鱼类急性毒性实验

鱼类的急性毒性实验

制作人：蔡浩协作者：李目，李行监测0936生物监测课程第四组第1页，共19页。目录

目的与要求

实验原理实验材料3

实验步骤

实验报告注意事项64125CompanyLogo第2页，共19页。通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。目的与要求1CompanyLogo第3页，共19页。

鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。实验原理2CompanyLogo第4页，共19页。

1．实验鱼的选择、收集与驯养试验用的鱼必须对毒物敏感，具有一定的代表性，便于实验条件下饲养，来源丰富，个体健康。我国可采用的试验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼、野生的食蚊鱼等。在同一实验中要求试验鱼必须同属、同种、同龄、同大小。最好是当年生。鱼的平均体长以不超过5~7cm为合适。金鱼体短、身宽，一般以3cm较为合适。同组鱼中最大的体长不应超过最小的体长的1.5倍。实验材料3注意：在毒性实验报告中，鱼类名称要使用正式种名，即拉丁学名。CompanyLogo第5页，共19页。选用的试验鱼在试验前必须在实验室内经过驯养，使之适应实验室条件的生活环境和进行健康选择。驯养鱼应该与试验相同水质水温的水体中至少驯养7d，使其适应试验环境，不应长期养殖（＜2个月）。驯养期间，应每天换水，可每天喂食1-2次，但在试验前一天应停止喂食，以免试验时，剩余饵料及粪便影响水质。驯养期间试验鱼死亡率不得超过5％，否则，可以认为这批鱼不符合试验鱼的要求，应该继续驯养或者重新更换试验鱼进行驯养。试验前必须挑选健康的鱼，即选择体色光泽、鱼鳍完整舒展、行动活泼、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病的鱼作为试验鱼。任何畸形鱼、外观上反常态的鱼都不得作试验鱼。实验材料3CompanyLogo第6页，共19页。

2．实验仪器设备（1）实验容器

实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水槽。容器体积可根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g（最好为1g）。一些小型鱼类幼鱼可选择500mL或1000mL烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。我们用到的是大型水桶，水规格是40L。（2）其他

溶解氧测定仪、水硬度计、温度控制仪、pH计、分析天平。实验材料3CompanyLogo第7页，共19页。

3．实验用水（稀释水）及水质条件

用来驯养和配置实验液的水，必须是未受污染的清洁水。一般可采用天然河水、湖水或地下水，但需过滤以除去大的悬浮物质。也可用自来水代替，但必须进行人工曝气或放置3d以上脱氯。如果试验目的是评价工业废水或化学物质对接纳水体的影响时，则最好采用接纳水体的污染源上游水作为试验用稀释水。蒸馏水不适合做稀释水，因为蒸馏水中已除去了自然界水中的盐类，与实际差距太大，另外由于蒸馏器的影响，有时使蒸馏水中带有对鱼类不利的金属离子，影响试验结果。实验材料3CompanyLogo第8页，共19页。实验用水的水质条件一般是指水的温度、pH、溶解氧、硬度、水中的有机物和水量等。（1）水温实验中应保持鱼类原来的适应温度，一般冷水鱼在12～18℃，温水鱼在21~25℃。为使得实验结果可靠，在同一实验中，温度的波动范围不要超过2℃（即±1℃）。冬天可以通过加热室内的空气温度而达到调节水温的目的，也可以采用电热棒直接控制调节水温。实验材料3CompanyLogo第9页，共19页。

（2）pH水的pH与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物的毒性作用也有一定的影响。因此，在实验中应维持pH在鱼类适宜范围内。一般实验液的pH在6.0～8.5为宜。如需调节pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH来调节受试物贮备液的pH。调节贮备液的pH时不能使受试物浓度明显改变，或发生化学反应或沉淀。

（3）溶解氧溶解氧是鱼类生存的必要条件，它能影响鱼类对毒物的敏感性。一般温水鱼要求溶解氧在4mg/L以上，冷水鱼要求溶解氧在5mg/L以上，每日光照12~16h。（4）硬度水的总硬度为19～250mg/L（以CaCO3计）。实验材料3CompanyLogo第10页，共19页。

1．预实验用确定正式实验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每个浓度放入五条鱼，可用静态方式进行，不设平行组，试验持续48～96h。每日至少两次记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100％死亡浓度和96h无死亡浓度。如果依次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应另选一浓度范围再次进行预试验。实验步骤4CompanyLogo第11页，共19页。2．正式实验根据预试验得出的结果，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和96h鱼类全部存活的最好浓度之间至少设置5个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应≤2.2。每个试验浓度组应至少设2～3个平行，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中的最高溶剂浓度相同。试验鱼的数目以每组（浓度组和对照组）至少7尾合适，建议取10尾。试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。实验步骤4CompanyLogo第12页，共19页。

在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h或6h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，每天至少测定一次。至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试物浓度。试验结束时，对照组的死亡率不得超过10％。实验步骤4CompanyLogo第13页，共19页。1．数据处理以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值，并计算95％的置信限。如果试验数据不适于计算LC50，可用不引起死亡的最高浓度和引起100％死亡的最低死亡浓度估算LC50的近似值，即这两个浓度的集合平均值。实验报告5CompanyLogo第14页，共19页。

2．化学物质急性毒性分级依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5级，如实验表3-1所示。实验报告5实验表3-1鱼类急性毒性实验毒性分级标准96hLC50（mg/L）＜11～1010～100>100毒性分级极高毒高毒中毒低毒CompanyLogo第15页，共19页。

3．编写报告在实验报告中应包括：试验名称、目的、试验原理、试验的准确起止日期，还有如下几项：（1）试验鱼的种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况。（2）受试物质名称、来源物化性质和保存方法。（3）实验用水的来源、物化性质和实验前的处理等。（4）实验溶液的浓度与配置方法、实验温度。（5）实验条件，如容器形式、实验液的体积与深度、受试生物数目及负荷率。（6）实验开始后24h、48h、72h、96h时的LC50值，及其毒性分级。实验报告5CompanyLogo第16页，共19页。（1）试验期间，对照组鱼死亡率不得超过10％。（2）试验期间，受试物实测浓度不能低于设置浓度的80％。如果试验期间受试物实测浓度与设置浓度相差超过20％，则应该以实测受试物浓度来表达试验结果。（3）试验期间，尽可能维持恒定条件。（4）试验期间，实验溶液的的溶解氧含量应大于60%的空气饱和值。

注意事项5）CompanyLogo第17页，共19页。谢谢！CompanyLogo第18页，共19页。内容梗概鱼类的急性毒性实验。CompanyLogo。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。注意：在毒性实验报告中，鱼类名称要使用正式种名，即拉丁学名。任何畸形鱼、外观上反常态的鱼都不得作试验鱼。实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水槽。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。我们用到的是大型水桶，水规格是40L。水的pH与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物的毒性作用也有一定的影响。因此，在实验中应维持pH在鱼类适