螺旋体、支原体、衣原体、立克次体2013.10课件

螺旋体、支原体、

衣原体、立克次体

武汉大学中南医院周俊英

第十六章螺旋体螺旋体（spirochete)：是一种细长、柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。在分类学上的地位介于细菌与原虫之间。第一节分类螺旋体目螺旋体科9个属（螺旋体、疏螺旋体、密螺旋体、脊螺旋体等）蛇形螺旋体科2个属（蛇形螺旋体、短螺旋体）钩端螺旋体科2个属（钩端螺旋体、细丝体）第二节钩端螺旋体

一、临床意义

钩端螺旋体是钩端螺旋体病的病原体。

致病物质：内毒素样物质（ELS）/脂多糖样物质（LLS)溶血素细胞毒性因子（CTF）细胞致病作用物质2、所致疾病：钩体病传染源及储存宿主:带菌动物（我国主要为猪和鼠）传播途径:皮肤粘膜接触传播;易感人群人和动物临床表现发热头痛一身乏，眼红腿痛淋巴大二、生物学特性螺旋细密、规则，一端或两端呈钩状；有两根周浆鞭毛，运动活泼；G-，但不易着色，Fontana镀银染色成棕褐色。营养要求高，需氧或微需氧，常用Korthof培养基，生长缓慢；最适温度28~30℃。在水及土壤中可存活数天至数月；对青霉素敏感根据属特异性抗原、群特异性抗原、型特异性抗原分25个血清群、273个血清型（四）分离培养与鉴定：血液、尿液培养接种于Korthof培养基中培养后作暗视

野检查。（五）抗体检测1、显微镜凝集试验2、间接凝集试验：炭粒(>1:8)；乳胶(>1:2)3、补体结合试验：血清效价(>1:20)4、或取双份血清，抗体效价呈4倍增高（六）动物试验一、伯氏疏螺旋体（一）临床意义1.致病物质：粘附素，外膜蛋白OspA，LPS2.自然储存宿主：哺乳动物

传播媒介：硬蜱3.Lyme病临床表现：游走性红斑（二）生物学特性长10~40μm，两端稍尖；周浆鞭毛有2~100根以上，与运动有关；Giemsa染色为淡紫色，镀银染色为棕褐色；营养要求高，微需氧，5%~10%CO2促进生长，常用BSK培养基，生长缓慢；莱姆病的病原体：伯氏、伽氏、埃氏。（三）微生物学检查标本中病原体数量少，早期和晚期均难分离出螺旋体。2.分子生物学技术3.抗体检测：免疫荧光法及ELISA法检测病人体内的抗体。二、回归热疏螺旋体流行性回归热（虱传回归热）病原体：回归热疏螺旋体，我国多见传播途径：体虱临床症状：高热反复发作3～9次。地方性回归热（蜱传回归热）病原体：杜通疏螺旋体等15种传播途径：软蜱储存宿主：啮齿动物临床症状：高热反复发作3～9次。三、奋森螺旋体1、体内正常菌群，寄生在口腔、齿龈及咽部2、协同引起奋森咽峡炎、牙龈炎、溃疡性口腔炎、口颊坏疽3、对青霉素、四环素等敏感第四节密螺旋体属分为致病与非致病两大类苍白螺旋体：苍白亚种梅毒性病

地方亚种地方性梅毒非性病

极细亚种雅司病非性病品他螺旋体：品他病2.所致疾病：梅毒先天性：母体通过胎盘传给胎儿获得性：性传播或医源性传播获得性梅毒临床分期：分为三期（1）Ⅰ期（初期）梅毒：感染后3周左右局部出现无痛性硬下疳。感染性极强（2）Ⅱ期梅毒：①发生于硬下疳出现后2~8周。②全身皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大。

先天性梅毒：

母体经胎盘、产道通过传给胎儿胎儿期：流产死胎生后：锯齿形牙马鞍形鼻一、生物学性状

1．形态与染色:细长螺旋状，两端尖直（与钩体相区别）。在暗视野显微镜下可见:运动很活泼，为闪光白色。用Fontana镀银染色法:染成棕褐色。用Giemsa染色法，染成浅红色

