宝生汤对实验性不育小鼠睾丸组织及精子的影响

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10%福尔马林固定标本24小时后，序列酒精脱水，石蜡包埋切片，HE染色，制成光镜病理片。电镜标本2%戊二醛液前固定，1%锇酸后固定，梯度酒精脱水，渗透，苯二甲酸二丙酯包埋后用超薄切片机切成50nm的超薄切片，电镜下观察细胞超微结构。结果1、实验结果1.1正常组、宝生汤组（简称宝生组）、五子衍宗组（简称五子组）精子密度与精子活动率的比较。表1：正常组、宝生组、五子组精子密度与精子活动率的比较（X±Ｓ）组别动物数（只）精子密度（106/ml）精子活动率（%）正常组1118.18±2.09△88.87±2.58▲五子组1116.82±2.5680.89±2.89宝生组1220.08±2.50▲91.69±3.04▲*各组经方差齐性检验，满足F检验条件.△示与五子组相比，P<0.05,有可比性;▲示与五子组比较P<0.01有显著性差异；*示与正常组相比0.01<P<0.05，有统计学意义。1.2正常组、模型组、五子组与宝生组体重、睾丸和附睾重量的比较：Ｘ±Ｓ组别动物数体重睾丸附睾（只）（g）（mg）（mg）正常组1141.18±2.25234±21.3▲*83.16±14.05▲模型组1138.35±4.46181±13.867.33±7.11五子组1142.18±2.46213±27.0▲74.94±11.64宝生组1244.46±3.45239±16.5▲*8３.12±11.99▲各组经方差齐性检验，满足F检验条件。▲示与模型组比较P<0.01有显著性差异；*示与五子组相比0.01<P<0.05，有明显的统计学意义。2、光镜观察：正常小鼠睾丸组织结构正常（图一）。曲细精管内各级生精细胞层次多在5—7层，依次为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、精子。精原细胞紧贴生精上皮基膜，圆形或椭圆形，核圆形或椭圆，核染色深；初级精母细胞位于精原细胞近腔侧，体积稍大，此期处于细胞分裂期，核大圆而色淡染，可看到分裂的染色体；次级精母细胞位置靠近管腔，核圆，染色稍深，此期染色体已发生分离，由于次级精母细胞存在时间短，在生精小管切面内不易见到。精子细胞位近管腔，体积稍小，染色质致密；精子形似蝌蚪，头部为高度致密的细胞核，其后为长长的尾巴（图二）。支持细胞轮廓不清，核常呈不规则形，核染色质稀疏，染色浅，核仁明显。间质细胞成群分布，圆形或多边形，核圆居中。温水浴造模后第九天睾丸病理组织切片示（图三、四）：曲细精管生精上皮变薄，只剩精原细胞，偶见初级精母细胞，未见精子细胞与精子，管腔内偶见分解脱落的生精细胞。模型组病理切片示（图五）：曲细精管萎缩，生精上皮变薄，管腔内可见到2—3层生精细胞，数量明显减少，未见成熟的精子，曲细精管间有大量的间质细胞生成。五子组病理切片示（图七、八）：曲细精管结构接近正常，生精上皮大多完整，生精细胞层次在4—5层，但精子数不多。宝生汤组病理切片示（图九、十）曲细精管结构基本正常，生精细胞在6—7层，排列较密，管腔内成熟精子较多。3、电镜观察：正常组不同发育阶段的生精细胞包括精原细胞、精母细胞、精子细胞及精子均可见（949-1）。精原细胞与基底膜接触，细胞核圆形或椭圆形，核仁可见，细胞浆内细胞器较少，有少量的线粒体及粗面内质网；精母细胞核呈圆形，胞浆内细胞器较多，见较多的线粒体、粗面内质网及高尔基体，还有一些核糖体及糖元；精子细胞随着其发育阶段的不同，其形态也发生变化直至精子形成（951-1）。