培养基灌装课件

无菌工艺模拟试验诺华疫苗王董明内容培养基灌装的技术要求培养基灌装实施要点结果解释和偏差调查无菌工艺模拟试验定义无菌工艺模拟试验Process

Simulation

Testing（PST）培养基灌装Media

Fill采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进行验证。此模拟工艺称之为“培养基灌装”进行培养基灌装的目的验证一个无菌工艺对无菌工艺过程无菌保证水平的综合评估（设备、人员、操作、灭菌过程、环境…）对无菌操作人员进行资格确认确认进行重大变更后对无菌工艺的影响作为问题调查的手段综合反映生产线整体的无菌保证情况，无法体现具体某批产品或某个产品的无菌性培养基灌装测试的频率初始验证：每班次连续做3批验证随后每半年针对不同班次/工艺进行一次再验证所有日常操作人员每年都必须参加一次培养基灌装验证空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验偏差调查的手段培养基灌装批量培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量批次量<5000瓶，全批量批次量>5000瓶，通常5000~10000瓶手工灌装VS隔离器无菌生产工艺跨班次生产，大批量生产灌装数量例1：某冻干产品，冻干机容量为30,000瓶，分布在九个层板上，请问：较合理的一次培养基灌装数量为多少？如是初始验证，如何考虑不同层板的分布？例2：某冻干产品为人工灌装，共有三个操作人员具有无菌灌装资格，批量为3000瓶，请问：此种情况较为合理的一次培养基灌装数量为多少？生产线运行速度高速运行比较适用于评估需要频繁干扰操作的生产工艺或手工操作多的生产工艺，低速运行则一般适用于评估无菌产品、容器/胶塞在无菌区暴露时间比较长的工艺。灌装速度、瓶子尺寸、灌装量原则速度慢，产品暴露时间长；速度快，有时造成较多的干扰瓶子大（包括敞口大小），灌装速度慢尽量按产品实际灌装体积，如不可行，体积应能充分接触所有表面、并足够支持微生物生长举例：多规格的瓶子共线生产：最慢的速度，最大的瓶子规格;最小的瓶子规格，最快的速度单一规格的瓶子–正常或略慢速度特殊工艺的培养基灌装冻干工艺无菌转移冻干过程真空模拟无菌粉末乳糖，聚乙二醇，甘露醇（抑菌性确认）模拟无菌原料生产过程必要时伽马射线灭菌额外添加设备，或启用液体灌装功能12最长允许的灌装时间（如考察操作人员疲劳操作风险）有代表性的正常性操作活动的数量、种类和复杂性，非常规的干扰和各类突发事件（如维修、灌装中断等）冻干过程生产线速度和模具的规格（换模具）最差条件挑战13人员数量及其活动，换班，休息，更衣等具有代表性数量的无菌操作（如添加容器，密封件，无菌原料成分）或者转移无菌连接和拆卸取样操作各个工艺步骤的最长持续时间挑战：过滤，灭菌后物品的储存期最差条件挑战14应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基TSB或FTM（澄清）某些情况下应该考虑使用厌氧性培养基应该进行促菌生长实验标准菌株环境分离菌支持革兰氏阳性、革兰氏阴性、酵母菌和霉菌的生长培养基选择15在20-25℃条件下培养7天(培养真菌)，30-35℃下7天(培养细菌)确保其内壁和瓶塞充分接触培养基无密封缺陷的瓶均应该培养，任何不作培养的瓶子都应说明不作培养的原因如果有书面规程规定，灌装过程由于进行干扰操作而丢弃的培养基可以不培养灌装过程丢弃程序必须与实际生产一致培养及读数16培养后进行促生长试验设计密封性微生物挑战试验应由有资质的人员进行检查（QC参与）要进行物料平衡计算培养及读数过程的丢弃应有很明确的理由（应尽量避免）培养及读数2.