糖类新抗原CA199方法学验证报告

糖类抗原CA199检测系统/方法的分析性能验证评价验证内容：正确度、精密度、线性范围、临床可报告范围的验证、干扰物质及参考区间的确认验证人员：王爱林马力张卫李琳一、检测系统信息项目：CA199仪器名称全自动电化学发光免疫分析仪仪器型号Cobase601试剂及厂商：罗氏诊断有限公司检测方法：双抗体夹心法二、厂商提供的相关参数需验证参数厂商参数验证结果分析灵敏度<0.60U/ml沿用厂家说明书线性范围0.600-1000U/ml1.865〜982.9U/ml临床可报告范围0.600-10000U/ml0.600-964.45U/ml参考区间0-27U/ml已验证三、验证过程1、正确度目的：评价仪器测量结果与真值的一致程度。通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的正确度评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标

正确度验证试验数据记录表项目名称/单位肿瘤抗原199(CA199)/U/ml检测设备/编号RocheE601/103检测试剂/批号Roche试剂/160704校准品/批号Roche校准品/158967质控品/批号Roche质控品(PCTM)/158274检测方法双抗体夹心法最近一次参加的卫生部室间质评回报日期：2011-07-15样本编号我室结果靶值PT允许范围PT得分与靶值偏倚(%)VIS允许范围VIS得分20111128.629.121.8-36.4100%-1.72--20111274.877.758.3-97.1100%-3.73--20111381.083.162.3-103.9100%-2.53--20111431.732.724.5-40.9100%-3.06--201115202.5211.9158-264.9100%-4.44--判断标准：〈1/2CV总误差12.5%。正确度验证结果： ■满足要求 □不满足要求结论：Cobase601分析检测系统所检测的项目CA199正确度在允许范围内，保证检验结果准确可靠，可以满足临床需求。统计者：李琳王爱林 统计日期：2011-08-01审核者： 审核日期：2精密度(Precision)重复性精密度目的：考察仪器检测方法的随机误差原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的一致程度方法：选择新鲜混合血清标本(病人高值、低值)20份，测量前先定标，再做质控，质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，质控结果在控制范围内，计算SD,CV,得到重复性精密度标本来源：高低值标本均为混合血结果：本室CA199重复性精密度低值CV为：1.7%、高值CV为：2.2%结果判断方式：重复性精密度CV值V1/4CV总误差重复性精密度验证试验数据记录表项目名称/单位肿瘤抗原199(CA199)/U/ml检测设备/编号RocheE601/103检测试剂/批号Roche试剂/160704校准品/批号Roche校准品/158967质控品/批号Roche质控品(PCTM)/158274检测方法双抗体夹心法低值样本条码号：混合样本高值样本条码号：混合样本测定次数测定结果测定次数测定结果测定次数测定结果测定次数测定结果117.011117.121205.511212.4217.251217.28220512211.2316.841317.153204.213210.7

417.921416.724209.214194.45171517.03520515214.4617.361616.566212.216208.7716.971716.9720517209.3816.741816.898207.718213.6917.091917.089203.919206.91016.92016.9710208.520207.1低浓度均值：17.04SD：o.28CV：1.7%咼浓度均值：208.28SD：3.34CV：2.2%判断标准：〈1/4CV :总误差6.25%重复性精密度验证结果：■满足要求□不满足要求结论：本室所检测项目CA199低值、咼值重复性精密度均在允许范围内，可接受。检测者:王爱林、李琳检测日期：2011-08-01日间精密度：目的：考察目前实验室检测方法批间精密度原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个独立结果间的一致程度。方法：新鲜混合血清（高值、低值）分装20份冷冻，每天取两份混合血清随标本连续测定10天，测定前定标做质控且结果在控制范围内，计算CV,SD,得到日间精密度结果：本室CA199日间精密度平均低值CV：3.9%平均高值CV：3.4%结果判断方式：日间精密度CV值V1/3CV日间精密度验证试验数据记录表项目名称/单位肿瘤抗原199(CA199)/U/ml检测设备/编号RocheE601/103检测试剂/批号Roche试剂/160704校准品/批号Roche校准品/158967质控品/批号Roche质控品(PCTM)/158274检测方法双抗体夹心法低值质控品批号：混合样本咼值质控品批号：混合样本测定天数测定结果测定天数测定结果测定天数测定结果测定天数测定结果18.77118.211372.511377.428.62128.722359.612376.938.15138.103383.61338548.28148.024354.41436558.32158.395376.415383.268.45167.696377.116373.178.63178.837388.017374.288.35187.878355.418399.798.59197.97939119370.1108.32207.871040220390.8低浓度均值：8.31SD: 0.32CV：3.9%咼浓度均值：377.77SD:13.17CV"%判断标准：〈1/3CV总误差8.33%中间精密度验证结果： ■满足要求□不满足要求结论：本室所检测项目CA199低值、咼值中间精密度均在允许范围内。检测者:王爱林、李琳检测日期：2011-08-01审核者•审核日期：线性范围(Linearityrange, AMR)目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围检测结果的准确性。标本要求：高值标本可使用病人混合血清。一般地样本的高值推荐在AMR上限的90%,低值推荐在AMR下限的10%,但这不是绝对的规则。最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，数据点数不得低于4个,浓度范围遍布整个预期可报告范围。方法：以50ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合,加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定,记录结果。线性统计：以直接测定结果计算得出的相应浓度为X,以通过稀释测定结果为Y,回归方法学统计，得到a、b及r值。结果判断：若b在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。若b不在0.97-1.03范围内，a较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小的分析范围其回归方程的a和b的判断符合要求，则该范围为线性范围。线性范围确认：已验证CA199的测定结果是否在范围内呈线性，如小于厂家申明的线性范围，将验证的上限扩展为上限+上限＊10%验证下限扩展为下限-下限＊90%，扩展后的线性范围：1.68-1081.19

