肺炎相关微生物课件

12/1/2022肺炎相关微生物病原生物学与免疫学教研室12/1/2022知识点要求掌握肺炎球菌的生物学性状特点、致病性特点、微生

物学检查特点等。

熟悉流感嗜血杆菌、白喉棒状杆菌、百日咳鲍特菌的

致病性和防治原则。熟悉嗜肺军团菌的致病性、生物学特性、免疫性、微

生物学检查法和防治原则。生物学性状①***形态与染色矛头状，多成双排列（痰液、脓汁和肺部病变组织呈单或短链）；有毒菌株产生荚膜，无鞭毛、不形成芽胞。链球菌属——肺炎链球菌（s.pneumoniae）②***培养特性：含有血液或血清的培养基；兼性厌氧；血平板上形成细小、α溶血环的菌落；

细菌产生“自溶酶”，导致菌体溶解，平板上菌落中央下陷呈脐状，血液肉汤中孵育，先混浊后澄清；胆汁或胆盐可激活自溶酶，加速细菌自溶。③***生化反应：分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖⊕；

能分解菊糖；胆汁溶菌试验阳性。肺炎链球菌

——生物学性状培养与生化反应④抗原结构与分型荚膜多糖抗原：存在于荚膜中，将肺炎链球菌分为84

个血清型。菌体抗原：C多糖为细胞壁内特异性多糖，各型共有，可被血清中C反应蛋白沉淀；M蛋白具型特异性，与其致病力无关。⑤抵抗力：对多数理化因素敏感，但有荚膜菌株对干燥抵抗力较强。肺炎链球菌

——生物学性状致病性①

***致病物质荚膜：主要毒力因子；S-R变异后，毒力降低或消失。肺炎链球菌溶血素O：与细胞膜上的胆固醇结合，导致细胞膜穿孔，可溶解羊、兔、马和人红细胞；能激活补体，引起发热、炎症及组织损伤。LTA：与黏附肺上皮细胞和血管内皮细胞有关。神经氨酸酶：分解N-乙酰神经氨酸，与在鼻咽部和支气管黏膜上的定植、繁殖和扩散有关。

链球菌属

——肺炎链球菌微生物学检查法①采取痰液、脓汁、血液或脑脊液标本；②标本直接涂片染色后镜检，发现典型染色和形态结构的细菌时，可作初步诊断；③血液和脑脊液标本先在血液肉汤中增菌，后再接种血平板。链球菌属

——肺炎链球菌Optochin试验：将待检菌涂布于血琼脂平板表面；取浸泡过optochin的滤纸片置于平板上共同培养，观察抑菌环的大小；肺炎球菌抑菌环直径常>14mm，抑制叶酸合成，甲型溶血性链球菌抑菌环≤14mm，耐药。肺炎链球菌

——微生物学检查法①多价荚膜多糖菌苗特异性预防有较好的效果；②青霉素G治疗，耐药者可选万古霉素等。肺炎链球菌

——防治原则流感嗜血杆菌H.influenzae流感嗜血杆菌是一类革兰阴性小杆菌，多形态、无鞭毛、无芽胞。它是于1892年由费佛博士在流行性感冒的瘟疫中发现，俗称流感杆菌。流感嗜血杆菌最初被误认为是流行性感冒的病因，但直至1933年，当发现流行性感冒的病毒性病原。一、生物学性状1.形态结构：

小杆菌或球杆菌、多形性、有毒株血平板上形成荚膜，上呼吸道正常菌群中无荚膜。一、生物学性状1.培养特性：

巧克力色培养基，需要X，V两种因子X——血红蛋白中的血红素V——血液中的辅酶I、II菌落微小、无色、透明、露珠状卫星现象：与金葡菌（可合成V因子）同时培养，离金葡菌近的菌落较大，远者较小。一、生物学性状3.生化反应与抗原结构

根据荚膜抗原分为a-f6个血清型，b型致病力最强，引起儿童感染最常见的菌。4.抵抗力

较弱、对热和干燥敏感。二、致病性与免疫性1.致病物质：荚膜——主要毒力因子，抗吞噬菌毛——粘附，定植IgA蛋白酶——水解sIgA二、致病性与免疫性1.原发感染（外源性）：荚膜b型菌株引起急性化脓性感染。