培养基灌装实施要点培养基灌装的先决条件洁净室/设备的验证状态确认经过重大维修或变更后进行了生产线的运行确认或性能确认参与培养基灌装的人员接受了培训无菌操作洁净室行为培养基灌装方案明文规定的工艺过程及最差条件培养基灌装方案设计分析工艺流程，确定风险因素绘制流程图通过分析确定可能造成产品污染的风险因素灌装时间干扰活动（时间、次数、种类包括停机、维修、调整）冻干过程设备装配（如灌装前的装机）人员数量及其活动无菌操作（如各种无菌部件操作、产品转移）不同班次轮换，着装更换生产中出现的无菌管道连接无菌样品取样灌装速度重量检查容器密闭性（大小、种类、与设备匹配程度）某些特殊操作（如进行清洁前的操作）灌装过程流程图灌装部件装配管道排液正式灌装灌装量检查添加胶塞处理倒瓶人员进出班次轮换设置灌装参数停机维修环境监测收集转移冻干压塞暂存压盖人员操作人员操作时间时间风险因素灌装速度灌装时间长短干扰操作及次数人员数量停机操作……转移操作时间暂存位置时间干扰操作种类：任何进入百级层流的操作都为干扰操作，应包括所有类型的干扰操作，常规的（灌装线装配，称量调节，加胶塞，处理倒瓶，取样，环境监测）非常规的（设备故障，灌装线堵塞，轨道调节，拆卸/替换破损的部件）数量：干扰的次数应该不少于正常生产时发生的次数人员人数：模拟无菌区可能容纳最多的人数无菌装机/A级区内干扰模拟，上岗前权限控制活动：最多换班次数，不同时间段（日班和中夜班），进行正常操作频率：无菌区工作人员至少每年参与一次成功的培养基灌装环境监控和微生物限度控制制定环境监测计划，综合形成书面方案如何制定环境监测计划其他一些因素的考虑方案的批准制定培养基灌装过程的微生物负荷的监控计划,便于偏差调查环境监控方案应用风险评估的方法确定关键监控点给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置、直接接触表面人员按实际需要选择合适的监测方法空气浮游菌沉降菌接触碟/棉签法合理制定控制标准体现全面监控、动态监控干热隧道胶塞漏斗灌装站风险点-产品暴露区域瓶子裸露区灌装站区域胶塞裸露区至冻干机干热隧道胶塞漏斗灌装站例如：在左、中、右各设置一个连续粒子监测点在灌装站左右设置两个浮游菌取样点在左、中、右各设置一个沉降菌取样点在轨道、灌装针头、胶塞盘各处设置多个表面取样点可以参考ISO1464427文件记录：过程控制检测和实验室检测结果环境和人员监测结果设备功能（批报警记录，过滤器完整性测试）人员干扰操作、偏差、中断等--发生时间和持续时间培养基报废记录生产线清场记录培养基灌装过程记录28QA观察：整个培养基灌装过程应该有QA部门的全程观察所有培养基应按时间顺序进行标记，便于一旦有污染时追逐发生时间段灌装过程任何的干扰行为，QA观察员需要进行详细记录，以便识别可能的污染来源培养基灌装过程记录29过程录像不是强制要求有助于记录和偏差回顾需要包括整个过程需要有规程明确对录像内容的回顾有助于无菌操作培训需要规定保存方式和时间培养基灌装过程记录30无菌生产区域管道系统冻干机过程中的培养基泄漏培养基的撤出和报废培养基灌装过程/灌装前不得故意设计不具代表性的大清场，消毒应当采取措施保证验证不能对生产造成不良影响培养基灌装结束后的清场和清洗风险点解释控制方法配制溶液的注射用水温度高于7０℃高温会抑制微生物生长将配制培养基的注射用水冷却到室温，在室温下（20-25℃）配制正常生产溶液ｐＨ值偏高或偏低酸性或碱性环境不利于微生物生长培养基的pH调整到适合微生物生长的范围配制好的溶液在低温下保存低温会抑制微生物生长培养基在储存容器中常温保存抑菌影响分析---物料准备，储存过程抑菌因素影响分析风险点解释控制方法生产过程中使用惰性气体（如氮气）保护产品大多数需氧微生物，惰性气体有一定的抑菌作用用压缩空气或空气来代替惰性气体培养基灌装量偏少西林瓶内壁不能被完全接触，微生物不能生长

