多聚酶链式反应扩增DNA课件全解 人教课标版

课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段课题21自学提纲：知识回顾：1.DNA分子的结构（外侧、内侧、基本单位）；2.DNA复制过程和特点；3.PCR技术概念及应用。基本概念：变性、复性、TaqDNA聚合酶、引物理解PCR技术的原理掌握PCR技术的全过程比较PCR技术和体内DNA复制的异同点。自学提纲：知识回顾：21、DNA分子的3’端与5’端-OH端为3’;磷酸基团的末端为5’。2、DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成。1、DNA分子的3’端与5’端3解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打开DNA双链模板合成子链原料催化子链合成使DNA聚合酶能从引物3’端开始连接脱氧核苷酸

思考：3、体内DNA复制的条件是什么？体外扩增DNA如何提供相似环境？变性（80-100℃

）Taq聚合酶（耐高温）15—30个核苷酸构成DNA或RNA解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打4DNA双链单链变性（加热80-100℃

）复性（缓慢冷却）4、DNA分子的热变性原理：变性的目的：复性的目的：解开双链有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合DNA双链单链变性（加热80-100℃）复性（缓慢冷却）45一、PCR技术的原理利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。体外DNA复制的条件：

四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。复制的方向：子链的5’端向3’端延伸。一、PCR技术的原理利用DNA分子的热变性原理，通过控6二、PCR的反应过程每个循环包括：变性——复性——延伸

从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。二、PCR的反应过程每个循环包括：变性——复性——延伸7三、实验步骤：准备好PCR反应体系的配方用微量移液器按配方在往微量离心管中加入各组分盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁混合反应液离心10分钟将离心管放入PCR仪上，设置好循环程序进行反应三、实验步骤：准备好PCR反应体系的配方用微量移液器按配方在8注意事项：详见操作提示

四、结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→测定→计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍注意事项：详见操作提示四、结果分析与评价DNA含量的测定9PCR技术与体内DNA复制的区别：1.PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要；2.PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物体内的聚合酶在高温时会变性；3.PCR一般要经历三十多次循环，而生物体内DNA复制需要生物体自身的复制。PCR技术与体内DNA复制的区别：1.PCR不需10练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是A古生物学、刑侦破案、DNA序列测定B诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学CDNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘D诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是112、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技术最突出的优点是A原理简单B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐热性D快速、高效、灵活、易于操作2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PC124、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是A反复洗涤B不怕外源DNA污染C高压灭菌D在—20℃储存4、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须133.下列关于“观察洋葱根尖细胞有丝分裂”实验的叙述，正确的是A.通过观察细胞内染色体的行为判断细胞所处的时期B.装片的制作流程是：解离染色→漂洗→制片C.显微镜下观察到处于有丝分裂中期的细胞最多D.显微镜下观察到的分生区细胞呈正方形，细胞继续分裂【答案】A【解析】有丝分裂不同时期，染色体的行为不同，所以可以通过观察细胞内染色体的行为判断细胞所处的时期，A正确；观察洋葱根尖细胞有丝分裂过程中，装片的制作过程为：解离、漂洗、染色、制片，B错误；有丝分裂过程中，分裂间期占有的时间最长，所以显微镜下观察到处于有丝分裂间期的细胞最多，C错误；观察洋葱根尖细胞有丝分裂实验中，解离步骤细胞已经被杀死，所以不可能看见细胞继续分裂，D错误。4.下列关于“细胞大小与物质运输的关系”实验的叙述，错误的是A.实验的材料和试剂可用马铃薯小方块和蓝墨水替代B.NaOH在体积不同的琼脂块内扩散的速率相同C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而增大D.NaOH扩散的体积与整个琼脂块的体积之比随着琼脂块的增大而减小【答案】C【解析】在“细胞大小与物质运输的关系”实验中，可以用蓝墨水代表进入细胞的物质，马铃薯小方块代表细胞，A正确；NaOH在体积不同的琼脂块内扩散的速率相同，B正确；琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而减小，C错误；由于NaOH在琼脂块中的扩散速度是一定的，因此NaOH扩散的体积与整个琼脂块的体积之比，随着琼脂块的增大而减小，D正确。5.下列关于细胞分化、衰老、凋亡和癌变的叙述，正确的是A.存在血红蛋白的细胞一定是已经分化的细胞B.衰老细胞内酶的活性都降低，细胞核的体积减小C.细胞凋亡是各种不利因素引起的细胞损伤和死亡D.细胞癌变是致癌因子诱发正常基因突变成原癌基因和抑癌基因【答案】A【解析】血红蛋白存在于哺乳动物成熟的红细胞中，该细胞已经高度分化，A正确；衰老细胞内大多数酶的活性都降低，细胞核的体积增大，B错误；细胞凋亡是基因控制的程序性死亡，而各种不利因素引起的细胞损伤和死亡属于细胞坏死，C错误；细胞癌变是致癌因子诱导原癌基因和抑癌基因发生基因突变的结果，D错误。6.下列关于细胞全能性的叙述，错误的是3.下列关于“观察洋葱根尖细胞有丝分裂”实验的叙述，正确的14课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段课题215自学提纲：知识回顾：1.DNA分子的结构（外侧、内侧、基本单位）；2.DNA复制过程和特点；3.PCR技术概念及应用。基本概念：变性、复性、TaqDNA聚合酶、引物理解PCR技术的原理掌握PCR技术的全过程比较PCR技术和体内DNA复制的异同点。自学提纲：知识回顾：161、DNA分子的3’端与5’端-OH端为3’;磷酸基团的末端为5’。2、DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成。1、DNA分子的3’端与5’端17解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打开DNA双链模板合成子链原料催化子链合成使DNA聚合酶能从引物3’端开始连接脱氧核苷酸