脑膜炎、鼻咽炎、咽喉炎、会厌炎、化脓性关节炎、心包炎、严重可有菌血症，小儿多见。三、微生物学检查1.直接涂片、染色镜检2.分离培养：巧克力色培养基，卫星现象、荚膜肿胀实验3.抗原检测：b型荚膜多糖抗原4.PCR鉴定依据1.革兰阴性、小杆菌、多形性2.巧克力色培养基，卫星现象、荚膜肿胀实验3.X、V因子需求实验克雷伯氏杆菌肺炎克雷白杆菌是呼吸道感染最常见的致病菌之一。在痰标本所得革兰阴性杆菌中占第二位，仅次于铜绿假单胞菌。

医院内交叉感染常导致细菌在咽部寄殖，继引起支气管炎或肺炎。长期住院、应用抗菌药物等引起的急性肺炎与肺炎链球菌肺炎相似。克雷伯氏杆菌克雷伯菌对一般的抗生素有一定的耐药性。克雷白杆菌属(Klebsiella)存在于正常人的肠道和呼吸道，亦存在于水和谷物中。肺炎克雷白杆菌肺炎可表现为慢性病程，也可由急性延续成慢性，呈肺脓肿、支气管扩张与肺纤维化的临床表现。败血症、化脓性脑膜炎

、尿路感染等等。12/1/2022白喉棒状杆菌（C.diphtheriae）白喉（Diphtheria）是一种急性呼吸道传染病特征：患者咽喉部出现灰白色的假膜12/1/2022异染颗粒成分：核糖核酸+多磷酸盐作用：储存养料、鉴定价值Albert染色一、生物学性状12/1/20222.培养特性吕氏血清培养基含凝固的血清，生长迅速，灰白色小菌落，异染颗粒明显。

亚碲酸钾血平板黑色菌落。（亚碲酸盐碲被还原，显黑色）在亚碲酸钾血琼脂平板上的白喉棒状杆菌菌落（18～24h）12/1/2022

根据对亚碲酸钾的还原能力、菌落形态及生化反应可将白喉棒状杆菌分为3种类型：重型（gravis）、轻型（mitis）和中间型（intermedius）。重型菌落不溶血、不规则、有条纹2.培养特性12/1/20223.变异

白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。

***无毒株携带噬菌体后成为溶原性细菌（产生外毒素）12/1/20224.抵抗力

抗寒冷和干燥对湿热抵抗力弱对青霉素、氯霉素、红霉素敏感对磺胺不敏感12/1/2022二、致病性与免疫性1.致病物质：白喉毒素（diphtherotoxin）索状因子（cordfactor）K抗原（Kantigen）12/1/20222.致病机制1）***白喉外毒素：只有携带β棒状杆菌噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生外毒素外毒素结构：

B亚单位：有结合和转位功能

A亚单位：其上有1个催化区作用靶位：心肌和神经细胞12/1/2022延伸因子-2（EF-2）灭活蛋白质↓作用特点：多种细胞，特别心肌、神经细胞均有毒素受体肿瘤细胞对此毒素特别敏感A亚单位作用机制12/1/20223.***所致疾病

白喉——急性呼吸道传染病传染源：患者、恢复期带菌者、健康带菌者传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季）12/1/2022临床表现

1）细菌与毒素共同作用引起局部症状：炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致窒息2）毒素入血引起全身中毒症状：

外周神经炎：膈肌麻痹—呼吸困难—声带麻痹—声音嘶哑—软颌麻痹—吞咽困难心肌炎12/1/20224.免疫性1）人群易感性普遍易感；1-5岁儿童；成人也有可能。12/1/20222）免疫特点抗毒素免疫；感染后机体可获得牢固的免疫力；机体还可通过其它方式获得免疫力：

