痰液涂片抗酸染色的结果分析研究 生物技术专业

痰液涂片抗酸染色的结果分析[摘要]目的：通过分析结核病患者的痰液涂片镜检结果，了解浏阳市及其周边各乡镇结核病发生情况，改进技术，以提高镜检准确率。方法：1000份样本均来自2017年1月1日至2017年3月31日到浏阳市人民医院呼吸内科、综合科、儿科、感染科等科室就诊并疑似感染的患者，所有患者取痰液标本，实施抗酸染色，采用显微镜进行检测，统计检测结果。结果：在1000份痰液标本当中，检测结果为阳性的有340份，检测阳性率为34.0%；不同时间段和不同性状痰液的标本的阳性检出率存在很大的差异，清晨痰样本是检出率最高的标本，阳性检出率为41.25%，即时痰样本检出率最低，为17.5%，不同时间段痰液标本阳性检出率相比差异具有统计学意义（P＜0.05）；在不同性状的痰液标本当中，干酪样痰标本阳性检出率最高，达到了57.14%，唾液水样痰标本检出率最低，为2.50%，不同性状痰液标本阳性检出率相比存在明显的差异，具有统计学意义（P＜0.05）。结论：对于结核病患者来说，在进行抗结核治疗之前就需要采集患者的痰标本进行涂片检查，这样可以提高阳性检出率，以便及时发现传染源，做好隔离工作。另外，为了提高检测结果的准确性，需要做好痰液标本的质量控制工作。对于不同时间段取样的痰液标本，质量合格的为清晨痰和夜间痰，检出率比较低的为即时痰，不符合样本的质量要求。为充分保证痰液样本检测的质量，可以选择血性样痰和干酪样痰，更有利于做好对结核病的预防和控制工作。关键词：肺结核病；痰液样本；涂片；抗酸染色；发现率[Abstract]Objective:Toanalyzetheresultsofsputumsmearintuberculosispatients,tounderstandtheoccurrenceoftuberculosisinLiuyanganditssurroundingvillages,andtoimprovethetechniquetoimprovetheaccuracyofmicroscopicexamination.Methods:1000sampleswerefromJanuary1,2017toMarch31,2017toLiuyangCityPeople'sHospitalDepartmentofRespiratoryMedicine,GeneralPediatrics,Pediatrics,InfectiousDiseasesandotherdepartmentsandsuspectedinfectedpatients,allpatientstakingsputumspecimens,Theimplementationofacid-resistantstaining,usingamicroscopetodetect,statisticaltestresults.Results:Amongthe1000samplesofsputum,340positivesamplesweredetectedandthepositiveratewas34.0%.Thepositiverateofsputumsamplesindifferenttimeperiodsanddifferenttraitswasverydifferent.(P<0.05).Thepositiverateofsputumsampleswas41.25%,andthedetectionrateofsputumsampleswasthelowest(17.5%).Thepositiverateofsputumsampleswasstatisticallysignificant(P<0.05)Inthesputumsampleswithdifferenttraits,thepositiverateofpositivesampleswas57.14%,thelowestwas2.50%,andthepositivedetectionrateofsputumspecimensofdifferenttraitswasSignificantdifferenceswerestatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion:Forpatientswithtuberculosis,intheanti-TBtreatmentbeforetheneedtocollectthepatient'ssputumspecimensforsmear,whichcanimprovethepositivedetectionrate,inordertodetectthesourceofinfection,doisolationwork.Inaddition,inordertoimprovetheaccuracyofthetestresults,needtodoagoodjobofqualitycontrolofsputumspecimens.Fordifferenttimesamplesofsputumsamples,thequalityofqualifiedforthemorningsputumandnightsputum,thedetectionrateisrelativelylowfortheimmediatesputum,doesnotmeetthequalityrequirementsofthesample.Tofullyguaranteethequalityofsputumsampletesting,youcanchoosebloodysputumandcheesesputum,moreconducivetothepreventionandcontroloftuberculosiswork.Keywords:tuberculosis;sputumsample;smear;acidpickling;discoveryrate分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色[1-3]。而结核分枝杆菌，是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病，估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。再加上此病具有病情迁延难愈的特点，成为世界性的公共卫生问题，对世界卫生组织提出严峻的调整[4-6]。肺结核病是一种由结核杆菌引起的呼吸道传染病，是一种严重危害人们健康的常见病和多发病，作为肺结核病的重要诊断手段，痰涂片抗酸染色一直受到临床的重视。近年来由于环境的污染和有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。抗酸染色涂片检测抗酸杆菌是控制肺结核病的主要手段,是对结核病的趁早治疗，发现传染得来源，以及诊断有着很大的帮助，所以对痰液涂片抗酸染色结果分析与研究，以提高镜检正确率，对疾病的治疗有着重要的意义[7-9]。1资料与方法1.1一般资料样本均来自2017年1月1日至2017年3月31日到浏阳市人民医院呼吸内科、综合科、儿科、感染科等科室就诊并疑似感染的患者，主要覆盖浏阳市及其周边各乡镇，共1000份，对所有疑似感染患者取痰液标本。痰液标本按照取痰时间的不同可以分为即时痰标本（200份）、清晨痰标本（400份）以及夜间痰标本（400份）；按照痰液标本不同性状进行划分，包括280份干酪样痰标本，300份血性样痰标本，300份粘液痰标本，120份唾液水样痰标本。1.2纳入标准和排除标准1.2.1纳入标准通过胸部影像学检查疑似肺结核疾病或者胸部影像学检查无法排除肺结核疾病，需要进一步进行检查确定；以往有肺结核病史，并且停止治疗时间超过三个月；所有患者的年龄都在18岁以上，并且HIV检测呈现阴性[10]。1.2.2排除标准排除了存在恶性肿瘤史的患者；排除了患有严重肝脏或肾脏疾病患者以及处于妊娠期的患者；排除有既往肺结核病史并且停止治疗小于三个月的患者。1.3检查材料和方法1.3.1检查材料仪器设备和试剂主要包括电子显微镜，酒精灯，抗酸染色试剂等。1.3.2检查方法对于初诊和复诊患者来说，在痰液样本采集数量方面存在一定的差异，初诊患者需要采集三个时间段的痰液，制成三个标本，即清晨痰标本、夜间痰标本和即时痰标本，而复诊患者只需要采集清晨痰标本和夜间痰标本这两份标本即可。标本采集工作完成之后尽快送检验室检测，首先对标本进行编号，然后进行痰涂片，再使用酒精灯对标本进行固定，接着用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，十分钟后用水冲洗，接着使用3%盐酸酒精脱色20秒左右，再用水冲洗，最后用碱性美兰溶液复染20秒左右，用水冲洗，用吸水纸吸干后使用显微镜进行观察。1.4结果判定标准通过检验，发现痰液标本当中含有抗酸杆菌，则可以将检测结果判定为阳性。1.5统计学分析处理应用统计学软件SPSS18.0对本次研究所得数据进行统计学分析处理；计量资料用（x±s）表示，并用t检验；计数资料用χ2检验,用（n.%）表示；P<0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1不同时间段取样痰液标本结核杆菌阳性检出率对比分析在1000份痰液标本当中，检测结果为阳性的有340份，检测阳性率为34.0%；不同时间段和不同性状痰液的标本的阳性检出率存在很大的差异，清晨痰样本是检出率最高的标本，阳性检出率为41.25%，即时痰样本检出率最低，为17.5%，不同时间段痰液标本阳性检出率相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。详细情况见表1。表1不同时间段取样痰液标本结核杆菌阳性检出率对比分析（n.%）时间段不同样本数呈阳性数阳性检出率清晨痰40016541.25%夜间痰40014035.0%即时痰2003517.5%总计100034034.0%2.2不同性状取样痰液标本结核杆菌阳性检出率对比分析在不同性状的痰液标本当中，干酪样痰标本阳性检出率最高，达到了57.14%，唾液水样痰标本检出率最低，为2.50%，不同性状痰液标本阳性检出率相比存在明显的差异，具有统计学意义（P＜0.05）。