支持细胞也可见，其核多有切迹，胞浆内线粒体、内质网、高尔基体均可见，细胞表面有突起，细胞间有紧密连接；模型组生精上皮变薄，各个发育分阶段的生精细胞明显减少，有些区域见生精细胞之间间隙扩大，生精细胞内细胞器有不同程度肿胀，甚至有部分生精细胞坏死，其核溶解（953-2），核膜及胞膜不完整，有些坏死的生精细胞脱落，局部残留较大的空隙（954-2），精子生成偶见，支持细胞也有水肿；五子组生精上皮略有增厚，精原细胞、精母细胞及早期精子细胞均有不同程度增多（978-1），晚期精子细胞及精子渐多，细胞间及细胞内水肿均有改善，坏死少见（956-1），支持细胞形态结构未见异常；宝生汤与模型组相比较，生精上皮明显增厚，精原细胞、精母细胞、精子细胞均有明显增多，精子多散在分布，也有呈簇分布（982-2、980-1），细胞间及细胞内未见水肿，未见有坏死的生精细胞，支持细胞形态结构未见异常（983-1）。讨论1、中医对男性生殖的理论探讨中医二千多年前的《黄帝内经》奠定了“肾主生殖”的人生殖的理论基础，但未出方，稍后张仲景的《金匮要略》继承《内经》遗旨，并拟定肾气丸、天雄散等方，在治疗男性不育的实践中发挥了重要作用。在此基础上，后世医家不断发展，逐渐形成了以“肾精学说”为核心的治疗男性不育的理论体系。也就是说“肾精”与男性的生殖有密切的关系。1.1“肾精学说”是中医男性生殖的核心学说中医理论认为，肾主藏精，主生殖与生长发育，与天癸的关系密切，说明肾所藏之精对人体的生长发育，人类的繁衍方面都有至关重要的作用。1.1.1肾藏精，主生殖肾藏精包括先天之精、天癸和后天濡养之精。生殖之精来源于父母先天，是“生之来谓之精”。其精得之于父母先天，父母之精决定了子代之禀质。如《灵枢·经脉篇》曰：“人始生，先成精，精成而后脑髓生，骨为干，脉为营，筋为刚，肉为墙，皮肤坚而毛发长。”就说明了这一点：如果男精壮，女精强，则子代禀质必强；反之，则禀质不足。先天之精还须在天癸的作用下，充溢化生精液，才具有生殖机能。“天癸[5]是来源于父母而贮藏于肾的一种物质”。它随胎元的发育而发展，随肾气的充实而至，随着肾气的衰竭而枯竭，这是一般规律。如《素问·上古天真论篇》说：“丈夫八岁，肾气实，发长齿更；二八，肾气盛，天癸至，精气溢泻，阴阳和，故能有子；三八，肾气平均，筋骨动强，故真牙生而长极；……七八，肝气衰，筋不能动，天癸竭，精少，肾藏衰，形体皆极；八八，则齿发去”。天癸的这一功能与现代医学的下丘脑—垂体—性腺轴大致相当。即其具有促进性征及生殖器官的发育成熟；维持性、生殖功能；参与生殖之精的化生以繁衍后代。[6]但是，另一方面，先天之精必赖后天之精的濡养。《素问·上古天真论篇》说：“肾者主水，受五脏六腑之精而藏之。故五藏盛乃能泻”。就是说，肾还藏五脏之精，与先天之精共同构成肾中精气。进而提示：[7]五脏之精转化为肾中精气后，它们不仅是一种营养物质，而且各自带着本脏的生命信息及阴阳盛衰特征，生殖之精正是在天癸的作用下，将这些特征集中储存起来，作为遗传信息，推动子代的生长和发育。这也从另一侧面看出，五脏之气血阴阳的变化，亦必引起肾精的变化，影响生长发育与繁衍子代。由此可见，“肾精学说主要是强调肾精在男科性生殖的重要作用，认为肾藏精，主生殖，肾精的盛衰决定男子的生育能力。生理上，男性生殖以精为本；病理上，肾精亏虚为男性不育的重要因素。１．２其它脏腑与肾主生殖的关系生殖不仅与肾关系密切，亦与其它四脏有密切关系1.2.1肝肾同源，精血互生肝主藏血，主疏泄。