长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性研究课件

延边大学本科毕业论文长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性研究TheMyceliumTissueIsolationandTheStudyonNutritionalCharacteristicsofWideSparassiacrispaofChangbaiMountain延边大学本科毕业论文长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性主要内容材料与方法前言12结果与分析3结论4主要内容材料与方法前言12结果与分析3结2

前言前言3绣球菌[Sparassiacrispa（Wulf.）Fr.]又名绣球蕈、对花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窝菌、白绣球花、绣球蘑。分类学上隶属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、绣球菌科、绣球菌属（Sparassis）。绣球菌[Sparassiacrispa（W4 绣球菌子实体肉质洁白细嫩，有茴香气味，鲜美异常，营养价值高，含有17种氨基酸，基本包含所有的必需氨基酸。 绣球菌子实体肉质洁白细嫩，有茴香气味，鲜美异常，营养价值高5药用价值增加白血球，提高人体免疫力，对癌细胞具有直接杀伤作用绣球菌素具抗真菌活性治疗高血压、糖尿病、肝病等多种疾病药用价值6

本试验对采自长白山林区的野生绣球菌进行组织分离，并研究其菌丝体生长的营养条件，筛选出适宜长白山林区野生绣球菌菌丝生长的最佳营养条件，为开发、利用这一野生资源提供理论依据。本试验对采自长白山林区的野生绣球菌进行组织分7

材料材料8本研究所用野生绣球菌标本由延边大学农学院食用真菌实验室课题组成员于2010年7月采自长白山林区，由吉林农业大学图力古尔教授鉴定。将标本带回室内自然阴干，干燥后即可用于子实体组织分离菌种，纯化培养，获得试验所用菌株。试验材料本研究所用野生绣球菌标本由延边大学农学9供试培养基PDA培养基：马铃薯200g，葡萄20g，琼脂20g，加水至1000ml，pH自然。基础培养基：葡萄糖20g，蛋白胨2g，MgSO40.5g，琼脂20g，加水至1000ml，pH自然。供试培养基PDA培养基：马铃薯200g，葡萄20g，10试验方法试验方法111.组织分离1.1材料及用具野生绣球菌型大、颜色正、无霉、无虫害的子实体，无菌超净工作台，斜面培养基（10管），剪刀，镊子，酒精灯1.2组织分离组织分离过程在超净工作台内，整个过程要遵循无菌操作。1.3纯化培养1.组织分离1.1材料及用具12

剪刀剪取部分绣球菌子实体75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的子实体约1min无菌剪刀将四周边缘剪掉选取远离基部的组织长≈0.5㎝宽≈0.2㎝无菌镊子夹取酒精灯外焰上方2-3次接种于斜面培养基中下部25℃恒温培养箱暗培养12天左右新生长出的菌丝接种块接种于平板培养基上25℃培养室纯化培养所得菌丝接种于斜面培养基上25℃恒温培养箱暗培养菌丝长满试管后4℃冰箱中保存剪刀剪取部分75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的无菌剪132.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响碳源处理：分别设置果糖、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖包括葡萄糖各20g为碳源处理，以不加任何碳源为对照。重复次数：5次测定项目：菌丝长速，菌丝长势，菌落色泽及菌落边缘等特征。数据分析：采用Excel2003进行整理，用SPSS11.5软件中Duncan检验进行差异显著性分析。2.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响碳源处理：分别设置果14氮源处理：以基础培养基为标准，分别设置酵母膏、麸皮、黄豆粉、KNO3、(NH4)2SO4、NH4Cl包括蛋白胨各2g为不同氮源处理，以不加任何氮源为对照。重复次数、测定项目、数据分析同碳源处理。3.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响氮源处理：以基础培养基为标准，分别设置酵母膏、麸皮、黄豆粉、15无机盐处理：分别设置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、CuSO4包括MgSO4各0.5g为不同无机盐处理，以不加任何无机盐为对照。重复次数、测定项目、数据分析同碳源处理。4.不同无机盐对绣球菌菌丝体培养特性的影响无机盐处理：分别设置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、Cu16结果与分析结果与分析17

图2分离纯化后的绣球菌菌株1.野生绣球菌组织分离图2分离纯化后的绣球菌菌株1.野生绣球菌组织分离182.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。表1不同碳源对绣球菌菌丝体生长的影响Table1TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa2.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀19图3不同碳源对绣球菌菌丝体生长影响Fig.3TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa图3不同碳源对绣球菌菌丝体生长影响203.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响表2不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响Table2TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写英文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。3.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响表2不同氮源对绣球21图4不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响Fig.4TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa图4不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响22表3不同无机盐对绣球菌菌丝体生长的影响Table3TheeffectsofdifferentInorganiconthegrowthofmyceliumofSparassiacrispa4.不同无机盐对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写英文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。表3不同无机盐对绣球菌菌丝体生长的影响4.不同无机盐对绣球23图5不同无机盐对绣球菌菌丝体生长的影响Fig.5TheeffectsofdifferentInorganiconthegrowthofmyceliumofSparassiacrispa图5不同无机盐对绣球菌菌丝体生长的影响24结论结论251.采用组织分离纯化法可以得到长白山野生绣球菌菌株。1.采用组织分离纯化法可以得到长白山野生绣球菌菌株。26采用组织分离纯化法可以得到长白山野生绣球菌菌株。

