免疫学检测技术在食品安全中的应用

免疫学检测技术在食品安全中的应用免疫学检测技术在食品安全中的应用PAGEPAGE12/12免疫学检测技术在食品安全中的应用杨明（21生质量标准的要求越练越高，这就对食品检测技术提出更高的要求。由于食品种类丰富，食品中检测的有毒有害物质种类和组分繁多，需要检测的物质质量极低，样品中待检物的浓度常为μgngpg异性强，特别是单克隆抗体的发展，使得免疫检测方法特异性更强，结果更准确。1959YalowBerson疫分析这一崭新领域，次后又发展了许多替代或非同位素免疫免疫分析法。免疫荧光技术在食品检测中的应用免疫荧光分析（ImmunoFluorescenceAssayIFA）20401942Cons50Mashall基本原理掉，在显微镜下观察不到荧光。荧光免疫测定法的分类光猝灭增强免疫测定法。FIAFIA底物标记荧光测定法底物标记荧光测定法（SLFIA）受到相应酶的催化时能转变为荧光物，当标记底物及抗体结合产生的空间位阻阻碍了酶及标记底物间的接触，样品中的待测物通过竞争作用使游离的酶标结合物或荧光强度增加。荧光偏振免疫测定法使用偏振光作为激发光时，视分子的运动状态，发射的荧光可能是振动方向各向随机化的普通荧光，或是只在某一平面振动的偏振荧光（ploarizedfluorescence）在反应液中，游离的标记物分子体积小，在布朗运动中转动速度快，受偏振光照射后产生的荧光偏振方向被分散，不能产生偏振光，只发射普通荧光；及抗体结合的标记物分子体积增大，布朗运动速度减慢，甚至不能转动而形成定向排列，所以受偏振光激发后能产生偏振荧光，样品中的待测物的量越大，偏振荧光的强度越高。荧光淬灭免疫测定法荧光淬灭免疫测定法（FluoresecentQuenchingImmunoassay）记物及抗体结合后发生荧光淬灭。荧光猝灭的机制尚不清楚，荧光淬灭可能及标记物及抗体结合后导致电子振动状态的改变有关。荧光增强免疫测定法荧光增强免疫测定法（FluoresecentEnhancementImmunoassay）灭增强免疫测定法相似，不同的是标记物及抗体结合后荧光强度增强。酶免疫检测技术在食品检测中的应用20601971Engrall原或抗体，建立了酶联免疫吸附试验（ELISA，这一技术因其高度的准确性、特异性、应用范围广、检测速度快以及费用低等优点，是目前食品检测中令人瞩目的有发展前途的一种新技术。酶免疫技术的基本原理用酶标记已知的抗原（抗体的抗体（抗原，抗原抗体结合形成复合物中所带酶分子遇到底物时，能催化底物水解、氧化或还原，产生显色反应，这样就可以定性定量测定样品中的抗体（抗原。酶免疫技术的分类为固相免疫测定技术和液相免疫测定技术。酶联免疫吸附测定技术基本原理抗体（抗原）及酶结合后，仍然能和相应的抗原（抗体）发生特异性结合，将待测样品事先包被于固相载体表面，加入酶标抗体（抗原，酶将抗体（抗原）载体上相应的抗原（抗体）发生特异性结合反应，形成酶标记的免疫复合物，不能被缓冲液冲掉，当加入酶的底物时，底物发生化学反应，呈颜色变化，颜色深浅及待测抗原或抗体的量有关，可定性或定量测定抗原或抗体。ELISA双抗体夹心法、双夹心法和竞争法。ELISAELISA用于细菌及其毒素、真菌及其毒素、病毒、寄生虫的检测。还用于蛋白质、激素、农业残留、兽药残留和抗生素及食品成分和劣质食品的检测分析。ELISA放射免疫技术在食品检测中的应用放射免疫技术（RadioImmunoassay,RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫YalowBerson1960核素的检测灵敏性，本法灵敏度高，测定准确性良好，特别适应于蛋白质、激素和多肽的精确定量测定。基本原理放射免疫分析的基本原理是标记抗原和非标记抗原对特异性抗体的竞争结合反应。在这一反应系统中，作为试剂的标记抗原和抗体的量是固定的，抗体量一般采用能结合40％-50%的标记抗原，而受检标本中的非标记抗原是变化的，根据标本中抗原的量不同，得到不同的反应结果。当标记抗原、非标记抗原和特异性抗体三者同时在于一个反应系统时，由于标记抗原和非标记抗原对特异性抗体具有相同的结合力，因此两者相互竞争特异性的抗体，由于标记抗原及特异性抗体的量是固定的，故标记抗原抗体复合物形成的量就随着非标记抗原的量而改变。非标记抗原量增加，相应的结合较多的抗体，从而抑制了标记抗原对抗体的结合，是标记抗原抗体复合物的量相应减少，游离的标记抗原相应的增加，亦即抗原抗体复合物中的放射性强度及受检标本中抗原的浓度呈反比。若将抗原抗体复合物及游离的标记抗原分开，分别测定其放射强度，就可计算出结合的标记抗原（B）及游离的标记抗原（F）的比值（B/F，这及标本中的抗原呈函数关系。用B/FB/F放射免疫技术在食品检测中的应用RIAELISA安全检测中最常见的同位素是H和14C1978Charm在RIA技术的基础上发展了放射免疫检测技术RRA，放射免疫检测在快速检测方面最成功的是CharmⅡ6600/7600素快速检测系统，该系统就是利用专一受体来识别结合于同一类抗生素族中的母环以便β－内酰胺类、氯霉素类、四环素类、磺胺类、氨唑西林及碱性磷酸酶这六项检测以被认可。放射免疫技术由于可以避免假阳性，适宜于阳性率较低的大量样品检测，对水产品、肉类产品、果疏产品中的农药残留量的检测中广泛应用。还可检测经食品传播的细菌及毒素、真菌及毒素、病毒和寄生虫及小分子物质和大分子物质。如南京农业大学用放射免疫测定牛奶中的天花粉蛋白。4免疫胶体金检测技术又叫Rosa.Tests基本原理氯金酸（HAuCl4