一方面，肝调控着全身血流的流量、血量以及血液的贮藏。如《素问·五藏生成篇》说：“人卧则血归于肝，肝受血而能视，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能摄”。因此，外肾（睾丸）受血则能生精。另一方面，肝主司气机的畅和条达，气机顺，血脉和，则人不受病。若肝失疏泄，气血失调，则百疾丛生。在外肾则为气郁、气结、血瘀、痰阻。因为足厥阴经过阴器（为宗筋，肝所主）。肾藏精，五行属水；肝藏血，五行属木。水生木，木涵水。两者在五行相生。《诸病源候论·虚劳精血出候》说：“肾藏精，精者，血之所成也”[8]。是说肾藏之精受血的影响和制约。《黄帝内经素问集注·上古天真论》说：“血乃肾之液”[9]。是说精可以化血，血亦受精的影响和制约。由此，精血同源，精生血，血养精。共同调理着人类的生殖（生殖之精是在天癸的作用下由外肾化生、贮藏属于精室。肾受五脏六腑之精而藏之）。由于肝肾同源，精血互化，肝血能滋养肾精，故肝血的盛衰对肾精的化生有重要作用。肝血充足，则肾精生化无穷；反之，如果肝血不足或肝血瘀滞，则肾精生化无源。临床上对某些不育病从补肝血或疏肝化瘀治疗，往往能收到明显效果。1.2.2脾肾为本，化气血养精脾主运化，统摄气血。脾胃的运化腐熟水谷精微，通过经络运行全身，濡养人体，亦濡养外肾及生殖之精。《灵枢·决气篇》说：“中焦受气取汁，变化而赤是谓血”。《素问·痿论篇》说：“阳明者，五脏六腑之海，主润宗筋”。都说明脾胃化生的气血对肾有濡养的作用。生殖之精是在天癸的作用下，由精血化生而成。天癸、生殖之精虽靠肾气的作用才能充实和成熟，但亦赖后天水谷精微化生的气血不断滋养。《景岳全书·杂证谟》说：“人之始生，本乎精血之源；人之既生，由乎水谷之养。……非精血，无以立形体之基；非水谷，无以成形体之壮。精血之司在命门，水谷之司在脾胃，故命门得先天之气，脾胃得后天之气，是以水谷之海本赖先天为之主，而精血之海又必赖后天为之资”[10]。故脾胃健运，则肾精、天癸得养，生精有力；若脾胃失运，气血不足，则天癸、肾精无以养，则生精减少或精子活动无力。另一方面，脾胃化生的水谷精微可以充养天癸及生殖之精。若偏嗜有害食物或药物，可损伤肾的生精功能，如偏嗜烟酒、辛辣刺激物，可酿生湿热、变移它证，影响生精及精子的结构和功能。此外，脾气主升，有统摄作用。肾精之闭虽在肾，但又需脾气的统摄。若脾虚气陷，统摄失职，可导致精无所固而泄下，出现遗精、滑精、尿浊等。1.2.3心肾水火，相济相克心为君主之官，司君火，藏神，主血脉，主神明。心司君火，主血脉，具有推动全身血脉运行、输送精微物质到达全身的作用。外肾亦需要心血的濡养。若心藏血的功能正常，则百脉诸脏得以充养；若心气血不足，则或为虚，或为瘀：在外肾则导致生精功能受到影响，或为数量减少或为活动力不足。心藏神。神明既是人体生命活动的外在表现，又是意识活动。对人体的行为具有支配作用。在生殖方面就是对性生活的影响和对天癸与生殖之精的化生起支配作用。《仁斋直指方》说：“精之主宰在心，精之藏制在肾”[11]。《格致余论·阳有余而阴不足论》说：“心，君火也，为物所感则惕动。心动则相火亦动，动则精自走，相火翕然而起，虽不交合，亦暗流而疏泄也”[12]。《素灵微蕴·卷三》说：“精根于神”[13]。这些都说明：若心神功能正常则生殖之精不被扰乱，性功能正常；反之，则生殖之精与天癸俱受影响，性活动失常，从而导致生精紊乱、阳痿、早泄等症。1.2.4肺朝百脉，金水相生肺具有主气、司呼吸，主治节、朝百脉，宣肃气血的作用。