微生物检查检验程序标本采集（分泌物、穿刺液、组织块）标本直接检查：暗视野显微镜检查免疫荧光染色检查镀银染色检查核酸检测体外培养——迄今仍未解决抗体检测——实验室辅助诊断的重要手段暗视野显微镜检查初期梅毒，取下疳分泌物；二期梅毒取梅毒疹、病灶渗出物或局部淋巴结穿刺液，将上述检材置于玻片上用暗视野显微镜检查，如见有呈现运动活泼，沿其长轴滚动、屈伸、旋转、前后移行等的螺旋体即有诊断意义核酸检测用PCR技术直接检测临床标本中梅毒螺旋体的特异性DNA片段，用于检测的引物和探针是编码外膜蛋白4.7kD的基因，其扩增产物经斑点印迹，或电泳以Southern印迹法鉴定非密螺旋体抗原试验方法性病研究所实验室(VDRL)玻片试验所用抗原：主要心卵磷脂和胆固醇待检血清经56℃30min灭活，滴加于玻片，加等量抗原液，5min充分混匀反应后观察结果有大片絮状凝聚物为(3+)，中等凝聚物为(2+)，细小凝聚物为(+)，液体混浊为(—)非密螺旋体抗原试验方法快速血浆反应素环状卡片试验(RPR）用活性炭吸附VDRL抗原。取待检血清加于环状卡内，加VDRL抗原致敏活性炭1滴，旋转摇匀8min，观察结果结果判断1.阳性反应（+++～++++）：可见中等或较大的黑色凝聚物。2.弱阳性反应（+～++）：可见较小的黑色凝聚物。3.阴性反应（-）：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物RPR反应原理当机体感染梅毒螺旋体后,经过一段时间潜伏期,在血清中产生一定数量的抗类脂质抗体，快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）在抗原中加入炭颗粒，敏感性和特异性与VDRL试验相似。其优点为可不用显微镜，观察结果。非梅毒螺旋体抗原试验方法甲苯胺红不加热血清实验（TRUST）用甲苯胺红染料颗粒替代活性炭颗粒吸附VDRL抗原试验方法和结果判定相同阳性结果出现红色絮状凝集也可将标本倍比稀释进行半定量试验密螺旋体抗原试验密螺旋体抗原试验（特异性）用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性抗体由于梅毒螺旋体、雅司螺旋体等抗原性相似，所以用血清学试验不可能区别这些密螺旋体及其所致疾病密螺旋体抗原试验方法荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)1、反应原理：用Nichols株梅毒螺旋体抗原悬液涂成菌膜，吸附待检血清(经吸附剂除去非特异性抗体)的lgG抗体，再用荧光素标记的羊抗人lgG抗体，显示待检血清中含有的抗螺旋体抗体。2、操作步骤（1）抗原片制备：Nichols株梅毒螺旋体抗原悬液，在玻片上涂直径为5mm的菌膜，干后甲醇固定。（2）待检血清预处理：取50ul血清（经56℃30分钟灭活）与200ul吸附剂混匀，37℃作用30分钟，充分吸除非特异性抗体。（3）夹心法荧光显色：吸附后的血清用磷酸盐缓冲液（PBS）作1：20—1:320的倍比稀释，将稀释后的血清分别滴加于抗原菌膜上，置湿盒内37℃孵育30分钟，然后用PBS洗片，并将玻片在PBS中浸洗，洗3次，每次5分钟，吹干。各抗原反应片上滴加荧光素标记的羊抗人lgG抗体，置湿盒37℃孵育30分钟，再用PBS按前法洗片，干后用甘油缓冲液封片。3、结果判定阳性：高倍视野（10条左右）出现荧光，则为（++），15条左右则为（+++），约20条出现强荧光则为（++++）。阴性结果参照阴性对照血清判定为（-）或（+）。密螺旋体抗原试验梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验(FTA-ABS-DS)抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝检测(MHA-TP)免疫印迹试验(immuno-blottingtest)密螺旋体抗原试验ELISA用Nichols株为抗原，以超声波击碎。此法可用于各期梅毒诊断，灵敏度为96％，对感染血清灵敏度为95％。与荧光抗体双吸收法(FTA-ABS-DS)比较，两法符合率为96％。ELISA试剂具有价廉、保存时间久且稳定(4个月)等优点，是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。WHO推荐用VDRL、RPR法对血清进行过筛试验，出现阳性者用FTA-ABS、FTA-ABS-DS、MHA-TP、ELISA和免疫印迹试验等方法做确认试验二、其他密螺旋体有苍白密螺旋体地方亚种、极细亚种以及品他密螺旋体，分别引起地方性梅毒、雅司和品他病。大多发生于经济较落后地区的儿童

小结梅毒螺旋体的特点大细长、弯曲、柔软、运动活泼螺菌镀银染色获得性梅毒：3期；先天性梅毒不能培养检测:根据病史和现病史查梅毒螺旋体、

查特异性抗体和非特异性抗体反应素治疗彻底青霉素

第十七章支原体mycopalsma

无细胞壁,多形态、能透过滤菌器的、能在无生命培养基生长繁殖的最小原核细胞型微生物。因其生长后能形成分枝长丝，故命名为支原体。

呼吸道粘膜泌尿生殖道粘膜支原体与细菌L型的区别?

