心脏灌流课件

离体心脏灌流

原理和意义离体心脏灌流是将动物的心脏从体内取出放入特定的生理代用液中，根据不同的实验目的和不同种属动物特点进行恒温、通氧或恒温灌流及建立与动物机体内环境基本相似的人工环境，以保证心脏维持正常活动状态。通过一定的检测手段观察并记录其生理活动、病理变化以及各种药物和试剂等施加因素对其生理生化及形态变化的影响。优缺点

优点：排除在整体情况下体内各种复杂因素的干扰，直接观测离体心脏标本的各项指标。易于严格控制实验环境，方法简便精确，有利于分析作用机制及对药物的药效作定量研究。易于获得准确、精细的结果。缺点和局限性：失去了机体完整统一的内环境和神经体液调控作用，失去了体内各种组织、细胞之间的相互关系，不能完全反映心脏在整体情况下的活动规律与正常整体情况。经典的离体蛙心灌流——Straub法

特点：灌流途径与正常循环途径不同，蛙心插管通过主动脉瓣直接插入心室腔内，灌流液通过同一蛙心插管进入心室腔和流出，前负荷和后负荷相等。方法1.破坏蟾蜍脑脊髓，仰卧位固定在蛙板上，打开胸腔和心包膜，暴露心脏。2.心室插管：在主动脉干下方引2根线，一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用，另一根则在动脉圆锥上方，系一松结用于结扎固定蛙心插管。在松结上方左主动脉根部剪一小斜口．将盛有少许任氏液的蛙心插管由此剪口处插入动脉圆锥。当插管头到达动脉圆锥时，再将插管稍稍后退，并转向心室中央方向，在心室收缩期插入心室。判断小插管是否进入心室可根据插管内的任氏液的液面是否能随心室的舒缩而上下波动。如蛙心插管已进入心室，则将预先准备好的松结扎紧，并固定在蛙心插管的侧钩上以免挂心插管滑出心室。剪断主动脉左右分支。3.游离蛙心：轻轻提起蛙心插管以抬高心脏，用一线在静脉窦与腔静脉交界处作一结扎，注意避免不要损伤静脉窦，在结扎线外侧剪断所有组织，将蛙心游离出来。

4.用新鲜任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液，直至蛙心插管内无血液残留。将蛙心插管固定在支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将蛙心夹的线头连至张力传感器上，记录蛙心搏动曲线。5.改变灌流液成分或在灌流液中滴加药液，记录和观察心脏活动的变化。八木法离体蛙心灌流特点：灌流途径按正常循环途径设计，一根蛙心插管插入左肝静脉并进入静脉窦，另一根蛙心插管仅插入主动脉，并不穿过主动脉瓣进入心室腔内，可以根据实验要求设定不同的前负荷和后负荷。注意①不能损伤或结扎静脉窦；②主动脉内的插管不要过深以免抵住主动脉瓣③两根插管有一定相对位置，插管前要考虑好方向，插管后应避免血管扭曲，保证灌流畅通④避免气泡进人心脏。哺乳类动物离体心脏灌流

——Langendorff法Langendorff首次描述了保持哺乳动物离体心脏存活的方法，采用恒压或恒流方式，从主动脉根部逆向用含氧灌流液灌流心脏，这种方式的逆向灌注关闭了主动脉瓣，使得灌注液经冠状动脉分布，并流入冠状窦和右心房。由于在实验过程中心室不充盈，所以不按照容量－压力曲线作功。后来其实验方法被不断改进，以适应各种不同研究的需要，如在按上述灌流方法进行灌流以保持心脏存活的同时，在用另一根插管插入右心房灌流心脏，则可研究压力－容积作功关系。实验方法1.麻醉、取出心脏：在戊巴比妥钠麻醉和人工呼吸的情况下迅速取出心脏，置于盛满37℃氧饱和的Ringer’s液的盘中，去除粘附的心包和肺组织，确定主动脉的位置，并恰好在其分支下方切断。2.主动脉插管：将一个玻璃或塑料的插管插入主动脉，注意插管不要过深以免损伤主动脉瓣，结扎固定。3.灌流：将心脏转移到一个双层壁的玻璃浴槽（类似于做离体小肠平滑肌灌流用的恒温浴槽或麦氏浴槽）中，浴槽内加入Ringer’s液或Krebs—Henseheit缓冲液，利用恒温水浴使这一装置保持在37℃。经主动脉插管灌注氧饱和的Ringer’s液或Krebs—Henseheit缓冲液，并持续保持400mmHg灌注压。

4.连接记录装置：将一特制的金属小钩固定在心尖部，利用张力传感器与多导记录仪相连并描记心脏收缩曲线和测定收缩力等指标。Langendorff离体心脏灌流装置可用于测定不同种生理学试剂和药物的直接效应，以及对这些药物的拮抗作用。还可观察冠脉流量的变化。1.取心脏和插管操作需迅速。2.插管不易过深，以免损伤主动脉瓣。3.灌流压大小恰当，如压力过低则冠状动脉灌流量不足，过高则因主动脉根部过于扩张导致主动脉瓣关闭不全。压力大小以冠脉流量为7~10ml/min为宜。4.灌流液温度需恒定：37℃（95%O2+5%CO2饱和）。注意事项Bardenheuer等(1983)：小球囊插入左心室的方法与Gottlieb等的方法相似，但并不测量左心室等容压力，而是通过一个插管将球囊内的液体泵人一个体外的闭合循环通路中，并由两个弹性瓣膜控制其单向流动。每次心脏收缩时，由球囊排除的液体量相当于心脏的每搏输出量，可以通过顺序连接的一个流量计探头和一个积分仪进行测量。前负荷和后负荷可以分别调整。经主动脉逆灌进入冠状动脉的灌注液流量也可单独记录下来。离体工作心脏（isolatedworkingheartpreparation）经肺静脉、左心房和二尖瓣将微型压力传感器放入左心室腔可直接记录和测定左心室内压力变化，如左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末期压（LVEDP）和左心室压力变化速率（LVdP/dP）等；利用一根放入肺动脉内的导管连接到PMH73酸碱／血气检测仪上的E5046型电极可测定冠状静脉的Po2,并可结合灌流液的Po2和冠状动脉流量计算心肌耗氧量；经过两根固定在心脏表面的电极可记录心外膜心电图；心脏内埋藏电极记录希氏束电图等。参考文献LangendorffO.Pfluger’sArchGesPhysiol1895；61:291~332BardeoheuerH，SchraderJ.Relationshipbetweenmyocardialoxygenconsumptjon，coronaryflow，andadenosinereleaseinanimprovedisolatedworkingheartpreparationofguineapigs．CircRes1983;51：263-271ScholzW,AlbusU,Mart