U/ml线性范围验证试验数据记录表项目名称/单位糖类抗原199(CA199)/U/ml检测设备/编号RocheE601/103检测试剂/批号Roche试剂/160704校准品/批号Roche校准品/158967质控品/批号Roche质控品(PCTM)/158274检测方法双抗体夹心法厂家声明线性范围：0.600-1000U/ml，线性方程：Y=bX+a,R2>0.95样本编号配制比例测定值1测定值2测定均值预期值差值14L1.751.981.8651.865023L+1H237.7244.5241.1247.106.032L+2H475.5491.6483.55492.388.834L+3H722.6733.2727.9737.649.7454H978.8987982.9982.90平均斜率b0.9985采用线性回归，以预期值为X,以按比例稀释的实测均值为Y,得线性方程：Y=0.9985X-4.1632线性回归散点图：线性回归线性回归y=0.9985x-4.1632

R2=0.9999oO

oO201X1X值均测实oO20200oO

oO201X1X值均测实oO20200400600800预期值10001200计算每一稀释度测定均值和预期值的差值。以预期值为横轴，差值为纵轴，制作线性差异图。线性差异图00X预期值2值00X预期值2值1差0-1-2200 400 600 800 1000 12回归方程：y=0.9985X-4.1632・b在0.97-1.03范围内□b不在0.97-1.03范围内a的P值：0.392 ■a与0无显著性差异Da与0有显著性差异R2：0.9999 ・R2±0.95 DR2<0.95直线回归方程是否可接受 ■可接受 □不可接受线性范围延伸：•在直线回归方程可接受基础上，如果验证的线性范围小于厂家申明的线性范围，将验证的上限扩展为（上限+上限*10%）,验证下限扩展为（下限-下限*90%）；•若验证上限超出厂家声明上限，以厂家线性范围为准，若没有超出厂家声明上限，以自行验证为准；扩展后的线性范围：1.68-1081.19U/ml。结论：在标本状态良好无干扰的情况下，已验证CA199测定结果在1.865〜982.9U/ml范围内呈线性，进行线性范围延伸后，可使用的线性范围为1.68-1081.19U/ml。检测者：李琳王爱林 检测日期：审核者： 审核日期：临床可报告范围(Clinicalreportablerange,CRR)目的：分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数，从而确保高值样本报告的准确性。原理：未经过任何处理的病人检验标本，通过检测系统检测得到的可靠结果范围。方法;结合本实验室制定的CA199的可报告范围(CRR)及该项目的检测范围，从而确定该项目的最大稀释倍数，予以验证过程描述：1、10倍稀释验证：测定标本为病人血清，测定原值为910U/m1，将高值的标本稀释10倍上机测定两次，结果分别为906U/m1，914U/m1.判断标准：R值应在100%土允许总误差之间。符合上述条件的最大稀释度为该项目的最大稀释倍数。临床可报告范围试验数据记录表项目名称糖类抗原199(CA199)/U/ml检测设备RocheE601/103检测试剂/批号Roche试剂/160704校准品/批号Roche校准品/158967

质控品/批号Roche质控品(PCTM)/158274分析测量范围0.600-1000U/ml 最大稀释倍数：10高值标本条码号：1004292279临床可报告范围高限数据记录理论值1/51/10实测值1906983.1971.3实测值2914945.8969.5实测均值910964.45970.4预期值910910910回收率R(%)105.984%106.64%R(%)_实测均值预期值结果判断：R(%)在75%-125%之间的最大稀释倍数10倍结论：我室所检测项CA199的最大稀释倍数为也倍，临床可报告范围咼限10*1000=10000ng/ml,如果10倍仍超出，报告〉10000ng/ml。检测者：李琳王爱林 检测日期：2011-08-01审核者： 审核日期：结论：CA199临床可报告范围0.600-10000U/ml,最大稀释倍数10倍，当结果>1000U/ml时，用肿瘤标志物稀释液进行10倍稀释,结果乘以稀释倍数,若10倍稀释结果仍超出报告>10000U/ml.分析灵敏度(AnalyticalSensitivity):直接引用罗氏试剂说明书上提供的分析灵敏度：0.600U/ml6干扰物质干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数，详细内容见本项目SOP。7参考区间(Referenceintervals):目的：选择20份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。原理：收集20例正常健康人血清标本进行检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。验证范围：0-27U/ml方法：将20份标本按所需项目上机检测，CA199标本的要求1、体检合格健康的筛选者2、脂血、溶血均勿用，标本新鲜R=测定的结果在参考范围例数$90%即合格总测定例数只允许10%的数据超过所验证的参考区间，否则另外在用20份标本验证，如果在范围内则验证通过。如仍超出范围，则需建立参考区间生物参考区间数据及验证记录表项目名称/单位糖类抗原199(CA199)/U/ml检测设备/编号RocheE601/103检测试剂/批号Roche试剂/159299校准品/批号Roche校准品/161204

质控品/批号Roche质控品(PCTM)/158274检测方法双抗体夹心法试剂说明书提供参考范围：0-27U/ml各编号样本测定情况序号条形码号性别年龄（岁）测定结果11004139105女37