详细情况见表2。表2不同性状取样痰液标本结核杆菌阳性检出率对比分析（n.%）取样痰液性状样本数量呈阳性数阳性检出率干酪样痰28016057.14%血性样痰30014046.67%粘液痰3003712.33%唾液唾液水样痰12032.50%总计100034034.0%3讨论经过长时间的努力，肺结核疾病的预防和控制工作取得了显著成效。但是近年来，由于环境污染情况不断恶化以及有些地区艾滋病盛行或免疫抑制剂使用不当等因素，导致肺结核疾病的发病率又有所升高[11-14]。肺结核属于一种呼吸系统疾病，具有较强的传染性，并且病情迁延难愈，治疗的难度比较大，对人们的身体健康造成了严重不利的影响，甚至对社会的和谐稳定发展都构成了一定的危害。因此，要对肺结核疾病做好防控工作。而要想做好肺结核疾病的防控工作，防止传染范围扩大，就需要及时对疑似病例进行诊断，如果诊断为阳性，就需要及时隔离治疗[14-17]。引起肺结核疾病的病原菌为结核分枝杆菌，属于分枝杆菌的一种，这种病原菌由于细胞壁内含有大量的脂质，将肽聚糖包裹在里面，因此不容易着色，需要经过加热处理，并且延长染色的时间，一旦染色完成之后，使用酸性脱色剂就很难对其脱色，这也被称为抗酸染色[18-21]。目前，临床上对肺结核疾病主要的诊断方式就是痰液涂片抗酸染色镜检，此种方法检测的准确度比较高，并且符合经济、操作简便等原则，在临床上具有广泛的应用。国际卫生组织对此方法检测的效果也给予了肯定[22]。痰液涂片抗酸染色镜检是对肺结核疾病进行筛查的重要手段，符合世界卫生组织和国家肺部疾病联合会针对发展中国家制定的诊断技术指南，具有很大的优越性，主要体现在以下几个方面：（1）诊断准确。使用痰液涂片抗酸染色镜检方式对胸部影像检查疑似肺结核疾病患者进行检查，阳性检出率比较高，检测结果准确。（2）技术简单，使用的仪器设备比较少，成本比较低。痰液涂片抗酸染色镜检方法操作比较简单，在保证样本质量的前提下，对检验人员的要求不是太高，一般具有实践经验的人员就可以胜任。在检测的过程中使用的设备主要包括显微镜、酒精灯等，设备比较少，因此检测的成本比较低，符合技术指南当中的经济性原则。（3）检测时间比较短。痰液涂片抗酸染色镜检可以快速的得到检验结果，从而根据检测结果对被检验者的具体情况进行分析，得到准确的诊断结果，从而及时发现肺结核患者，并及时对已经确诊的患者进行隔离治疗，防止病情传染扩散[23-25]。通过本文的分析发现，在1000份痰液标本当中，检测结果为阳性的有340份，检测阳性率为34.0%，这就说明目前浏阳市及其周边各乡镇结核病的发病率仍然比较高，防控形势仍然十分严峻，应该更加积极和广泛的开展肺结核疾病的预防控制、健康教育工作以及筛查等工作，以便及时发现肺结核疾病患者，从而及时进行隔离治疗，防止疾病传播。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。针对这种情况，我国卫生部门还需要不断提高对肺结核疾病防控的重视程度，将其作为重要任务来抓，不断降低肺结核疾病的发病率，维护国民的身体健康和生命安全[26-28]。不同时间段和不同性状痰液的标本的阳性检出率存在很大的差异，清晨痰样本是检出率最高的标本，阳性检出率为41.25%，夜间痰标本阳性检出率为35.0%，即时痰样本检出率最低，为17.5%，不同时间段痰液标本阳性检出率相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。这就说明清晨痰标本和夜间痰标本检出率相对比较高，与近年来相关文献研究报告基本一致。要想提高肺结核疾病诊断的准确性，做好痰液标本质量控制工作至关重要，因此需要选择清晨痰标本和夜间痰标本。清晨痰是患者经过一夜睡眠之后咳出的痰液，里边含有较多的抗酸杆菌，因此检出率比较高。夜间痰往往来自下呼吸道，也含有较多的抗酸杆菌，检测的准确率也比较高。即时痰往往来自于上呼吸道，抗酸杆菌的携带量比较少，并且含有唾液比较多，因此阳性检出率比较低。这就告诉我们，对于肺结核疾病患者或者疑似肺结核疾病患者，在提取痰液样本时，尽量选择清晨痰和夜间痰[29]。在不同性状的痰液标本当中，干酪样痰标本阳性检出率最高，达到了57.14%，唾液水样痰标本检出率最低，为2.50%，不同性状痰液标本阳性检出率相比存在明显的差异，具有统计学意义（P＜0.05）。这就说明干酪样痰样本的质量比较好，而唾液水样痰标本的质量比较差，原因分析如下：干酪样痰是由被检验者肺部深处咳出的，里边含有大量坏死的肺部组织，抗酸杆菌的含量也比较高，因而阳性检出率也就比较高，相对于其它性状的痰液标本，干酪样痰液标本是最为理想的标本。因此，在实际的工作当中，也需要尽量选择此种痰液样本。有报道称，唾液水样痰标本为不合格标本，阳性检出率非常低，在实际的工作中也有这种认识，由于其中含有较多的唾液，导致涂抹的痰膜比较薄，在使用显微镜进行检查的过程中，观察视野比较难以确定，使镜检工作的难度增加，检测结果的准确性下降。因此，在实际的工作当中，为了保证样本的质量，对于疑似肺结核疾病患者，提取痰液样本的人员一定要耐心向被检验人员讲解保证样本质量的必要性和重要性，以便获得被检验者的配合。