唾液中提取RNA的操作规程

唾液中提取RNA的操作规程唾液中提取RNA的操作规程唾液中提取RNA的操作规程xxx公司唾液中提取RNA的操作规程文件编号：文件日期：修订次数：第1.0次更改批准审核制定方案设计，管理制度唾液中提取RNA的操作规程——Omega试剂盒法1目的规范从唾液中提取RNA的方法和过程。2范围适用于人唾液的RNA提取。3实验仪器高速冷冻离心机：Neofuge13R，Neoguge15RExtrageneminicentrifuge；干式恒温器：K30，杭州奥盛；旋涡混合仪：XW-80A，QILINBEIER。超微量核酸分析仪：Nano2004实验试剂、耗材DEPCWater(DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等，以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系)RNA-freeWater氯仿无水乙醇，70%乙醇（用DEPC处理水配制）；Omega的血液RNA小量提取试剂盒；4.4.1用灭菌水稀释10xBufferERL到1xBufferERL4.4.2RNAWashBufferⅡ在使用前，按瓶子标签所示用无水乙醇进行稀释。5实验流程口腔脱落细胞的收集5.1.1取干净的口腔拭子在口腔壁上来回筛拭20-30次左右，然后小心地将拭子头掰断，并放入有保存液的的无酶离心管中。5.1.2将离心管放到掌式漩涡机中充分震荡1min。12000rpm室温离心1min。5.1.4去上清，加500ul的DEPCWater进行洗涤，混匀，12000rpm室温离心1min。5.1.5重复步骤，最后用200ul的DEPCWater对沉淀进行悬浮。消化裂解细胞5.2.1加入1mlRNA-SolvReagent,2ulRNA酶抑制剂,充分混合均匀，室温静置10min。5.2.2加入250ul的氯仿，（每1mlRNA-SolvReagent加250ul氯仿），剧烈震荡15s，冰浴10min。4℃，12000×g收集和纯化RNA5.3.1吸取不超过上清80%的上清液至新的无酶离心管中（注意枪头不要碰到离心管壁或沉淀），并加入等体积的70%的乙醇至管中，混合均匀，静置2min。5.3.2吸取800ul液体至离心柱中,静置2min。室温，10000rpm离心1min。5.3.3掉弃废液，吸取剩下的液体至离心柱中，静置2min。室温，10000rpm离心1min。5.3.4吸取300ulRWCWashBuffer至离心柱中进行洗脱，室温，12000rpm离心1min。5.3.5掉弃废液，吸取300ulRWCWashBuffer5.3.6把离心柱放到干净的收集管中，吸取300ulRNAWashBufferⅡ5.3.7掉弃废液，吸取300ulRNAWashBufferⅡ5.3.8掉弃废液，把离心柱重新装回收集管中，室温，12000rpm离心5.3.9把离心柱转移到干净的无酶的离心管中，打开盖子，室温静置2min洗脱收集RNA5.4.1加入15~30ul已56℃预热的RNA-freeWater至柱子的膜中央，室温静置3~5min。12000rpm离心1min。5.4.2再进行一次挂柱，然后掉弃离心