6个月以下婴儿----母亲成人----隐性感染、疫苗12/1/2022三、微生物学检查法

标本：假膜边缘取材涂片镜检

：标本片镜下特点革兰染色菌体颜色奈瑟染色典型菌体排列Albert染色异染颗粒12/1/2022分离培养

：标本接种吕氏血清斜面37℃6~12

h

接种亚碲酸钾琼脂平板培养黑色菌落12~18h灰白色小菌落（快速诊断）直接涂片镜检12/1/2022毒力鉴定白喉杆菌菌苔沉淀线(阳性)Elek毒力实验结果含白喉抗毒素滤纸片动物试验，Elek平板毒力实验12/1/2022四、***防治原则1.预防:人工主动免疫：注射DPT混合疫苗人工被动免疫：注射白喉抗毒素药物预防：用青霉素或红霉素预防2.治疗白喉抗毒素：皮试，尽早使用抗生素12/1/2022百日咳鲍特菌(B.pertussis)百日咳鲍特菌俗称百日咳杆菌人类百日咳因病程较长而得名***咳嗽呈阵发性或痉挛性百日咳主要威胁：肺部继发感染癫痫脑病12/1/2022一、生物学性状白日咳杆菌的形态学特征G－短小杆菌，有毒株有荚膜和菌毛12/1/20222.培养特性

初次分离时营养要求较高，常用含甘油、马铃薯、血液的鲍-金培养基。12/1/20223.变异S型菌株（新分离）：称为Ⅰ相菌，有荚膜，毒力强R型菌株（人工培养）：为Ⅳ相菌，无荚膜，无毒力Ⅱ、Ⅲ相：为过渡相12/1/20224.抗原结构及抵抗力K抗原：菌体表面成分，又称凝集原，包括凝集因子1～6。O抗原：菌体抗原。抵抗力较弱，日光直射（1h）、加热（56℃、30min）可杀死细菌。12/1/2022二、流行病学特征传染源:早期病人、带菌者传播途径：飞沫传播易感人群：儿童12/1/2022三、致病性与免疫性1.临床表现：潜伏期：7-14天临床三期：卡他期痉咳期（阵发性剧咳）恢复期鸡鸣样吼声12/1/20222.发病机理致病物质：荚膜菌毛毒素：生物活性物质百日咳毒素皮肤坏死毒素等特征：菌不入血，主要造成局部组织损伤12/1/20223.免疫性局部黏膜免疫，持久（主要的）IgM、IgG、IgA12/1/2022三、微生物学检查法

取鼻咽拭子直接接种于鲍金培养基进行分离培养，观察典型菌落并进行染色镜检和生化鉴定。12/1/2022四、防治原则***预防：接种“白百破”（DPT）三联疫苗，主动免疫治疗：首选红霉素12/1/2022军团菌属（Legionnella

）军团菌是引起军团病的病原体，首发于1976年的美国退伍军人一次聚会，故称作军团病。军团菌在自然界普遍存在，在天然水源及人工冷、热水管系统更多见12/1/2022嗜肺军团菌（L.pneumophila）一、生物学性状

1.嗜肺军团菌的形态学特征

G－杆菌，常规染色不易着色

Giemsa染色：呈红色

Dieterle镀银染色：呈黑褐色12/1/2022端生或侧生鞭毛，有微荚膜和菌毛在组织中呈短杆状，人工培养基上呈多形态性一、生物学性状12/1/20222.培养特性及抗原结构

需氧菌，营养要求高抗原组成：菌体抗原：分型依据，我国流行1-6型鞭毛抗原一、生物学性状12/1/20223.抵抗力1）对化学消毒剂、干燥、紫外线较敏感2）**对氯或酸有一定抵抗3）可寄生于阿米巴内一、生物学性状12/1/2022二、致病性与免疫性1.致病物质：多种酶：磷酸酯酶毒素：细胞毒素菌毛微荚膜12/1/20222.所致疾病：军团菌病***传播途径

：1)主要通过呼吸道吸入带菌飞沫2)中央空调冷却塔用水污染军团菌而导致感染临床类型：1)流感样型（轻症型）2)肺炎型（重症型）3)肺外感染12/1/20223.免疫性嗜肺军团菌为胞内寄生菌细胞免疫在抗感染中起主要作用12/1/2022三、微生物学检查法一般取下呼吸道分泌物、肺活检组织或胸腔积液等标本进行细菌学检查。用BCYE培养基分离细菌，再根据培养特性、菌落特征、生化反应作出鉴定。12/1/2022四、防治原则目前尚无特异的疫苗。加强水源管理及人工输水管道和设施的消毒处理，防止军团菌造成空气和水源的污染。治疗首选红霉素12/1/2022支原体