思考：3、体内DNA复制的条件是什么？体外扩增DNA如何提供相似环境？变性（80-100℃

）Taq聚合酶（耐高温）15—30个核苷酸构成DNA或RNA解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打18DNA双链单链变性（加热80-100℃

）复性（缓慢冷却）4、DNA分子的热变性原理：变性的目的：复性的目的：解开双链有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合DNA双链单链变性（加热80-100℃）复性（缓慢冷却）419一、PCR技术的原理利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。体外DNA复制的条件：

四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。复制的方向：子链的5’端向3’端延伸。一、PCR技术的原理利用DNA分子的热变性原理，通过控20二、PCR的反应过程每个循环包括：变性——复性——延伸

从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。二、PCR的反应过程每个循环包括：变性——复性——延伸21三、实验步骤：准备好PCR反应体系的配方用微量移液器按配方在往微量离心管中加入各组分盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁混合反应液离心10分钟将离心管放入PCR仪上，设置好循环程序进行反应三、实验步骤：准备好PCR反应体系的配方用微量移液器按配方在22注意事项：详见操作提示

四、结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→测定→计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍注意事项：详见操作提示四、结果分析与评价DNA含量的测定23PCR技术与体内DNA复制的区别：1.PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要；2.PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物体内的聚合酶在高温时会变性；3.PCR一般要经历三十多次循环，而生物体内DNA复制需要生物体自身的复制。PCR技术与体内DNA复制的区别：1.PCR不需24练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是A古生物学、刑侦破案、DNA序列测定B诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学CDNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘D诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是252、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技术最突出的优点是A原理简单B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐热性D快速、高效、灵活、易于操作2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PC264、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是A反复洗涤B不怕外源DNA污染C高压灭菌D在—20℃储存4、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须273.下列关于“观察洋葱根尖细胞有丝分裂”实验的叙述，正确的是A.通过观察细胞内染色体的行为判断细胞所处的时期B.装片的制作流程是：解离染色→漂洗→制片C.显微镜下观察到处于有丝分裂中期的细胞最多D.显微镜下观察到的分生区细胞呈正方形，细胞继续分裂【答案】A【解析】有丝分裂不同时期，染色体的行为不同，所以可以通过观察细胞内染色体的行为判断细胞所处的时期，A正确；观察洋葱根尖细胞有丝分裂过程中，装片的制作过程为：解离、漂洗、染色、制片，B错误；有丝分裂过程中，分裂间期占有的时间最长，所以显微镜下观察到处于有丝分裂间期的细胞最多，C错误；观察洋葱根尖细胞有丝分裂实验中，解离步骤细胞已经被杀死，所以不可能看见细胞继续分裂，D错误。4.下列关于“细胞大小与物质运输的关系”实验的叙述，错误的是A.实验的材料和试剂可用马铃薯小方块和蓝墨水替代B.NaOH在体积不同的琼脂块内扩散的速率相同C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而增大D.NaOH扩散的体积与整个琼脂块的体积之比随着琼脂块的增大而减小【答案】C【解析】在“细胞大小与物质运输的关系”实验中，可以用蓝墨水代表进入细胞的物质，马铃薯小方块代表细胞，A正确；NaOH在体积不同的琼脂块内扩散的速率相同，B正确；琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而减小，C错误；由于NaOH在琼脂块中的扩散速度是一定的，因此NaOH扩散的体积与整个琼脂块的体积之比，随着琼脂块的增大而减小，D正确。5.下列关于细胞分化、衰老、凋亡和癌变的叙述，正确的是A.存在血红蛋白的细胞一定是已经分化的细胞B.衰老细