地塞米松对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用课件

地塞米松对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用wanghui王慧一、项目科学水平、意义本研究将糖皮质激素地塞米松应用于肝脏缺血再灌注损伤的防治，观察其对肝脏缺血再灌注损伤早期Toll样受体4（TLR4）蛋白表达的影响，探讨TLR4信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中的作用，以及地塞米松改善肝脏缺血再灌注损伤的作用机制，为临床肝脏切除和肝脏移植中缺血再灌注损伤的预防打下坚实的理论基础。

本项目为肝脏缺血再灌注损伤的防治探索新的方法，此种方法符合中国国情，将开辟新的研究领域。地塞米松是人工合成的肾上腺皮质激素，由于其显著的药理作用和廉价易获得的特性成为众多学者研究的热点，故广泛应用于各科治疗多种疾病，是临床常用药物。本课题立题科学、思路新颖，抓住了目前国际上肝脏缺血再灌注损伤研究的热点。本研究将地塞米松应用于肝脏缺血再灌注损伤的防治，并观察对TLR4信号通路影响，为临床肝切除和肝移植过程中的肝缺血再灌注损伤的防护提供理论指导和技术支持。二、本项目研究的立项依据即国内外进展（列出主要参考文献）

肝脏缺血再灌注损伤是肝脏和创伤外科疾病中常见的病理过程，对其机制及防治措施的研究具有重要的临床意义。导致肝脏缺血再灌注损伤的原因众多，确切机理目前仍不十分清楚。其发生的病理生理机制复杂，有诸多因素参与其中，形成相互制约和相互促进的关系，包括炎性细胞浸润和血小板聚集，氧自由基的产生和释放、各种炎性介质（如粘附分子和白三烯）和血管活性物质（如一氧化氮和内皮素等）的产生有关。Toll样受体4和核因子NF-κB(Nuclearfactor-kappaB，NF-κB)很可能是肝脏缺血再灌注损伤早期出现的信号通路。Toll样受体(Toll-likereceptors，TLRs)为新近发现的一种跨膜受体，在哺乳动物已发现11种(TLR1-TLR11)，分别识别不同的病原相关分子模式，在炎症信号通路中起着至关重要的作用。

肝脏缺血再灌注损伤预防的的方法大致可分为三种，即缺血预处理(IP)、药物预处理和基因治疗。IP即在缺血前行几次短暂的缺血再灌注损伤过程，肝脏可以耐受更长时间的缺血。然而肝脏IP的保护作用毕竟有限，Schulz等发现IP经典保护作用能维持1-2h，在经历200min较长时间缺血后IP作用消失。

药物预处理是指利用某些活性物质直接或间接的药理作用来达到类似缺血预处理的保护作用，增强组织或细胞对缺血再灌注损伤的耐受性，从而减轻损伤。针对缺血再灌注损伤的机制，目前研究已发现在肝脏具有预处理效果的药物主要有钙通道阻滞剂、自由基清除剂、改善微循环或细胞能量代谢的药物、阿霉素、熊去氧胆酸盐以及心房肽等。以上这些预处理的药物虽然从各个不同的角度减轻肝脏缺血再灌注损伤，但其中许多药物或有较大的毒副作用，或是作用环节单一，因而影响了它们在临床的应用。随着对肝脏内皮细胞在缺血再灌注损伤中作用的认识以及分子生物学的发展，转基因治疗和基因敲除技术被应用于缺血再灌注损伤的防护。利用该技术，有效清除有害基因，可控制炎症反应强度，限制排斥，抑制内皮细胞活化，减轻缺血再灌注损伤。但目前还限于实验研究，而且存在基因转染率不高和原癌基因激活的可能等问题。动物实验和临床实践均证实糖皮质激素对肝缺血再灌注素损伤具有保护作用。研究发现，家兔入肝血流阻断前3O分钟预用甲基强的松龙(MP)30mg／kg，可显著提高家兔对肝缺血的耐受性，提高其生存率，减轻肝组织损害。甲基强的松龙与缺血预处理的作用一样，能够减轻正常大鼠缺血再灌注损伤后的炎症反应，降低线粒体氧化应激酶、减少肠道菌群和细菌移位。严重肝外伤病人使用Pringles法阻断肝血流控制肝脏大出血，为延长肝脏耐受缺血时间，阻断肝血流前，常规静注甲基强的松龙30～40mg／kg，并同时降低肝表面温度至27～32℃，可以取得满意效果。

