盐酸托莫西汀胶囊在健康人体的药动学研究

盐酸托莫西汀胶囊在安康人体的药动学研究【摘要】目的建立快速、灵敏的托莫西汀人体内血药浓度的高效液相色谱串联质谱测定法，并对12名安康志愿者口服盐酸托莫西汀胶囊后在人体内的药动学过程进展研究。方法12名安康志愿者单剂量口服给药20g后，分别于给药前和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24h采集血样。用高效液相色谱串联质谱法测定血浆中托莫西汀的浓度，并采用DAS药动学程序对试验数据进展处理，求算有关药动学参数。结果单剂量口服给药盐酸托莫西汀胶囊20g后，其平均血药质量浓度-时间曲线拟合符合二室模型，T1/2、Tax、ax、AU0-24、AU0-∞分别为(4.55±0.79)h、(1.33±0.48)h、(225.18±48.53)μg·L-1、(971.34±219.52)μg·L-1·h和(992.60±229.93)μg·L-1·h。结论建立的托莫西汀人体内血药浓度测定方法灵敏、可靠、简便，盐酸托莫西汀胶囊单剂量给药后在中国安康人体内的药动学行为与国外文献报道根本一致。【关键词】盐酸托莫西汀胶囊;高效液相色谱串联质谱法;药动学Keyrds:atxetinehydrhlrideapsules;HPL/S/S;pharakinetis托莫西汀(atxetine，商品名：择思达)是第1个用于治疗注意缺陷多动障碍(attentindefiithyperativitydisrder，ADHD)的非兴奋性药物，目前已经在美国、英国、中国等多个国家上市并应用[1]。托莫西汀是一种去甲肾上腺素再摄取抑制剂，能选择性抑制突触前胺泵对去甲肾上腺素的再摄取，增强去甲肾上腺素的翻转效应，从而改善多动症的病症，间接促进认知的完成和注意力的集中[2,3]。有关托莫西汀的药动学研究，国内未见中国人体内托莫西汀药动学研究的文献报道。本试验对口服盐酸托莫西汀胶囊后在人体内的药动学过程进展研究。1仪器与材料1.2试药盐酸托莫西汀胶囊(每片含托莫西汀10g，批号：20220901，有效期至2022年8月，由海南某制药厂提供);盐酸托莫西汀对照品(美国Siga公司，批号：1004-0801002);内标物为盐酸氟西汀(浙江埃森医药，批号：A0907)。甲醇(默克公司，色谱纯);甲酸铵(美国Siga公司，质谱纯);甲酸(迪马公司，色谱级);碳酸氢钠(广州化学试剂厂，分析纯);水为重蒸去离子水。2方法与结果2.1对照品和内标溶液分别准确称取盐酸托莫西廷盐酸氟西汀对照品11.7g和11.4g(分别含托莫西廷氟西汀各10g)，分别置10L容量瓶中，用流动相溶解定容至刻度，即配制成质量浓度为1g·L-1的贮备液，贮存于4℃冰箱避光保存备用。试验前按试验所需稀释成相应浓度的标准工作液。另稀释配置质量浓度为3000μg·L-1的内标氟西汀流动相溶液。2.2受试者选择试验前，试验方案和知情同意书经本院伦理委员会审批同意后，受试者签署知情同意书，并均进展常规体检和实验室检查(尿常规、血常规、肝功能、肾功能、心电图和胸透等)，合格者入选为受试者。有15名志愿者签署知情同意书，经全面体格检查后，胸透、心电图、血压、血尿常规及肝肾功能等各项指标均正常者12名入组，男女各半，年龄为19～27岁，平均(25±4)岁，身高160～178，平均(168±6)，体质量50～62kg，平均(56±6)kg。试验后，受试者体格复查。受试期间1个月内未服用任何其他药物，且在1个月内禁烟和禁酒。2.3给药方案12名受试者禁食12h后，于试验日早晨7：30空腹开场试验。受试者一次性口服受试制剂20g，用200L温开水送服，服药4h后给予统一低脂标准餐。给药后观察受试者的反响，记录受试者主诉的不良反响。2.4血样采集每例受试者均于用药前在前臂静脉安置留置针抽血，用药前采空白血4L，再分别于安置留置针给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24h分别采血3L/次，置肝素抗凝的试管中，3000r/in离心5in，取血浆，分两份于-30℃下冰柜保存，待用。整个试验过程均在医师和护士监护下进展，并于给药后不同时间监测受试者的反响，及时处理和记录试验过程中发生的不良反响。