支原体自然界广泛存在在遗传上与细菌无关（独立的微生物）生长时需胆固醇等渗培养生长慢，菌落小DNA中G+C<41mol%

L型由细菌诱导生成在遗传上与细菌相关（可回复）生长时不一定需胆固醇高渗培养生长快，菌落大DNA中G+C>41mol%支原体分类与命名柔膜体纲支原体目无胆甾原体科支原体科螺旋原体科支原体属脲原体属血虫体属血巴尔通体属对人致病的支原体肺炎支原体：口咽部（人类原发性非典型性肺炎）人型支原体：泌尿生殖道、口咽部（轻度咽炎）生殖器支原体：泌尿生殖道解脲脲原体：泌尿生殖道(炎症和不育症）穿通支原体：AIDS的辅助致病因子临床意义肺炎支原体感染呈全球性，以温带为主该病经飞沫传染，间歇性、长期缓慢播散主要侵犯呼吸系统首先引起上呼吸道感染，然后下行引起气管炎、支气管炎、毛细支气管炎和肺炎可引起双侧肺炎和肺外并发症肺炎支原体

（Mycoplasmapneumoniae,MP）形态结构大小：2-5μm，通过滤菌器。

呈短丝状，尖端有一球状特殊结构，类似酒瓶状无细胞壁，仅有细胞膜。

革兰染色阴性，Giemsa染色呈淡紫色细胞膜由三层结构组成，内外两层为蛋白质，中间为脂质，其中胆固醇含量多（占36％）

形态结构支原体培养特征：营养要求高添加10%-20%血清，PH7.6-8.0，低于7.0死亡

二分裂繁殖为主，也有出芽、分枝等方法。生长慢（2-7天或2周），荷包蛋样菌落抗原结构

糖脂抗原，特异性差细胞膜外层蛋白质抗原（P1蛋白等）是支原体的主要型特异性抗原抗原性可用GIT和MIT来鉴定GIT：生长抑制试验(growthinhibitiontest)MIT：代谢抑制试验（metabolisminhibitiontest）生长抑制试验支原体培养时，在培养皿上贴吸附有型特异性抗血清的滤纸片，看是否抑制生长抗血清纸片抑菌圈代谢抑制试验支原体含葡萄糖液体培养基(含有抗血清及酚红)酚红不变色(抗体与该支原体相应，支原体代谢受抑制)酚红变色(抗体与该支原体不对应，支原体代谢不被抑制)培养接种培养特性可在人工培养基上生长繁殖，但对营养要求较高，需要胆固醇和葡萄糖1～2周后出现菌落，固体培养基上呈草莓状，反复传代后呈“荷包蛋”状菌落能吸附豚鼠红细胞，产生溶血素半固体培养基上可见细小粒状菌落液体培养基中呈极浅淡的混浊生长生化反应能利用葡萄糖，不水解精氨酸，不利用尿素可还原美蓝，可还原无色的TTC（氯化三苯基四氮唑）为红色这些生化性状可用来与其它支原体相鉴别检验程序：图17-3标本采集：痰、咽拭、鼻咽洗液、支气管分泌物，以拭子为好标本直接检查：电镜观察、PCR检测分离培养与鉴定：牛心消化液+20％小牛血清+新鲜酵母浸液加醋酸鉈、青霉素等抑制细菌生长5%CO2，培养10～20天（不利于临床快速诊断）鉴定：典型菌落、发酵葡萄糖、不利用精氨酸和尿素还原美兰和TTC、吸附红细胞等抗体检测ELISA：检测P1蛋白，敏感性和特异性好补体结合试验双份抗体效价升高4倍以上诊断主要检测IgM间接血凝试验（IHA）测抗体,2～3周高峰检测IgM抗体，特异性不高冷凝集试验非特异冷凝集素人感染支原体后，血清中出现的一种IgM型非特异性抗体（冷凝集素）。在4°C条件下可凝集人O型红细胞。

