1果胶酶酶活力测定方法_第1页
1果胶酶酶活力测定方法_第2页
1果胶酶酶活力测定方法_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

果胶酶酶活力测定方法果胶酶降解底物的糖苷键，生成含还原端基产物，故采用常用的还原糖测定法—DNS法。测定原理果胶酶在一定条件下水解底物果胶，生成半乳糖醛酸等醛糖，醛糖与3,5—二硝基水杨酸共热产生棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和含有呈色氨基化合物的反应液颜色深浅成正比，在540nm下测其吸光度，从而计算出果胶酶酶活。·酶活性单位定义：在上述测定条件下，以每分钟水解底物生成1μg还原糖所需酶量定义为一个酶活性单位，单位为U/mL。DNS试剂400mL6.3g3,5-21g185g水合酒石酸钾钠(C4H4O6KNa-4H2O)、5.0g苯酚、5.0g无水亚硫酸钠，温水浴不超过4810005~7d6个月。pH7.0的磷酸—柠檬酸缓冲溶液71.62g、C6H8O7·H2O21.01g1000mL，按16.47:3.53的体积比混合，即可。底物的配制1.00gpH7.00.5100mL0~4℃冰箱里。粗酶液的制备取发酵液，于10000r/min，4℃离心5min后，取上清液即为酶液。酶学性质分析酶的最适温度45505560657.0的条件下，反应30min100%，其他的以它的百分比计。酶的最适pH在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0（pH≤8.0的用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，pH>8.0的用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，最适温度的条件下，反应30mi100%，其他的以它的百分比计。酶的温度稳定性在适的pH条件下，将酶液放置在不同的温度（55℃、60℃、65℃、70℃）下，隔约15pH100%他的以它的百分比计。酶的pH稳定性分别用不同pH（pH3.pH4.0pH5.0pH6.0pH7.pH8.0pH9.pH10.0，254h后，然后调到最适pH条件下，测定其pH100%。结果及分析酶的最适温度pH7.00.2mol/LNa2HPO4-0.lmol/L反应。结果见图2，果胶酶的最适反应温度范围为55~65℃，最适温度为60℃。酶的最适pHpH4pH8.0~9.0pHpH8.5时候酶活达到最高值。热稳定性将粗酶液分别置于55℃、60℃、65℃、70℃的恒温水浴中，每隔一定的时间取样测定65530min时，酶活有略为上升，酶活力是原来的120%，这可能是在保温的过程中助于酶活构象的展开，更易酶反6015min的时候也有酶活上升的现象，之后酶活120min后，残余酶活力是原来的60120min61%70℃保温的过程中，在保温20min120min时，残余酶活力降至原来的29%。pH稳定性分别用不同pH（pH3.0pH4.pH5.0pH6.0pH7.pH8.0pH9.pH10.0，254hpH条件下，测定其酶pH8pH3.0~10.0时有很好的稳定性,在

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 辅导培训

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论