并进而治理、濡养、调节全身的功能。“肺主气，朝百脉”，肺把吸入的自然界清气，与朝百脉的水谷精微之气，通过治节作用运达全身，营养人体，亦濡养外肾。如果肺的这些功能的任何环节出现失调，则都会影响全身。如肺气亏虚，不能宣肃气血津液，则会生痰、生湿、生瘀，最终影响到外肾，影响生精功能。《血证论·发渴》说：“肾中天癸之水，至于胞中，循气冲，随呼吸，而上于肺部，肺金司之，布达其气，是以水津四布”[14]。《素灵微蕴·卷三》[13]说：“肺主呼吸，而呼吸之气直达肾水，故肾水之中亦有肺气”、“肺为气之主，肾为气之根”。这些说明了肺肾在生理方面的密切关系，其在病理方面亦必相互影响和制约。1.2.5冲、任、督、带脉与生殖冲、任、督三脉一源三歧皆起于精室，与生殖关系十分密切。冲脉为血海、十二经之海、五脏六腑之海。是与它的经络走行密切相关的。《灵枢·逆顺肥瘦篇》说：“夫冲脉者，五脏六腑之海也，五脏六腑皆禀焉。其上者，出于颃颡，渗诸阳，灌诸精；其下者，注少阴之大络，出于气街，循阴股内廉，入膕中，伏行骭骨内，下至内踝之后属而别。其下者，并于少阴之经，渗三阴；其前者，伏行出跗属，入大趾间，渗诸络而温肌肉”。《灵枢·五音五味篇》说：“冲脉任脉，皆起于胞中，上循背里，为经络之海，其浮而外者，循腹右上行，会于咽喉，而别络唇口”。因此，冲脉与任脉、胃经、肾经、督脉等相通，与肝经相络，受到胃经运送的水谷精微的供养，得肾经先天之精气的资助，受肝经气血的疏泄充养。反之，它起于精室，会全身气血，运行天癸，滋生精液，充养外肾。任脉，起于精室，主一身之阴经，为阴脉之海。任脉有通行天癸，促进生精的作用。“男子二八，肾气盛，天癸至，精气溢泻，阴阳和，故能有子”。一方面是任脉畅通，天癸极至，到达肾，肾气盛；另一方面，任脉运行从阴脉而来的气血精微，到达肾，充溢肾气，滋养天癸，促进肾的生精。督脉亦起于精室。如《素问·骨空论篇》说：“督脉者，起于少腹以下，骨中央，女子入系廷孔。其孔，溺孔之端也。其络循阴器，合篡间，其男子循茎下至篡，与女子等”。督脉对生殖之精有资助调节的作用。“阴阳和，故能有子”。就是指任脉为阴脉，督脉为阳脉，任督二脉的经气调和，阴中有阳，阳中有阴，阴平阳秘，才能精气溢泻，受孕而生育。若阳气虚，则为精少、精冷、阳痿，均影响生育。带脉，有约束上下走行的经脉、起连络和协调作用。故有“诸脉皆属于带”之说。带脉约束“冲、任、督”三脉，协调其经气对外肾的作用。其一，束养宗筋；使宗筋驰张得宜。其二，约固精关；使精关的开启与关闭调和适宜，有利于蓄养精气。如果其功能失常，则会出现遗精、早泄等病症，从而影响生育。综上所述，生殖之精主于肾，而其生发成熟和功能正常则受到脏腑经络的共同影响。因此，中医对生殖男性的正确认识应该是以肾精为核心，以脏腑经络为整体的体系。2.关于模型的讨论一般小鼠睾丸的温度低于腹腔温度8．4℃。睾丸温度过高会影响生育力。利用这一原理造模，有其科学根据：精子发生要有一个低于自身体温数摄氏度的微环境，当这一微环境遭到破坏时，精子的发生就会障碍，精子的质量、数量就会下降，直接影响生育力。本实验模型是通过用43℃即高于睾丸温度数度的温水浸泡小鼠睾丸20分钟造成睾丸的生精障碍。通过预试验，我们在组织学上已经直观地看到了造模后的曲细精管横截面（见图四）绝大多数曲细精管管腔内只见一层精原细胞，而精原细胞以上的各级生精细胞及精子均已破坏，说明造成了小鼠睾丸生精障碍。（生精障碍一般属于中医肾虚范畴。）生精障碍要持续自造模起50天内，即损伤在热作用50天后开始恢复。