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文档简介

免疫共沉淀(CO—immunoprecipitation)用抗体将相应特定分子沉淀的同时，与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。免疫共沉淀可分为细胞内过表达蛋白、细胞内源性蛋白、组织内蛋白的免疫共沉淀。基本原理细胞裂解物中加入抗体，这样可与已知抗原形成特异的免疫复合物，若存在与已知抗原相互作用的蛋白质，则免疫复合物中还应包含这种蛋白质；经过洗脱，收集免疫复合物，然后分离该蛋白质，对该蛋白质进行N端氨基酸序列分析，推断出相应的核苷酸序列。将包含活性物质的组织或细胞构建成cDNA文库，以上述核苷酸序列为探针从cDNA文库中分离出cDNA克隆。一、样品处理：二、抗体-agarosebeads孵育三、抗体-agarosebeads复合物洗涤：四、鉴定免疫共沉淀技术的应用肿瘤酶与病毒信号传导寄生虫免疫共沉淀技术的优点与局限性优点：

与蛋白质亲和层析一样，检测的产物是蛋白质的粗提物； 抗原与相互作用的蛋白以细胞中相类似的浓度存在，避免了过量表达所造成的人为效应； 蛋白质以翻译后被修饰的天然状态存在；

复合物以天然状态存在，蛋白的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免人为影响，可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体.乙醇沉淀dna和异丙醇沉淀dna的区别

异丙醇和酒精都是有机溶剂，一般来讲，提取质粒的时候一开始都要用异丙醇沉淀，因为异丙醇沉淀的效果要好一些，但最后大多用酒精沉淀，因为酒精容易挥发，对下游的实验影响小

。

异丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，用乙醇的目的是去盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。

有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度。

在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇，乙醇的极性要强于异丙醇，所以一般用2倍体积乙醇沉淀，但在多糖、蛋白含量高时，用异丙醇沉淀可部分克服这种污染，尤其用异丙醇在室温下沉淀对摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效。

异丙醇沉淀核酸时，高浓度盐存在将使大量多糖存在在溶液中，从而可

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