DB42T1621-2021辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程

ICS65.020.20ICS65.020.20CCSB05湖 北 省 地 方 标 准DB42/T1621—2021辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程Technicalregulationforevaluationofpepperresistancetoanthracnosedisease20202020123020210301湖北省市场监督管理局发布目 次前言 III1范引文件 1语定义 1种制备 1内性定 2情查 3病评价 3载格 3附录A（料）辣炭疽的类症状 4附录B（料）辣炭疽分物PCR测法 5附录C（料）辣炭疽抗鉴病分标准评标、性价统表 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省农业科学院经济作物研究所提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-876658215978770@。辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程范围本文件适用于湖北省辣椒炭疽病的抗病性鉴定。（NY/T2060.1辣椒抗病性鉴定技术规程第1部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程本文件没有需要界定的术语和定义。本文件没有需要界定的术语和定义。4接种体制备PDA培养基制备PDA12000.5h15g～20g12130min后取接种体的分离。接种体的鉴定（接种体保存将鉴定的新鲜胶孢炭疽菌进行3PDA斜面培养基的5cm试管中，2831cm41PDA2830.5cm2890（12h）PDA28907d2890（12h/1231×105/mL5室内抗性鉴定取辣椒青熟果（花后35d～40d）或红熟果（花后45d～50d），每个鉴定品种或材料设310应具备人工调节温度、湿度和光照的条件，使接种后具备良好的发病环境。感病对照品种：“茄门甜椒”，中国农业科学院蔬菜花卉研究所提供。抗病对照品种：“PBC932”，亚洲蔬菜中心提供。NY/T2060.12min，用12min接种1µL，浓度为1×105/mL1µL。10.4mm1µL2～3428（相对湿度100%）24h，培养条件控制为：温度2880%～10012h。5d～7按照附录C表C.1的病情分级描述，逐一观察果实每一接种处的病斑扩展情况，记载各病级病果数，并将发病结果记入附录C表C.3。辣椒炭疽病的病情分级参见附录C的表C.1。（Diseaseindex:1)计算：𝑁×𝑆DI=∑(𝑠×𝑛)×100 (1)𝑁×𝑆式中：DI——病情指数；s——各病情级别的果实数；n——相对病情级别的数值；N——调查总果数；S——抗病性评价标准依据鉴定材料3次重复的病情指数（DI）的平均值确定其抗病水平，划分标准见附录C表C.2。鉴定结果的有效性判别当感病对照的病情指数DI＞30，该批次的抗炭疽病鉴定即为有效。统计鉴定品种的病情指数，将结果记载在附录C表C.3。附录A（资料性）辣椒炭疽病的分类及症状Coletoricumsp5C.gloespoioieCcoccde（C.capsici）（C.acutatum）（C.dematium）红A.1A.2。图A.1图A.2附录B（资料性）辣椒炭疽病分离物PCR检测方法TE1×TEBuffer（500mL）：1mol/LTris-HClBuffer，pH8.0，5mL；0.5mol/LEDTA，pH8.0，1mL；500mLDNA2%CTAB（1L）：NaCl82g，EDTA7.44g，Tris12.12g，CTAB20g，PVP2gddH2O定容至1L1%的βTAE50×Tris（TAE）242gTris；57.1mL100mL0.5MEDTA（pH=8.0）；1000mlCTABDNA45min～6010000r/min离心10min2倍体积的无水乙醇或0.7-2030min，12000r/min10min～1545min～6010000r/min离心10min2倍体积的无水乙醇或0.7-2030min，12000r/min10min～15DNA70%PCRPCR和表B.2。表B.1PCR反应体系组成加样体积模板DNA2.0μLITS41.0μLITS61.0μLTaqMasterMix8.5μLddH2O12.5μL总体积25.0μL表B.2PCR通用引物引物名称引物序列PCR产物大小辣椒炭疽病ITS4TCCTCCGCTTATTGATATGC600bpITS6GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGPCR9454010置于4PCR扩增产物经1.2%的琼脂糖凝胶电泳后，BIO-RAD凝胶成像系统进行紫外显影拍照。PCR回收目的条带，交由生物公司测序。分析测序获得的rDNA-ITS序列，在GeneBank数据库中BLAST，比较序列与炭疽菌(Colletotrichumspp.)的ITS序列的同源性。附录C（资料性）辣椒炭疽病抗性鉴定病情分级标准、评价标准、抗性评价统计表辣椒炭疽病抗性鉴定病情分级标准、评价标准、抗性评价鉴定结果见记载表C.1、表C.2和表C.3。表C.1辣椒炭疽病的病情分级标准表病情级别病情描述0无病斑10.10cm＜病斑直径≤0.40cm30.40cm＜病斑直径≤0.70cm50.70cm＜病斑直径≤1.00cm，病斑上无霉或有少量霉层71.00cm＜病斑直径≤1.50cm，病斑上霉层较多9病斑直径＞1.50cm，病斑上有大量霉层表C.2辣椒抗/感炭疽病品种（种质）的抗性评价标准表病情指数（DI）抗性评价DI=0免疫（I）0＜DI≤3高抗（HR）3＜DI≤10抗病（R）10＜DI≤30中抗（MR）DI＞3