生物指示剂使用应注意的问题菌片包括嗜热脂肪杆菌芽孢和枯草杆菌黑色变种芽孢〔ATCC9372〕。1.菌片使用及存在问题：制备培养基；专门技术人员负责；需要布样、采样、接种；技术复杂、受外界因素影响、易发生二次污染、总费用较高；计数问题，主要是不易洗下回收。2.生物指示剂管使用问题：使用方法简单，不受外界因素影响，容易保证监测质量。3.培养温度问题和培养基pH值影响问题。4不要试图对菌片作回收活菌计数，很困难。营养琼脂外表枯黑杆菌菌落形态及色素营养琼脂外表枯黑杆菌菌落形态及色素枯草杆菌黑色变种繁殖体革兰染色菌体

枯草杆菌黑色变种芽孢孔雀绿染色

枯草杆菌黑色变种芽孢孔雀绿染色化学指示卡使用中的几个问题1.如何看待标准色：标准色是最低合格线。2.布放正确和足够数量：包中心，双标本。3.指示卡性能测试：标准条件下标定，如在标准检测器内进行，到达升温速度10秒、排气速度5秒、温度误差0.5℃。4.防潮：不直接接触金属和玻璃，对折放置，置于纱布块中。化学指示卡变色不达标原因分析1.不达标准色，但均匀：可能是温度不够，时间缺乏，超热蒸汽，其他工艺问题〔参阅生物指示剂的分析结果〕。2.不达标准色，但变色不均匀：带花白点，反面有湿印，可能为指示卡提前受潮。原因：器械的冷凝水；蒸汽含水量过高，如蒸汽源压力低、输送管道长、管道漏气；预热不够，进蒸汽时冷凝水；送气管道内水未排除；枯燥时间缺乏。指示卡反面指示卡正面标准色块指示色块

指示色块水湿印20(mg50100300500100015000.0020.0050.0100.0300.0500.1000.150

2：试纸偶尔有纸张厚薄不均造成有里外之分，浸上消毒液后显出两面颜色深浅不一，此时依颜色深的一面为准。另有时标准色印制出现误差，造成读值偏差，发现时请与生产厂联系解决。Mg/L〔％〕注意：1：该试纸不适用于二氧化氯、臭氧、过氧化氢和万福金安消毒剂监测。G-1型消毒剂浓度试纸戊二醛测试卡检测范围及显色情况卡标号测试范围显色情况3983M1.5%1.5%～2.0%1.5%可不显色或显色不均匀到达2.0%时方可正常显色3987M1.8%1.8%～2.3%1.8%可不显色或显色不均匀到达2.3%时方可正常显色3989M1.8%2.1%～2.6%2.1%可不显色或显色不均匀到达2.6%时方可正常显色

戊二醛化学指示卡变色情况Comply3987M1.8%正常未用指示卡监测变色不均