冷凝集素效价升高可在传染性单核细胞增多症和支原体所致的非典型性肺炎抵抗力对热抵抗力与一般细菌相似耐冷，-70℃可长期保存4℃存活不超过3天对干燥敏感无细胞壁，对β-内酰胺类药物耐药；对作用于菌体蛋白合成的抗生素敏感微生物学检查

分离培养血清学诊断--冷凝集实验、补体结合、间接血凝试验快速诊断（ELISA-检测抗原、抗体）（基因—PCR检测DNA）解脲脲原体

(Ureaplasmaurealyticum,Uu)解脲脲原体又称溶脲脲原体，支原体T株1954年Shepard首先从非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分离获得是人类泌尿生殖道中最常见的寄生菌T株临床意义Uu寄居于人泌尿生殖道所致疾病——非淋菌性尿道炎(NGU)主要传播途径是性传播和母婴垂直传播Uu的致病机制侵袭性酶磷脂酶——分解细胞膜中的磷脂尿素酶——分解尿素产氨，产生细胞毒性作用IgA蛋白酶——降解粘膜表面的IgA毒性代谢产物微生物特性形态结构以球形为主革兰染色阴性，Giemsa染色呈紫蓝色无细胞壁，细胞膜为三层膜结构解脲脲原体微生物特性培养特性营养要求较高，生长需要胆固醇、酵母和尿素。不分解葡萄糖和精氨酸,利用尿素产碱最适温度37℃，最适pH5.5～6.5，5％CO2在固体培养基上，2天可形成极小的菌落（Tinycolonystrain）所以称T株抗原构造：脂多糖抗原和蛋白质抗原脲酶抗原——是Uu的种特异性抗原分离培养采用pH5.5~6.5的液体培养基，内含尿素和酚红指示剂。37℃培养，培养基颜色由黄变红，判为阳性鉴定培养和形态特征分解尿素、不分解葡萄糖和精氨酸MIT和GIT人型支原体（M.hominis）Mh主要寄居于生殖道，女性携带率高通过性接触传播引起妇科疾病或新生儿感染形态结构与解脲脲原体相似分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖固体培养基上可形成典型“油煎蛋”样菌落MYCOPLASMAIST2方法R1R2运送溶解R1+R2接种试剂条(55µl)+2滴矿物油O Uu Mh Uu Mh

>104

>104 4 2 1 1 4 1 0.12 1 2MycoplasmaIST237°C培养24~48hMYCOPLASMAIST2鉴定生长对照:

首先判断如果(+)è

观察其他孔如果(-)è不再判断1孔鉴定解脲脲原体:高浓度林可霉素抑制Mh生长1孔鉴定人型支原体:高浓度红霉素抑制Uu生长红色

è

阳性(+)黄色

è

阴性(-)MYCOPLASMAIST2计数原理:含标准抑制剂浓度104CCU(颜色变化单位)致病临界值,常用结果:如果标本中菌数等于或大于104颜色发生变化

红色

(+)è

计数>104CCU

黄色

(-)è

计数<104CCUUu:结果判断必须在20和24h Mh:结果判断在24和48h后MYCOPLASMAIST2药敏试验治疗常用的9种抗生素:环素类:

四环素和多西环素大环内酯类:

交沙霉素,红霉素,阿奇霉素,克拉霉素喹诺酮类:氧氟沙星,环丙沙星林可酰胺类:

原始霉素检测2个浓度:结果以S,I,或R表示MYCOPLASMAIST2结果判断首先检查尿素-精氨酸肉汤:确认肉汤不混浊(污染)观察颜色试剂条:即使颜色由黄色至橙黄色轻微变化也应判断为阳性除计数孔:阳性结果必须是红色特殊情况: 肉汤 试剂条 - + 试剂条污染/或操作不正确 + -

支原体量少用A7琼脂确认穿通支原体

（M.Penetrans,Mpe）1990年从AIDS患者尿中分离出Mpe能吸附宿主细胞并能穿入细胞内Mpe、发酵支原体、梨支原体是加速AIDS进程的协同因子

第十八章

衣原体chlamydia一、概述能通过细菌滤器、严格细胞内寄生的、独特发育周期的原核细胞型微生物。生物学分类处于立克次体和病毒之间。现归属细菌。

共同特征①0.2-0.4μm，圆形或椭圆形；②有细胞壁，G-；③二分裂繁殖，有独特的发育周期。原体始体（网状体）④寄生在活的易感细胞内：柱状上皮和杯状上皮。

⑤对多种抗生素敏感。包涵体(inclusionbody):含繁殖的始体和子代原体的空泡。宿主细胞破裂，释放出的原体则感染新的细胞。具有感染性的原体通过胞饮作用进入宿主细胞原体逐渐增大成为始体。始体无感染性，但能在空泡中以二分裂方式反复繁殖，形成大量新的原体，积聚于细胞质内成为各种形状的包涵体。原体(elementarybodyEB)在细胞外，是发育成