Mycoplasma

病原生物学与免疫学教研室12/1/2022

掌握支原体的生物学特点。熟悉肺炎支原体、脲原体所致疾病。了解支原体微生物学检查法。知识点要求12/1/2022***特点缺乏细胞壁形态上呈高度多形性能通过除菌滤器在无生命培养基中能生长繁殖，油煎蛋菌落最小的原核细胞型微生物能形成有分支的长丝，故称支原体概述12/1/2022**主要致病性支原体：肺炎支原体人型支原体生殖支原体解脲脲原体发酵支原体穿透支原体12/1/2022一、生物学性状1.形态：

0.3～0.5μm，无细胞壁高度多形性：球、杆、丝状和分枝状等一般Giemsa染色较好，染为淡紫色12/1/2022内外两层为蛋白质及糖类，中层为脂类（磷脂为主，胆固醇位于磷脂分子之间），凡作用于胆固醇的物质，如皂素、毛地黄甙、二性霉素B等均能破坏细胞膜致其死亡。

2.结构：12/1/2022营养丰富的培养基：

10%～20%人或动物血清以提供胆固醇与其它长链脂肪酸，多数还需添加酵母浸液、组织浸液、核酸提取物和辅酶。

pH：适宜7.6～8.0（<7.0易死亡），但解脲脲原体最适pH5.5～6.53.培养特性12/1/2022兼性厌氧：大多寄生性支原体在37℃时在微氧环境（含5%

CO2和90%

N2）中生长最佳。繁殖方式多样：

二分裂繁殖外，还有分节、断裂、出芽或分枝等方式3.培养特性12/1/2022固体培养基：

2～7天长出直径约10～600μm的典型的“荷包蛋样”菌落：低倍镜下见菌落呈圆形，心致密隆起，深入琼脂，外周由颗粒包绕。3.培养特性12/1/2022鉴别点支原体细菌L型细胞壁缺失原因在遗传上与细菌无关与原菌相关，可以回复细胞膜含高浓度固醇细胞膜不含固醇培养特性需要胆固醇大多需要高渗培养菌落大小生长慢，菌落小菌落稍大(0.6~1.0)液体培养液体培养混浊度极低有一定混浊度，可附壁支原体与细菌L型的异同点不同点缺乏细胞壁，形态多样，能通过滤菌器。固体培养—菌落呈荷包蛋样或颗粒状。临床表现相似—间质性肺炎、泌尿生殖道感染、不育等相同点12/1/2022

支原体葡萄糖精氨酸尿素吸附细胞致病性

肺炎支原体+——红细胞肺炎、支气管炎人型支原体—+——泌尿生殖道感染生殖器支原体+———泌尿生殖道感染穿透支原体++—红细胞条件感染

CD4+T细胞多见于艾滋病巨噬细胞溶脲脲原体——+—泌尿生殖道感染

流产及不孕不育

生化反应12/1/2022补体结合试验可检测糖脂类抗原

ELISA试验可检测蛋白质类抗原血清抗体可用生长抑制试验（growth

inhibition

test,GIT）和代谢抑制试验（metabolicinhibition

test,MIT）以鉴定4.抗原结构：12/1/20225.抵抗力：对化学消毒剂敏感，对结晶紫、醋酸铊、亚碲酸钾有抵抗力；对影响细胞壁合成的抗生素如青霉素类天然耐受，但对干扰蛋白质合成的抗生素如强力霉素、交沙霉素等敏感。12/1/2022二、致病性与免疫性1.致病机制：荚膜或微荚膜：抗吞噬作用毒性代谢产物：神经毒素、磷脂酶C、核酸酶、过氧化氢和超氧离离子均能引起宿主黏膜上皮细胞或红细胞的病理损伤粘附素：粘附呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞12/1/20223.免疫性

体液免疫：抗膜蛋白的抗体包括IgM、IgG和SIgA

细胞免疫：主要是特异性CD4＋Th1细胞分泌细胞因子12/1/2022衣原体Chlamydiae病原生物学与免疫学教研室12/1/2022知识点要求掌握衣原体的生物学形状及致病性。了解衣原体的共同特征。了解衣原体的微生物学检查法及防治原则。12/1/2022概述一类严格真核细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物，归属于细菌学范畴。12/1/2022共同特性