我们在造模第九天开始灌服药物煎剂，时间为两周，与造模时间相加只有24天，远远低于它的自然恢复过程，说明这一模型在时间上有其可行性。睾丸具有特殊的血管结构—逆流交换装置[15]。使睾丸保持了较低的温度。睾丸局部透热[16]可破坏这一环境，使睾丸血管扩张，血流停滞，引起睾丸组织缺氧，缺氧又使某些蛋白质的合成受障（见图六）。热也可以作用于溶酶体膜，使溶酶体膜破裂、细胞自溶。这些特点符合中医瘀血范畴。因此，该模型具有中医肾虚血瘀的病机特点。3.关于宝生汤、五子衍宗汤药物组成及机理探讨宝生汤由紫河车、仙灵脾、枸杞、黄芪、丹参、当归、菟丝子等组成。方中紫河车：味甘咸，性温，入肝肾经。功效补气、养血、益精。《本草逢原》说：“紫河车禀受精血结孕之余液，得母气之血居多，故能峻补营血”。现代药理研究[17]发现其“含有绒毛膜促性腺激素、雌激素及孕激素成分，因而具有这些激素的药理作用”；“紫河车提取物给哺乳动物幼兔注射，对甲状腺、睾丸等有促进作用”。仙灵脾：味辛甘，性温，入肝肾经。功效补肾壮阳，祛风除湿；《本草纲目》说：“淫羊藿，性温而不寒，能益精气，真阳不足者益之”。《本草经疏》说：“淫羊藿，其气温而无毒，辛以润肾，甘温益阴气”。现代药理研究[17]“有雄激素样作用”。枸杞：味甘平，入肝肾肺经。功效滋补肝肾，润肺。《本草正》说：“枸杞，味重而纯，故能补阴，阴中有阳，故能补气。所以滋阴而不至阴衰，助阳而能使阳旺”。现代药理研究[18]“服枸杞后血浆睾酮含量显著升高，但在正常范围内，说明枸杞有一定程度上提高睾酮水平”。黄芪：味甘，性微温，入肺脾经，功能补气升阳，益卫固表，托毒生肌。《本经逢原》说：“黄芪，能补五脏诸虚”。黄芪现代药理研究[17]“有增强细胞生理代谢作用”、“有抗缺氧作用”。丹参：味苦，性微寒，入心肝经；功能活血化瘀。《本草纲目》说：“丹参能破宿血，补新血”。《本草正义》说：“丹参主入血分，其功在于活血行血，内之达脏腑而化瘀滞，外之利关节而通脉络”。丹参现代研究[17]示其“有增加微循环血流的作用”、“有抗凝血及抗血小板凝聚作用”。当归：味甘辛，性温，入心肝经脾经；功能补血和血，调经止痛。《本草备要》有“血滞能通，血虚能补，血枯能润，血乱能扶”之说。现代药理研究[17]显示有“降低血小板聚集和抗血栓作用”、“促进血红蛋白及红细胞的生成”、“抗氧化和清除自由基的作用”。菟丝子：味辛甘，性平，入肝肾经；功能补肝肾，益精髓。《本草逢原》说：“菟丝子，其功专于益精髓，坚筋骨，止遗泄，主茎寒精出”。现代药理研究证实“有促性腺激素样作用”[19]；“对用糖皮质激素造成的阳虚小鼠的虚证症状有一定的恢复作用，并对果蝇性力有不同程度的增强”[20]。全方从现代药理既能对生精的性激素方面产生影响，又影响现代血液循环：或清除自由基或抗血栓、抗血小板聚集。从中医方面来说就是取“精血互生，阴中有阳，阳中有阴”之义。诸药合用，以肾为核心，阴阳并补，气血共治，走五脏六腑，渗经络奇恒，既补肾又活血，全方有补有泻，阴中求阳，此亦即《金匮要略·血痹虚劳病篇》肾气丸之组方特点。五子衍宗汤有枸杞子、菟丝子、车前子、五味子、覆盆子组成。方中枸杞、菟丝子性味归经及功能如上所述。五味子：味酸，性温，入肺肾心经；功能敛肺滋肾，生津敛汗，涩精止泻，宁心安神。《本草纲目》：“五味子酸咸入肝而补肾，辛苦入心而补肺，甘入中宫益脾胃”。现代药理研究[21]示：“五味子有加强睾丸RNA合成，改善组织代谢，促进生殖细胞增生的作用”。车前子：味甘性寒，入肾、肝、膀胱、肺经；功能利水通淋，止泻清肝明目。