绣球菌菌丝体能利用多种碳源、氮源、无机盐。最佳碳源为淀粉，其次是乳糖和葡萄糖；最佳氮源为酵母膏，其次是蛋白胨；最佳无机盐为硫酸钙，其次是硫酸镁和硫酸锌，硫酸铜抑制绣球菌菌丝体生长。采用组织分离纯化法可以得到长白山野生绣球菌菌株。27ThankYou!请各位老师批评指正！ThankYou!请各位老师批评指正！延边大学本科毕业论文长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性研究TheMyceliumTissueIsolationandTheStudyonNutritionalCharacteristicsofWideSparassiacrispaofChangbaiMountain延边大学本科毕业论文长白山野生绣球菌菌丝体组织分离及营养特性主要内容材料与方法前言12结果与分析3结论4主要内容材料与方法前言12结果与分析3结30

前言前言31绣球菌[Sparassiacrispa（Wulf.）Fr.]又名绣球蕈、对花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窝菌、白绣球花、绣球蘑。分类学上隶属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、绣球菌科、绣球菌属（Sparassis）。绣球菌[Sparassiacrispa（W32 绣球菌子实体肉质洁白细嫩，有茴香气味，鲜美异常，营养价值高，含有17种氨基酸，基本包含所有的必需氨基酸。 绣球菌子实体肉质洁白细嫩，有茴香气味，鲜美异常，营养价值高33药用价值增加白血球，提高人体免疫力，对癌细胞具有直接杀伤作用绣球菌素具抗真菌活性治疗高血压、糖尿病、肝病等多种疾病药用价值34

本试验对采自长白山林区的野生绣球菌进行组织分离，并研究其菌丝体生长的营养条件，筛选出适宜长白山林区野生绣球菌菌丝生长的最佳营养条件，为开发、利用这一野生资源提供理论依据。本试验对采自长白山林区的野生绣球菌进行组织分35

材料材料36本研究所用野生绣球菌标本由延边大学农学院食用真菌实验室课题组成员于2010年7月采自长白山林区，由吉林农业大学图力古尔教授鉴定。将标本带回室内自然阴干，干燥后即可用于子实体组织分离菌种，纯化培养，获得试验所用菌株。试验材料本研究所用野生绣球菌标本由延边大学农学37供试培养基PDA培养基：马铃薯200g，葡萄20g，琼脂20g，加水至1000ml，pH自然。基础培养基：葡萄糖20g，蛋白胨2g，MgSO40.5g，琼脂20g，加水至1000ml，pH自然。供试培养基PDA培养基：马铃薯200g，葡萄20g，38试验方法试验方法391.组织分离1.1材料及用具野生绣球菌型大、颜色正、无霉、无虫害的子实体，无菌超净工作台，斜面培养基（10管），剪刀，镊子，酒精灯1.2组织分离组织分离过程在超净工作台内，整个过程要遵循无菌操作。1.3纯化培养1.组织分离1.1材料及用具40

剪刀剪取部分绣球菌子实体75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的子实体约1min无菌剪刀将四周边缘剪掉选取远离基部的组织长≈0.5㎝宽≈0.2㎝无菌镊子夹取酒精灯外焰上方2-3次接种于斜面培养基中下部25℃恒温培养箱暗培养12天左右新生长出的菌丝接种块接种于平板培养基上25℃培养室纯化培养所得菌丝接种于斜面培养基上25℃恒温培养箱暗培养菌丝长满试管后4℃冰箱中保存剪刀剪取部分75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的无菌剪412.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响碳源处理：分别设置果糖、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖包括葡萄糖各20g为碳源处理，以不加任何碳源为对照。重复次数：5次测定项目：菌丝长速，菌丝长势，菌落色泽及菌落边缘等特征。数据分析：采用Excel2003进行整理，用SPSS11.5软件中Duncan检验进行差异显著性分析。2.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响碳源处理：分别设置果42氮源处理：以基础培养基为标准，分别设置酵母膏、麸皮、黄豆粉、KNO3、(NH4)2SO4、NH4Cl包括蛋白胨各2g为不同氮源处理，以不加任何氮源为对照。重复次数、测定项目、数据分析同碳源处理。3.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响氮源处理：以基础培养基为标准，分别设置酵母膏、麸皮、黄豆粉、43无机盐处理：分别设置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、CuSO4包括MgSO4各0.5g为不同无机盐处理，以不加任何无机盐为对照。重复次数、测定项目、数据分析同碳源处理。4.不同无机盐对绣球菌菌丝体培养特性的影响无机盐处理：分别设置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、Cu44结果与分析结果与分析45

图2分离纯化后的绣球菌菌株1.野生绣球菌组织分离图2分离纯化后的绣球菌菌株1.野生绣球菌组织分离462.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。表1不同碳源对绣球菌菌丝体生长的影响Table1TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa2.不同碳源对绣球菌菌丝体培养特性的影响注：“+”表示菌丝稀47图3不同碳源对绣球菌菌丝体生长影响Fig.3TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa图3不同碳源对绣球菌菌丝体生长影响483.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响表2不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响Table2TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa注：“+”表示菌丝稀疏、纤弱，“++”表示菌丝密、长势壮，“+++”表示菌丝浓密、粗壮。小写英文字母表示P<0.05水平上的差异显著性。数据为5个重复的平均值±SE。3.不同氮源对绣球菌菌丝体培养特性的影响表2不同氮源对绣球49图4不同氮源对绣球菌菌丝体生长的影响Fig.4Theeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgro