DB43-T 1967-2020浮萍实验室培养技术操作规程

ICS65.020CCSB16

DB43湖 南 省 地 方 标 准DB43/T1967—2020浮萍实验室培养技术操作规程GuidelineforLaboratoryCultureTechnologyofLemna202020201229发布2021-03-29实施湖南省市场监督管理局发布目 次前言Ⅲ112规范性引用文件13············13.1············13.2无性繁殖体13.3无性繁殖群13.41414.114.214.3pH2526仪器设备与器具26.1培养设备26.2培养器具26.3其它设备和工具2727.1···············27.2培养与扩繁27.3···············27.4注意事项3A（）Steinberg4前 言本文件按照GB/T1.1—2020给出的规则起草。本文件某些内容可能涉及专利。本文件发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省植物保护研究所,长沙艾格里生物科技有限公司。本文件主要起草人：刘勇、陈昂、张德咏、张战泓、蒋桂芳、罗杰、罗香文、熊浩、陈武瑛。浮萍实验室养殖技术操作规程本文件规定了湖南省小浮萍、紫背浮萍等浮萍的室内培养环境条件。本文件适用于湖南省浮萍实验室培养的管理。（3.1生物量Biomass3.1生物量Biomass3.2无性繁殖体Clone指通过无性繁殖产生的生物体或细胞。来自同一个无性繁殖体的个体有遗传同一性。3.3无性繁殖群Colony指相互连着的母体和后代叶片（通常2～4片）的集合体。有时也指整个植株。3.4叶片Frond指浮萍植株的单个“叶状结构”。它是最小的单位，即个体，有繁殖能力。4环境条件光照30～50cm6500～10000Lux/16/8。水温（24±温情况下会形成冬芽。4.3pHpH6～9pHpHStinbrgHl和NaHp。浮萍应培养于温度和光照可控的设备或区域中，如：恒温箱、人工气候箱、恒温室、高压灭菌锅、光源、冰箱等。可以用多种容器，如：三角瓶、表面皿、组织培养瓶等。超净工作台、照度计、温湿度计、网、筛、接种环、叉子、薄刀片等。灭菌a）取样：选取一簇单克隆浮萍，将其分成若干个个体；b）去根：用灭菌后的刀片去除所有浮萍个体的根；c）漂洗：在无菌水中剧烈的摇动，冲洗浮萍植株；d）表面灭菌：0.5％的次氯酸钠溶液中浸泡1mine）漂洗：无菌水或无菌培养液冲洗2～3次；f）接种：在超净工作台中转接到无菌培养液中，确保转接的浮萍个体叶状体底部的囊为绿色。7～10a）12140min；b）150mL3cm；c）转接：挑选生长状况良好的浮萍植株，用接种环转接入倒有新鲜培养基的容器里；d）密封：盖上容器盖子，并用parafilm封口膜密封；e）标记：标记浮萍的名称品系和世代，记录初始叶片数和时间。保种1～24a）用渗透剂和冷冻保护剂（如蔗糖和甘油）去除自由水；b）植株保存于冻存管中，-80℃冷冻保存；c）浸入-196℃液氮中。复苏：低温保藏的浮萍可在45℃水浴中迅速解冻，接种至新鲜培养基即可复苏。pH6～9附录A（资料性）改进的Steinberg培养基的配方表A.1改进的Steinberg培养基的配方物质浓度（mg/L）KNO3350CaN3)242O295KH2PO490K2HPO412.6MgO47HO100H3