《本草汇言》说：“车前子，行肝疏肾，畅郁和阳，同补肾药用，令强阴有子”。现代药理研究[22]示：“有延缓衰老的作用”。覆盆子：味甘酸性平，入肝肾经；功能补肾缩尿，固精明目。《本草述》说：“覆盆子，方书用之治劳倦虚劳等症，或补肾元阳，或益肾阴气，或专滋精血，随其所宜之方，皆能相助为理也”。现代药理研究[23]示：“覆盆子其提取液能升高睾酮水平”。五子衍宗汤全方研究[24]示“有类似性激素和促性腺激素的效果，能使睾丸组织曲细精管间质细胞得到改善和恢复，增强了生精和分泌激素能力”。全方具有补肾生精的作用。4、对实验动物的影响4．1增加精子密度，提高精子活动率男性不育主要表现在男性的形异、性异和精异三个方面[25]。尤以精异为主，精异又以精少、精子活动率低下处于首位。精子数量及活动率是衡量精液质量的两个重要指标。使女方受孕的重要的条件是有足够数量的形态正常活跃的精子。本实验证实，宝生汤能够明显提高精子的活动率，优于五子组（P<0.01）和正常组(0.01<P<0.05):对精子密度有比正常组增加的趋势—但统计学无显著差异—而明显优于经典补肾生精治疗不育的名方五子衍宗汤组(P<0.05)。4.2增加睾丸重量睾丸曲细精管约占睾丸总体积的98％[26]。因此，睾丸的质量间接反映睾丸曲细精管的质量。睾丸曲细精管是精子产生的地方，其为有形之质，属中医阴精范畴，其重量的增加反映了肾气的充溢。宝生汤对生精障碍模型小鼠睾丸的增重优于模型组(P<0.01)与五子组(0.01<P<0.05)，而与正常组相比有增重的趋势。对附睾重量的影响宝生组明显优于模型组，与五子组、正常组相比无统计学意义。说明宝生组对附睾的影响不是很明显，而对睾丸的影响明显。宝生组对动物体重的增加与各组相比无统计学意义，但有增重的趋势。4．3有恢复病理，促进生精的作用产生精子需要正常的良好的睾丸微环境，即内分泌正常与结构完整的睾丸微细结构。从实验数据及组织学观察，说明宝生汤有明显的恢复病理、促生精作用，接近正常组，明显优于五子组、模型组。从电镜观察，五子组睾丸组织的炎症反映还很明显，有些生精细胞的炎症反应还处在修复阶段；而宝生组改变十分明显—炎症反应已消失。模型组炎症反应十分明显，睾丸萎缩。模型组在光镜下观察到淤血[27]征象，表现为小静脉和毛细血管扩张，充满血液（见图六）。淤血可使睾丸相对缺氧，代谢机能因而减弱；长期淤血由于氧和营养物质供应不足和代谢中间产物堆积，还可引起实质细胞的萎缩和变性，其间质细胞却可增生，这在模型组严重存在（见图五）。因此，宝生汤改变模型病理的可能的机理是，一方面，生精过程受下丘脑—垂体—性腺系统的调控，主要是其分泌和合成的激素类物质。激素类物质作用于其敏感细胞，维持和促进这些细胞的功能的正常发挥。宝生汤与五子衍宗汤中均有影响性激素变化的成分。如宝生汤中的紫河车，淫羊藿，菟丝子，枸杞；五子衍宗汤组中的枸杞、菟丝子等。可以推测，宝生汤、五子衍宗汤的促生精作用是与下丘脑—垂体—性腺轴的功能分不开的。但是，从五子衍宗汤对精子数量、活动率及其电镜观察提示，单单补肾法有促进生精功能，但是其作用是有限的，其逆转病理的结果是不能令人满意的。根据中医“精血同源”的理论，生精障碍不育单纯从补肾方面治疗是片面的。应该认识到“血”在生精、益精方面的重要作用：血养精。血为生精过程创造了良好的微环境，任何破坏这一微环境的因素都将影响生精过程。因为按现代解剖和病理探索，睾丸需要一个良好稳定的内环境，血液循环在构成这一环境中作用举足轻重。它一方面提供给睾丸生精的精微物质，并把睾丸在代谢过程中的代谢物不断地带走；另一方面，它要促进血液循环，维持使睾丸有一个适宜的温度环境，已知人的睾丸温度比腹腔温度低2—4℃[28]，才能有利于生精。宝生汤除对精（现代性激素之类）的影响外，还对血（即现代血流变及微循环之类）有影响。如方中当归、丹参、黄芪等改善血循环，清除氧自由基，对形成睾丸的稳定内环境有重要作用。微观病理也证实了这一点。综合以上作用，宝生汤既补肾生精，又活血益血生精。并得到了病理组织明显恢复及实验数据的支持。说明补肾活血法优于补肾法。查之临床，肾虚血瘀在男性不育病机中占有主要地位。首先，男性不育病患者病史较长（国内多以男女双方同居2年以上，性生活正常、未采取避孕措施而致女方不能生育由男方引起者）。这个定义只是诊断不育病，但未能概及病史全部，即不育并非由结婚后而形成，而只能说是由于结婚而发现了不育。对同居之前的男性的生活、行为状况知之不多，而正是在这一段时间至同居，是病因作用、形成不育病机病理的过程，这一段时间的长度最短在2年以上。久病入络，病久易瘀。第二，青春期后，性生理成熟，不规律、不正确的性活动频繁，比如手淫，手淫常使精液的排出不畅，更重要的是形成败精淤滞精室。第三，生殖系统的慢性炎症或不明原因的疼痛，是指生殖系的慢性充血性（非细菌性的）炎症和疼痛，如慢性非细菌性前列腺炎，前列腺痛。其病理是前列腺的长期慢性充血（血瘀）引起。第四，药石之误。补肾法是治疗不育的有效的重要的治法。但“所当戒者，不可一法贯彻始终，一味温补肾阳或滋填阴精”[29]。“虚损之证，早宜培补，但尤易壅滞，因之，每少佐活血通络、辛香行滞之品，意在静中有动，阴中寓阳，以使补而不滞”[29]。第五，阴部血流不畅。现代社会职业繁多，求美之心善滋：或因职业久立久坐、或久处高温环境、或追求美丽，穿紧身裤，这些可使阴部血流受阻，睾丸供血不良，温度增高，缺氧及有害物质聚集，产生精瘀。第六，情志不畅。不育患者往往求子心切，而又不能速达，精神情志忧郁，心情不畅，可使气血失和，精液的生成受阻。以上因素又常常交互影响，互为因果。青春期不规则的性活动如手淫，往往引起或加重生殖系的慢性充血，慢性炎症久治不愈，使人情志不畅，情志不畅又引起药力受限，最终使病史更长，病情加重，而又频投医问药，致妄补阴补阳，阴阳失调，气血失和。即“殊不知药石杂投，实其所实，瘀滞胶结，气机不畅，致病势愈陷愈深，用逐瘀法，恰可拔乱反正，扭转病势，药到病除”[29]。因此，不育既要注意肾虚的一面，又要注意血瘀的一面，在治疗中，需要补肾活血。小结本文通过温水浴生精障碍小鼠模型，部分探讨了宝生汤的作用机理以及与五子衍宗汤的对比，通过光镜观察大体，电镜观察微观结构变化以及相关精子检验指标：1、宝生汤能明显促进损伤睾丸病理恢复正常，优于五子衍宗组及模型组；2、宝生汤能明显提高小鼠精子活动率，优于五子组（p<0.01）及正常组(0.01<p<0.05)；增加小鼠精子密度优于五子组(p<0.01)；3、宝生汤能增加小鼠睾丸和附睾重量，优于五子组(0.01<p<0.05)及模型组(p<0.01)；4、不育症既要注意肾虚的一面，又要注意血瘀的一面，在治疗中，需要补肾活血。参考文献陆仁康，谢雁鸿.应重视和加强男性生殖健康的研究.中国男科学杂志,2001；15（1）：3-6夏蓉西，刘红潮，等.肾气丸恢复受损睾丸功能的实验研究.中成药,1993;15（11）：25CumminsJ.ControversiesinScience:ICSmayfosterbirthdefects.JINHResearch,1997,9:34李仪奎主编.中药药理方法学.