有细胞壁，G-，呈圆形或椭圆形，具有独特的发育周期，类似细菌的二分裂方式繁殖。有DNA和RNA两种核酸，含核糖体；具有严格的细胞内寄生性，对多种抗生素敏感。12/1/2022衣原体科衣原体属(3个种)沙眼衣原体鼠衣原体猪衣原体嗜衣原体属(6个种)肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体兽类嗜衣原体流产嗜衣原体猫嗜性衣原体豚鼠嗜性衣原体衣原体分类12/1/2022（一）发育周期与形态染色包括原体和网状体（始体）原体（Elementarybody,EB）：呈球形、椭圆形或梨形，直径0.2～0.4

µm，是发育成熟的衣原体。具有强感染性，在宿主细胞外较稳定，无繁殖能力。当进入宿主易感细胞后，宿主细胞膜围于原体外形成空泡，原体在空泡中逐渐发育，增殖成为网状体。Giemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色。一、生物学性状12/1/2022

网状体，亦称始体（Initialbody）：体积较大，直径0.5～1.0

µm，圆形或椭圆形，电子致密度较低，无胞壁，代谢活跃，以二分裂方式繁殖，在空泡内增殖成许多子代原体。成熟的子代原体从被破坏的感染细胞中释放，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期，每个发育周期约48～72

h。网状体是衣原体发育周期中的繁殖型，不具感染性，Macchivello染色呈蓝色。（一）发育周期与形态染色12/1/2022衣原体的发育周期12/1/2022***原体和始体的比较性状原体始体大小（µm）0.2～0.40.5～1.0细胞壁＋-代谢活性-＋胞外稳定性强弱感染性强无繁殖能力无强RNA:DNA比1:13:112/1/2022（二）培养特性

鸡胚接种：6～8日龄鸡胚卵黄囊中繁殖，感染后3～6天致鸡胚死亡，并可在卵黄囊膜中找到包涵体、原体和始体颗粒。组织细胞培养：可在HeLa、McCoy或HL等细胞中生长良好，可将接种有标本的细胞培养管离心沉淀以促使衣原体穿入细胞，在细胞培养管中加入代谢抑制物。12/1/2022（三）抗原结构属特异性抗原：位于胞壁的共同抗原为脂多糖，类似于G－菌的脂蛋白-脂多糖复合物，可用补体结合试验检测。种特异性抗原：大多数衣原体种特异性抗原位于主要外膜蛋白（majoroutermembrane

protein,MOMP）上，可用补体结合试验和中和试验检测鉴别不同种衣原体。型特异性抗原：根据MOMP可变区氨基酸序列的不同，可将每种衣原体分为不同的血清型或生物型（biovar）。12/1/2022（四）抵抗力

衣原体耐冷不耐热，60℃仅能存活5～10

min；在-60℃感染性可保持5年，液氮内可保存10年以上，冷冻干燥保存30年以上仍可复苏。对常用消毒剂敏感，紫外线照射可迅速灭活。

四环素、氯霉素、强力霉素和红霉素等抗生素有抑制衣原体繁殖的作用。12/1/2022（一）致病性能产生类似G－菌内毒素的毒性物质，能抑制宿主细胞代谢，直接破坏宿主细胞。

MOMP能阻止吞噬体与溶酶体融合，表位易变异，在体内可逃避特异性抗体的中和作用而继续感染细胞。热休克蛋白（HSP）能刺激机体巨噬细胞产生TNF-α、IL-1、IL-6等炎症性细胞因子。二、致病性与免疫性12/1/2022二、致病性与免疫性（二）免疫性产生特异性细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主。12/1/2022肺炎嗜衣原体(C.pneumoniae)肺炎嗜衣原体是衣原体属的一个新种。最初分离的两株病原体：1965年自一名台湾小学生眼结膜中分离得到的一株TW-183（Taiwan-183）。1983年自美国西雅图一位急性呼吸道感染病人的咽部分离出另一株AR-39（acuterespiratory-39)，后发现这两株衣原体为同一菌株，乃命名为TWAR。12/1/2022（一）形态染色

原体直径为0.38

µm，电镜下呈典型的梨形，并有清晰的周浆间隙，Giemsa染色呈紫红色，该法对细胞内包涵体的定位比碘染法敏感。一、生物学性状12/1/2022（二）细胞培养

McCoy和HeLa细胞，但都很难用于连续传代。目前常用HEp-2和HL细胞系，其在培养肺炎嗜衣原体的敏感性方面要高于前两者。