）在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成负电的疏水HAuCl4

制备各种不同的粒径，不同颜色的胶体金颗粒，这种球形的颗粒对蛋白质有很强的A非共价结合。中。这一方法可通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。免疫胶体金技术在食品检测中的应用利用该技术可检测的抗生素种类有六种，β－内酰胺、四环素、磺胺二甲嘧啶、恩诺沙星和黄曲霉毒素，可检测的β－内酰胺药物有氨苄青霉素、阿莫西林、邻氯青霉素头孢G广阔的应用前景。单克隆抗体技术在食品检测中的应用BB选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可以得到由单细胞经分裂增殖而形成的细胞群，即克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体。1975，KohlerMilstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成了杂交细胞即可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术为医学和生物学基础研究开创了新纪元，是免疫学领域的重大突破。基本原理BB体外生长，而骨髓瘤细胞可在体外生长，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞及免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞即杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞即具有专一性合成某一抗体的特性，也具有瘤细胞能在体外无限增殖的特性，用这种杂交瘤细胞培养的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异性单克隆抗体，这种用杂交瘤技术制备的单克隆抗体称为第二抗体，主要抗原能引起小鼠的抗体应答，应用杂交瘤技术可获得几乎所有抗原的单克隆抗体。单克隆抗体技术在食品检测中的应用真菌及毒素、病毒、寄生虫、农药、激素等的单克隆抗体并建立的检测方法。磺胺二甲嘧啶和克伦特罗（瘦肉精）理简单、检测时间短，在实际生产中应用前景广阔，填补了国内空白。拟除虫菊酯类及激素类的残留量为农产品的优质安全提供技术支持。英国建立了自动肉制品中的沙门氏菌的单克隆抗体检测方法，人们还制出了单核增生性李特氏杆菌的单抗，用单抗ELISA检测该菌。乳中氯霉素的单克隆抗体检测技术也被建立。ELISA免疫测定新技术脂质体免疫测定法脂质体免疫测定法（LIA）是一种较新的免疫测定技术，脂质体是由磷脂或由其他类脂分子在水相中自发形成的一种密闭的双分子单层或多层囊泡，脂质体表面还可以连接抗原或抗体分子。这种生物模拟膜在形成过程中能包裹水及其中的溶质（染料或酶的稳定性可随免疫反应有规律变化。根据释放出的标记物的量进行测定，所以LIALIA克隆酶给予体免疫测定法克隆酶给予体免疫测定法（CEDIA）是一种新型均相免疫测定法。CEDIA中使用由重组DNA技术获得的 半乳糖苷酶两个独立的蛋白质片段，这两个片段独立存在时无酶活性，但两个片段结合则显示催化活性。以此作为分析方法的基础。其中较小片段称为酶给予体片段ED，另一片段称为酶受体片段EAED标记物及抗体集合后不再及形成酶，所以当样品中待测物增加时则游离ED标记物增多，使反应液中酶产生增加，底物显色测定。CEDIA是目前灵敏度较高的均相免疫测定法。发光免疫测定法发光免疫测定法（CLIA）常用鲁米诺（Luminol、异鲁米诺（Isoluminol）及其衍3的发射光。在鲁米诺的芳氨基上进行烃链取代后产光性能增强，但若置换芳氨基则发光被破坏。另外丫叮酯也用于发光标记。CLIA产光物质发光时间极短（数秒钟，测定误差较大。免疫传感器技术快，适合现场或野外操作。多组分免疫测定法和组分数受到限制。109分析手段，免疫分析技术操作简单、速度快、分析成本低，在食品安全检测中已表现出巨大的应用潜力。此外免疫分析技术能及其他技术联用，在联用方法中免疫技术即可作为高效液相色谱（HPLC）或气相色谱法（GC）等测定技术的样品进化或分离手段，也可HPLC，GC不可能取代色谱或光谱等常规分析方法，只能作为其重要补充。参考文献[1]现代食品检测技术.赵杰文,孙永海主编.中国轻工业出版社.北京,20