上海科技出版社,1992：46王琦，等.王琦男科学.第1版.河南：河南科学技术出版社，1997；78，81杨欣.“天癸”的实质初探.中医药研究,1994；（6）：3-4江海身，康力生，等.中医男科讲座.第1版.天津：中国医药科技出版社，1992；32南京中医学院校释.诸病源候论.第1版.北京：人民卫生出版社，1980；135清·张隐庵.黄帝内经素问集注.第1版.上海：上海科学技术出版社，1980；2李志庸，等.张景岳医学全书.第1版.北京：中国中医药出版社，1999；1091宋·杨士瀛.仁斋直指方论.第1版.福建：福建科学技术出版社,1989；浙江省中医药研究院文献研究室编校.丹溪医集.第2版.北京：人民卫生出版社，2001；1孙洽主校.素灵微蕴.第1版.北京：中国中医药出版社，1997；838王咪咪，李林主编.唐容川医学全书.第1版。北京：中国中医药出版社，1999；127孙则禹，王润.睾丸的解剖学特点及意义.男科学报.1998；4(1):30-32张汇泉，朱文华.温水加热对大白鼠睾丸组织学影响的定量研究.生殖与避孕.1982；2（4）：35-39马清钧，王淑玲，等.常用中药现代研究与临床.第1版.天津：天津科技翻译出版公司，1997；陈可冀，等.抗衰老中药学.第1版.北京：中医古籍出版社，1989；262熊跃武，周楚华.淫羊藿及菟丝子提取物对雄性生殖功能的影响.中国药学杂志,1994；29（2）：89-90方文贤，宋崇顺，周立孝.医用中药药理学.第1版.北京：人民卫生出版社，1998；647彭国瑞,许志奇,等.五味子对家兔泌尿生殖系统组织化学的影响及其抗衰老作用的初步观察.上海中医药杂志,1989：（2）：43张振歌，李峰等.车前子的药效学研究.中药材,1996；19（2）：87-89陈坤华，方军等.覆盆子水提取液对大鼠下丘脑—垂体—性腺轴功能的作用.中国中药杂志,1996；21（9）：560-562周智恒，夏卫平等.补肾法促进睾丸生精原理的实验研究.上海中医杂志,1992；（7）：26田文艺，曾嵘，蒋传付.送子衍宗颗粒生精作用的研究.湖南中医学院学报,1993；13（4）：35-39SherinsRJ,HowardsSS.Maleinfertility.In:HarrisonJH,etal.(eds)Campbell，sUrology4thed.philadelphia:Saunders,1978(vol1):715武忠弼.病理学.第3版.北京：人民卫生出版社，1992；51-52罗丽兰，等.不育与不孕.第1版.北京：人民卫生出版社，1998；699单书健,陈子华,石志超,编著.古今名医临证金鉴·男科卷.北京:中国中医药出版社,1999;172,175,217附录图一：正常小鼠睾丸组织.×100图二：正常小鼠睾丸各级生精细胞.×400图三：造模后睾丸病理切片.×100图四：造模后曲细精管只剩一层精原细胞.×200图五：模型组曲细精管变薄生精细胞2-3层.×100图六：模型组睾丸血管扩张，血液淤滞.×200图七：五子组治疗后曲细精管结构接近正常，生精细胞增多.×100图八：五子组治疗后生成成熟精子.×400图九：宝生组治疗后曲细精管结构正常.×100图十：宝生组治疗后精子生成增多.×400949-1:正常组各级生精细胞.×3000951-1：正常组精子不同发育阶段，细胞核浓缩，顶体形成.×6000953-2：模型组生精细胞内细胞器肿胀，部分生精细胞坏死，其核溶解.×3000954-2：模型组生精细胞坏死，留下较大空隙.×2000