术前给予糖皮质激素能够减少肝脏缺血再灌注损伤，降低肝切除术后（与肝脏缺血再灌注损伤有关的）并发症的发生。但是作用机制尚不清楚，也很少进行深入的研究。本课题立题科学、思路新颖，抓住了目前国际上肝脏缺血再灌注损伤研究的热点。本研究将地塞米松应用于肝脏缺血再灌注损伤的防治，并观察对TLR4信号通路影响，为临床肝切除和肝移植过程中的肝缺血再灌注损伤的防护提供理论指导和技术支持。主要参考文献1人参皂甙联合地塞米松对肝总动脉结扎大鼠肝功能的保护作用。中华肝脏病杂志2007；15（10）：793-7942地塞米松在肝脏缺血再灌注损伤中作用的研究进展。中华肝脏病杂志2010；18（11）：875-8773预处理对高原大鼠肝脏缺血再灌注损伤中防护作用。高原医学杂志2002；12（3）：8-114.活血化瘀注射液l号预处理与缺血预处理改善肝缺血再灌注损伤.世界华人消化杂志,2007;15(8):831-8375.HHI-I对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响.中国中西医结合外科杂志,2007;13(4):386-3926.肝脏缺血再灌注损伤防治的研究进展.中国全科医学，2007;10(20):1473-147三、本项目研究内容、研究目标和拟解决的关键问题

研究内容：（1）建立稳定的肝脏缺血再灌注损伤模型，观察地塞米松对肝缺血再灌注损伤时肝脏组织学改变的影响（2）地塞米松对肝缺血再灌注损伤时门静脉血内毒素和血浆TNF-α、IL-1β（3）地塞米松对肝缺血再灌注损伤时TLR4蛋白和mRNA表达的影响研究目标：

本研究将糖皮质激素地塞米松应用于肝脏缺血再灌注损伤的防治，观察其对肝脏缺血再灌注损伤早期Toll样受体4（TLR4）蛋白表达的影响，探讨TLR4信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中的作用，以及地塞米松改善肝脏缺血再灌注损伤的作用机制，为临床肝脏切除和肝脏移植中缺血再灌注损伤的预防打下坚实的理论基础。解决的关键问题：采用分子生物学方法和免疫组化检测大鼠肝缺血再灌注损伤中Toll样受体4表达！实验方法和步骤制作实验模型动物模型分4组假手术组缺血再灌注组地塞米松组丹参组检测门静脉内毒素血浆肿瘤坏死因子TNF-α白介素IL-1βTLR-4和mRNA四、本项目的创新点与特色将糖皮质激素地塞米松应用于肝脏缺血再灌注损伤，并研究其对Toll样受体4信号通路的影响。五、研究工作的总体安排及进度2012年3月～2012年4月：建立稳定的肝脏缺血再灌注损伤模型，观察地塞米松对肝缺血再灌注损伤时肝脏组织学改变的影响2012年5月～2012年6月：地塞米松对肝缺血再灌注损伤时门静脉血内毒素和血浆TNF-α、IL-1β2012年7月～2012年9月：地塞米松对肝缺血再灌注损伤时TLR4蛋白和mRNA的表达的影响2012年12月～2013年2月：总结材料，撰写论文，申报科研成果.六、研究工作的预期成果、应用前景预期成果糖皮质激素地塞米松I对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用，地塞米松的作用机制可能是下调Toll样受体4蛋白和mRNA的表达，降低血浆TNF-α、IL-1β和门静脉内毒素水平，抑制肝细胞凋亡，减轻肝组织的病理损害。预期发表国家级或省级论文2～3篇，申报省级或者国家级科研课题打下基础，培养具有科研初步能力和思维的大学生2-3名。预期应用前景在经过临床试验，将糖皮质激素地塞米松应用于临床肝脏切除和肝脏移植中肝缺血再灌注损伤的防护，减少术中出血量及术后肝功能障碍和其它并发症的发生，促进肝切除和肝脏移植患者尽快的康复，缩短住院时间，降低医疗费用，因此具有广阔的应用前景，具有巨大的经济效益和社会效益。还可以作为临床肝移植提高供肝耐受缺血、延长供肝保存时间的一个方法。

七、申请经费预算内容金额数（元）备