熟的衣原体，具有高度的感染性，无繁殖能力。个体小，有细胞壁。始体(initialbody)在细胞内，不具感染性，

有繁殖能力，可发育成许多子代原体。个体大，无细胞壁。形成包含涵体。原体（elementarybody,EB）始体（initialbody）[网状体（reticulatebody,RB）]小而致密大而疏松有胞壁，发育成熟

无胞壁高度感染性

无感染性无繁殖能力

繁殖能力胞外稳定性强胞外稳定性弱,胞内稳定性培养鸡胚卵黄囊接种致病物质内毒素：外膜蛋白：阻止吞噬体和溶酶体的融合

种类：沙眼衣原体肺炎衣原体鹦鹉热衣原体

二、主要致病性衣原体沙眼衣原体chlamydiatrachomatis:

三个亚种（汤非凡1955年世界上首次分离培养出沙眼衣原体）1、沙眼亚种沙眼

结膜充血及滤泡增生→结膜瘢痕→眼睑内翻、倒睫→角膜血管翳→影响视力或致盲

直接或间接接触传播2、包涵体结膜炎

成人结膜炎引起滤泡性结膜炎。

成人结膜炎症状类似于沙眼前期症状。婴儿结膜炎（产道感染）

不损伤角膜，不会致失明。3、泌尿生殖道感染

男性尿道炎最常见的病因

可转慢性，合并附睾炎前列腺炎。女性尿道炎、宫颈炎、宫颈糜烂、子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎等。仅次于淋球菌感染后果：不孕不育，流产，宫外孕等

4.性病淋巴肉芽肿：由性病淋巴肉芽肿生物变种引起，主要由性接触传播。

咽炎、鼻窦炎和气管炎、肺炎等。起病慢，先有上呼吸道症状，1-2W上呼吸道症状消失，咳嗽（干咳）加重，持续1-2个月。

还可引起心肌炎、心包炎和心内膜炎，还发现与冠心病的发生有关

肺炎衣原体微生物学检查1查包涵体

吉姆萨染色，原体紫色，

始体蓝色；碘液染色3查菌体：免疫荧光荧光显微镜下如见亮绿色、边界清晰的圆形颗粒，或柱状细胞内查见亮绿色包涵体4查抗体：ELISA

第19章立克次体rickettsia一、概述立克次体是一类节肢动物为传播媒介、严格细胞内寄生的、原核细胞型微生物。

立克次体的共同特点（一）：1．大小（0.3-0.6×0.8-2.0μm）

介于细菌和病毒之间。2.有多种形态（球形和杆状多）。3.有细胞壁，结构与G-菌相似，

G-但不易染色；

吉姆萨染色紫蓝色。4．专性细胞内寄生。

立克次体的共同特点（二）：

5.自然疫源性疾病。6．节肢动物为传播媒介。7.人畜共患病的病原体。8．对多种抗生素敏感，对磺胺药不敏感。

二、主要致病性立克次体病原体传染源传播媒介所致疾病普氏立克次体病人人虱流行性斑疹伤寒斑疹伤寒立克次体鼠跳蚤地方性斑疹伤寒恙虫病立克次体鼠恙螨恙虫病Q热柯克斯体家畜蜱Q热

三、检查

某些立克次体与变形杆菌具有共同的抗原成分，用变形杆菌代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，以检测人或动物血清中有无相应抗体，这种交叉凝集试验称为外斐反应（Weil-Felixreaction）。辅助诊断立克次体感染。

变形杆菌OX菌株的菌体抗原立克次体抗体外斐反应立克次体抗原＝外斐反应（Weil-Felixreaction）立克次体变形杆菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次体+++++-斑疹伤寒立克次体+++++-恙虫病立克次体--++++贝纳柯克斯体---五日热巴通体---几种微生物的特征比较

性质病毒细菌立克次体支原体衣原体真菌细胞结构非细胞原核原核原核原核真核大小（um)0.01~0.30.5~30.2~0.50.2~0.30.3~0.55~可见细胞壁—++—++细胞器—++