10ml西林瓶灌装至少2-4ml培养基，以保证足够量培养基用于培养抑菌影响分析---灌装抑菌因素影响分析风险点解释控制方法对设备的清洗、消毒和灭菌消毒剂会杀灭或微生物避免设备上的消毒剂残留正常生产时消毒剂（如喷洒消毒酒精，对操作人员手部消毒）的使用，消毒剂会杀灭微生物对于模拟试验过程中消毒剂（如喷洒消毒酒精）的使用，应该注意不能超出正常生产时的使用频率，不能将消毒剂直接接触到培养基上。班次轮换，清场消毒消毒剂会杀灭微生物对于两班次灌装轮换期间不进行消毒清场抑菌影响分析---中间过程抑菌因素影响分析风险点解释控制方法抽真空过低真空度有抑菌作用。过低真空度还会导致培养基失水。灌装好的西林瓶放入冻干机，放置数小时以上模拟冻干过程。使用轻微真空（500mbar以上），模拟气流流动低温冷冻低温会抑制微生物生长不进行冷冻操作，保持常温抑菌影响分析---冻干抑菌因素影响分析培养基灌装方案设计总结设计的方案需要具有代表性建立书面的规程，SOP指定如何进行方案设计必要时设计多次培养基灌装可以考虑穿插在生产过程中进行，挑战整个生产时限3.结果解释和偏差调查培养基灌装的接受标准培养基模拟试验的目标是不出现长菌，且遵循以下原则：灌装少于5000支时，不应检出污染品；2.灌装在5000至10000时：(1)有1支污染需进行调查，并考虑重复培养基灌装试验(2)2支污染需进行调查，并可即视作再验证的理由3.灌装超过10000支时：(1)1支污染需进行调查(2)2支污染需进行调查，并可即视作再验证的理由4.发生任何微生物污染时，均应进行调查。培养结果阳性调查当培养基灌装出现阳性结果时，不管是否符合合格标准，都必须进行调查制定的CAPA需要针对污染的原因或不良无菌操作行为分离到的微生物应鉴别到种。调查过程中应详细分析可能的产生阳性结果的原因。科学评估工艺的可靠性以及上市产品可能存在的风险对于超出标准的结果，应当在调查清楚原因后再次进行培养基灌装。培养结果阳性调查如果未达到接受标准:

在明确纠偏行动前，需考虑暂停生产。在工艺重新确认前的产品不得放行。在本次培养基灌装之后生产的到下一次成功的培养基灌装之间的产品都需要被进行回顾，评估其无菌失败的风险。（培养基灌装结果出来之前就进行风险生产）在该次培养基灌装和上一次成功的培养基灌装之间的产品也需要被进行回顾，评估其无菌失败的风险。必要时，需制定纠偏和预防性措施，并进行工艺的重新确认。污染调查举例

发现污染瓶的调查应该从人、机、料、法、环各个方面进行调查。（1）生产环境监测数据（粒子、浮游菌、沉降碟等）（2）对人员的监测结果（3）高效过滤器的完整性检测数据（4）层流台性能数据（气流流速、压差记录等）（5）生产房间监控数据（空气流向、工作台面气流方向速度）（6）人员培训情况，操作资质和能力（7）干扰模拟的执行情况（8）无菌室生产用具和其他相关物品的灭菌储存情况污染调查举例

（9）微生物鉴定结果，以帮助确定来源（10）清洁消毒流程的执行情况（11）设备仪器的校验结果（12）生产前后产品过滤器的完整性测试数据（13）生产过程发生的偏差（14）设备的CIP/SIP的情况（15）培养基的培养能力研究（16）生产线和培养基灌装的历史数据分析污染调查举例根据调查分析确定可能引起污染的原因，针对性制定有效措施。所有调查行动、改进措施和结果都应当形成正式文件记录。培养基灌装失效培养基灌装试验结果被认作无效的情况不应该频繁发生，更不能直接将失败的培养基灌装结果视为无效在符合明确的书面规程要求的情况下才能做出试验无效的判定，此时，应给出支持文件并