指导被检验者从肺部深处咳痰的方式方法，以便获得干酪样痰，提高检测结果的准确性。另外，在获取痰液样本时，还需要指导被检验者使用清水漱口，防止将被检验者口腔的食物残渣带入样本当中[30]。综上所述，肺结核疾病属于一种严重的传染病，死亡率比较高，对肺结核疾病的预防和控制是我国卫生防控部门重要的工作内容，也是世界卫生组织重点预防和控制的传染性疾病。为了做好肺结核疾病的预防和控制工作，需要加强对肺结核疾病的筛查，而主要的筛查手段就是痰液涂片抗酸染色镜检。痰液涂片抗酸染色镜检是一种良好的筛查方法，具有检测效果好、成本低、操作简单等多种优点。对疑似肺结核患者进行痰液涂片检测，最主要的是获取合格的痰液标本，这是提高检测结果的准确性的重要前提条件和保障。不同时间段取样的痰液标本，其阳性检出率存在较大的差异，其中检出率最高的样本未清晨痰液样本，其次为夜间痰样本，即时痰样本的阳性检出率最低。不同性状的痰液样本也会得到不同的阳性检出率，其中干酪样痰样本和血性样痰样本的检出率相对比较高，最高的为干酪样痰样本，这是质量最好的痰液样本，因此尽量选择干酪痰样本，以提高检测结果的准确性，做好对结核病的预防和控制工作。另外，为了进一步提高检测质量，在实际的工作当中，样本检验人员需要树立质量意识，按照检验工作的标准和要求，以认真负责的工作态度完成检验工作，同时需要和被检验者做好沟通和交流，让其认识到保证痰液样本质量的重要性，从而取得被检验者的配合，以便获取合格的痰液样本，在获取样本之后，需要及时送往检验室，防止样本受损。在工作之余，样本检验人员还需要不断加强业务学习，提高自己的检验技术水平。总之，检验结果是否准确，和送检样本的质量存在直接的关系，这需要引起相关工作人员的重视。同时，我国相关的卫生部门还需要不断加强宣传教育工作，利用各种媒体向群众介绍预防肺结核疾病的方法，提高人民群众预防肺结核疾病的意识，引导群众发现自己患有肺结核疾病时主动接受治疗，只有这样才能不断降低我国肺结核疾病的发病率。参考文献：[1]邹晓艳,杨德远,孔昌盛等.肺结核病患者痰标本性状及采样时间与抗酸杆菌阳性结果分析[J].检验医学与临床,2013,10(3):339-341.[2]赵永胜,赵凤仙.1110份痰标本直接涂片检查抗酸杆菌结果分析[J].口岸卫生控制,2011,16(1):33-34.[3]陈明明,李自越,李岩等.某地区抗酸杆菌阳性携带者痰液检测及结果分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(12):1452-1453.[4]胡英华,梅玲.红花岗区2001~2013年结核痰涂片结果分析[J].心理医生,2015,21(19):238-239.[5]任章勇.关于痰标本涂片培养的结果分析[J].黔南民族医专学报,2016,29(4):238-239.[6]谢爱蓉,吕建新.三种痰涂片前处理方法的染色及消毒效果评价[J].温州医学院学报,2013,43(4):269-272.[7]董仁康,邓懋青,汤琼健等.浅析痰液标本质量对抗酸杆菌检出率的影响[J].基层医学论坛,2011,15(25):844-845.[8]刘燕文,曾少芳,吴龙章等.三种不同涂片法对分枝杆菌涂片阳性率的影响[J].现代医院,2014,14(11):88-89.[9]梁海燕,黄艺,米利古等.不同因素与痰涂片抗酸杆菌检出关系探讨[J].石河子大学学报（自然科学版）,2013,31(1):61-64.[10]刘少娟,孟繁荣,刘志辉等.痰液中MPB64蛋白检测在肺结核诊断中的临床应用及其常见菌对检测影响的研究[J].国际医药卫生导报,2012,18(15):2139-2142.[11]吕建渊,钱建康.高压灭菌后离心沉淀法检查痰液抗酸杆菌的应用体会[J].实用医技杂志,2007,14(36):5077-5078.[12]林雨亭,曹福军,吴峰等.XpertMTB/RIF检测技术与痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌的比较[J].医学检验与临床,2016,27(4):38-39.[13]钟丽云.金胺O荧光染色联合抗酸染色在结核病诊断中的应用价值[J].深圳中西医结合杂志,2016,26(7):23-24.[14]邹自英,朱冰,汤雪晴等.结核杆菌的细菌学、分子生物学和免疫学检测方法评价[J].四川医学,2011,32(5):756-758.[15]郭新枝,陈裕,于永敏等.痰液BACTEC-MGIT960快速结核菌培养对菌阴肺结核的临床诊断价值[J].中国药物与临床,2013,13(2):201-202.[16]赵朝珍,田洪瑞,唐丽,等.2010年南充市肺结核病患者痰涂片镜检结果分析.寄生虫病与感染性疾病,2011(2):96-97.[17] 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2011:266-266[19] 108例结核病变组织抗酸染色结果分析孙亚欣，张志超，董美玲，...

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