试验期间禁用其他药物及含咖啡因类饮料、烟和酒。转贴于论文联盟.ll.2.5样品测定2.5.3方法专属性分别取6名受试者的空白血浆0.5L置10L的带塞锥形玻璃离心管中，除不加内标外，按“2.5.2〞项依法操作，进样5μL，获得空白血浆样品的色谱图，如图1(A);将一定浓度的对照品溶液和内标溶液参加空白血浆中，依同法操作获得相应的色谱图1(B)，托莫西廷氟西汀的出峰时间分别约为1.24in和1.26in;取安康受试者给药后搜集的血浆样品，依同法操作，得色谱图1()。结果说明，空白血浆中内源性物质不干扰托莫西汀及内标氟西汀的测定。2.5.4标准曲线的制备和最低定量限确实证取空白血浆0.5L，分别参加质量浓度为10、20、50、100、500、1000、5000、10000和15000μg·L-1的托莫西汀对照品溶液50μL，振荡3s，使血浆药物质量浓度分别相当于1、2、5、10、50、100、500、1000和1500μg·L-1，其余按“2.5.2〞项处理。经HPL/S/S分析，以托莫西汀峰面积与内标峰面积之比(y)为纵坐标，以血浆托莫西汀浓度与内标浓度之比(x)为横坐标，权重系数为1/x2，得回归方程为y=0.5821x-2.5814×10-4，r=0.9975(n=9)，说明血浆中托莫西汀质量浓度在1～1500μg·L-1范围呈良好的线性关系。血浆样品托莫西汀定量下限质量浓度为1μg·L-1(S/N14)，平行对5个质量浓度为1μg·L-1的含药血浆样品处理后进展色谱分析，其方法回收率为101.82%，RSD为4.96%。2.5.5回收率及精细度试验按“2.5.4〞项方法分别配制低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)和高浓度(1000g·L-1)的托莫西汀血浆溶液各15份，分为3批，每批5份，并与每批的标准曲线同时进展，依“2.5.2〞项方法处理后取5μL进样，测定精细度，并计算质控样品的测得浓度，与配制浓度对照，求得方法回收率(见表1)。同法以空白血浆，除不加标准系列溶液和内标外，按“2.5.2〞项方法处理后，再参加相应浓度的托莫西汀和氟西汀，取5μL上清液进样，以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。结果低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)、高浓度托莫西汀(1000μg·L-1)的提取回收率分别为84.78%、85.49%和86.04%。精细度和提取回收率见表1。表1回收率与日内、日间精细度2.5.6稳定性试验按“2.5.4〞项方法分别配制低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)、高浓度(1000μg·L-1)的质控血浆样品，每个浓度21份样品分析，分为3组。分别考察了样品经室温放置1h和24h，冻融1次和3次，-20℃冻存1、12、24d的稳定性。中、高2个浓度样品3种条件检测结果的RSD均15%，低浓度样品3种条件检测结果的RSD均20%。2.5.7质控样品的监控按“2.5.4〞项方法分别配制低(2μg·L-1)、中(100μg·L-1)、高浓度(1000μg·L-1)的托莫西汀血浆样品置-20℃冻存备用，此即为血浆质控样品。检测每批血浆样品前需做随行标准曲线，并随行检测质控样品低、中、高3个浓度，每个浓度至少两样本，并应均匀分布在未知样品测试顺序中;结果质控样品检测结果其相对标准偏向均在15%内(低浓度在20%)。2.6血浆样品中药物质量浓度的测定及药动学参数的计算2.7不良反响情况12名受试者在试验过程中，均未出现不良反响，试验后进展体格复查，胸透、心电图、血压、血尿常规及肝肾功能等各项指标均正常。表212名安康志愿者给药后的主要药动学参数3讨论盐酸托莫西汀胶囊人体药动学研究未见国内文献报道。单次口服20g后T1/2约为4.55h，ax约为225.18μg·L-1，Tax为1.33h，个体差异大，可能与YP2D6存在个体差异有关，与文献[1-3]报道相似，用药时应引起